龚文华
- 作品数：19 被引量：82H指数：6
- 供职机构：生物化学与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肾腺苷脱氨酶及其结合蛋白的纯化和性质研究
- 2000年
- 目的 :探讨人肾细胞腺苷脱氨酶 (ADA)分子特性。方法 :用免疫亲和层析法分离纯化ADA ,测氨法测定ADA活性。结果 :获得的ADA全酶分子达电泳纯 ,酶比活力为 2 5 6 1.41U/mg ,得率 2 6 .5 9%。经SDS PAGE分析 ,全酶由 45 .6KD的小分子的ADA亚单位和无ADA活性的结合蛋白 (ADAbp ,其分子量为 6 8.1KD和 10 8.7KD)构成。用腺苷或脱氧腺苷为底物 ,全酶的Km值分别为 89μmol/L和 6 7μmol/L。对氯汞苯甲酸能显著抑制酶活性 ,二硫苏糖醇可使被抑制的活性得到部分恢复 ,当腺苷浓度在 5 0～ 15 0 μmol/L范围内 ,ADAbp对ADA活性的抑制率为 18.4%～ 2 1.5 %。结论 :人肾细胞中ADA为小分子ADA亚单位和无ADA活性的ADAbp构成的大分子ADA ,巯基是该酶活性中心的必需基团 。
- 龚文华万福生黎玉李金生罗时文
- 关键词：腺苷脱氨酶
- 猪肾CD26的分离、纯化及动力学研究被引量：1
- 2001年
- 目的：纯化CD26，并对其部分性质进行研究。方法：采用ADA-Sepharose 4B亲和层析法分离纯化CD26，采用Egawa法测定酶活性。结果：纯化达电泳纯，得率为31.3%，纯化倍数达341，用SDS-PAGE测得其分子量为109.2 KD。另外，采用非线性回归分析法求得了CD26对底物Gly-Pro-p-nitroanilide的Km=（101.5±2.2） μmol/L和Vmax=（19.5±0.3） U/mg protein。结论：用ADA-Sepharose 4B亲和层析法可纯化CD26达电泳纯。
- 黎玉万福生龚文华罗达亚
- 关键词：动物实验CD26ADA免疫调节功能免疫缺陷病
- 体外免疫建立分泌卵巢癌反应性单克隆IgG人-鼠杂交瘤被引量：2
- 1998年
- 用正丁醇提取的人卵巢癌细胞ａｏ１０／１７抗原，置于含免疫反应剂的无血清培基中免疫人脾细胞。经融合、筛选和克隆化，建立了９株分泌人源性单克隆ＩｇＧ抗体（ＨｍＡｂ）的人－鼠杂交瘤细胞系ＡＦ１～ＡＦ９。酶标抗体竞争抑制试验表明，其中ＨｍＡｂＡＦ５和ＡＦ８能识别卵巢癌抗原分子上的不同表位；杂交瘤细胞系所分泌的ＨｍＡｂ的效价高。
- 邬淑云温淦升徐方云刘秋如龚文华余鹰
- 关键词：卵巢肿瘤体外免疫
- 分泌人源性单克隆抗体永生化淋巴细胞系的构建被引量：1
- 1999年
- 目的：构建分泌人源性单克隆抗体（ ＭｃＡｂ） 的永生化Ｂ 淋巴细胞系。方法：用正丁醇法提取的人卵巢癌细胞系ａｏ１０１７ 抗原在含免疫活化剂的无血清培基中免疫人淋巴细胞；将制备ａｏ １０１７ 细胞ＤＮＡ 转染经体外免疫的淋巴细胞。采用ＥＬＩＳＡ 筛选和有限稀释法克隆化。结果：建成４ 株分泌抗卵巢癌ＭｃＡｂ 的转染体细胞ＡＴ１ 、ＡＴ２ 、ＡＴ３ 和ＡＴ４ ；ＭｃＡｂ 相加试验表明，它们识别卵巢癌抗原分子的同一表位。ＡＴ４ 已在体外培养４６０ 多天，冻存复苏后仍保持抗体产生能力。夹心ＥＬＩＳＡ 发现，人源性ＭｃＡｂ ＡＴ４ 能与卵巢癌细胞表面可溶性抗原发生免疫反应。结论：体外免疫和ＤＮＡ 转染的结合，可建成分泌人源性ＭｃＡｂ 的永生化Ｂ 淋巴细胞系，为人源性ＭｃＡｂ
- 邬淑云温淦升徐方云刘秋如龚文华余鹰易为民刘丝荪
- 关键词：卵巢肿瘤单克隆抗体B细胞永生化
- 发酵冬虫夏草菌粉对老年虚证患者自由基代谢的影响被引量：2
- 1992年
- 测定了33例老年虚证患者服用金水宝胶囊(每粒含发酵虫草菌粉0.33 g)前后,及停药4个月后的红细胞超氧化歧化酶(SOD)活性和血浆丙二醛(MDA)含量。同时设对照组(26例)服用淀粉胶囊及青年空白对照组(30例)。结果表明:治疗组服药后与服药前比较,SOD 活性明显上升,MDA 含量明显下降(P 值均<0.01);停药4个月后血浆 MDA 仍低于服药前(P<0.01);对照组服药前后这二项指标差异无意义。表明发酵虫草菌粉具有提高 SOD 活性、降低 MDA 含量的功能,有一定的延缓衰老的作用。
- 李金生雷厉刘军冷芬飞龚文华张志钧黄文清廖世忠张洪杨万麟如吴悦苏
- 关键词：冬虫夏草菌抗衰老自由基药理虚证
- DNA转染淋巴细胞表达宫颈癌细胞膜抗原被引量：3
- 1999年
- 目的：证明抗宫颈癌单克隆抗体（ｍ Ａｂ）ＡＵ１４ － １ 识别的宫颈癌抗原决定簇是肿瘤相关基因表达的产物。方法：将宫颈癌（Ｕ１４） 细胞ＤＮＡ 转染原代培养正常淋巴细胞；分别用细胞和夹心酶联免疫吸附试验（ ＥＬＩＳＡ） 检测ＤＮＡ转染细胞膜表面抗原。结果：转染细胞如同Ｕ１４ 细胞一样对ＡＵ１４ － １ 染色呈阳性反应；ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹法分析表明，转染细胞膜表面可溶性抗原呈现４ 条与Ｕ１４ 细胞一致的分子量为２０ ０００ 、４６ ０００ 、６１ ０００ 和６５ ０００ 的蛋白多肽区带。结论：宫颈癌细胞膜表面抗原是肿瘤相关基因编码的低分子量糖蛋白。
- 余鹰邬淑云温淦昇刘秋如徐方云龚文华
- 关键词：DNA转染单克隆抗体子宫颈肿瘤基因转染
- 牛磺酸对缺血大鼠心肌线粒体Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性与MDA含量影响被引量：21
- 1999年
- 目的和方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ，５ｍｇ／ｋｇ）诱导心肌缺血模型。观测心肌线粒体（Ｍｉｔ）中丙二醛（ＭＤＡ）含量、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性及牛磺酸（Ｔａｕ）的影响。结果：缺血组大鼠心肌Ｍｉｔ中ＭＤＡ升高８７８３％、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性分别降低３７５６％和５０２０％（Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量也呈显著负相关（ｒ＝－０．８７，Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量也呈显著负相关（ｒ＝－０７９，Ｐ＜０．０１）。在注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ）前３０ｍｉｎ腹腔注射Ｔａｕ（２００ｍｇ／ｋｇ）则Ｍｉｔ中ＭＤＡ含量、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性均未见显著异常改变。结论：Ｔａｕ可能通过抑制ＭＤＡ的生成实现其保护Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的作用。
- 万福生赵小曼雷厉龚文华
- 关键词：牛磺酸ATP酶
- 牛磺酸对大鼠缺血心肌缺血再损伤的保护作用(英文)被引量：11
- 2004年
- 目的:探讨大鼠心肌缺血损伤与凋亡蛋白Bcl-2和Bax的关系及牛磺酸的影响。方法:选择健康SD大鼠30只,随机分为假结扎组、结扎组和牛磺酸保护组,每组10只。结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型。检测3组心肌线粒体中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、Ca2+-ATP酶活性和丙二醛含量,用免疫组化法检测心肌中的Bcl-2和Bax蛋白。结果:结扎冠状动脉左前降支可致心肌线粒体丙二醛含量升高犤假结扎组:(4.89±0.54)μmol/g;结扎组:(9.85±0.68)μmol/g犦,SOD和Ca2+-ATP酶活性下降犤假结扎组:(8.63±0.35)μmol/(g·s),(13.97±1.97)mmol/(g·s);结扎组:(6.73±0.39)μmol/(g·s),(8.54±2.28)mmol/(g·s)犦。缺血心肌Bax蛋白表达呈显著升高(t=3.931,P<0.01),牛磺酸能明显减少缺血心肌线粒体丙二醛的生成犤牛磺酸保护组:(5.46±0.72)μmol/g犦,降低心肌Bax蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达(t=3.716,P<0.01)。结论:结扎大鼠冠状动脉左前降支所致心肌缺血损伤与Bcl-2和Bax蛋白的表达有关,牛磺酸对缺血心肌Bcl-2和Bax蛋白的表达有较好的调控作用。
- 万福生王青松龚文华罗达亚赵小曼李华
- 关键词：牛磺酸心肌缺血心肌保护BCL-2蛋白BAX蛋白
- 牛磺酸对大鼠缺血心肌Bcl-2和Bax蛋白表达的影响被引量：6
- 2002年
- 目的 :探讨大鼠心肌缺血损伤与凋亡相关基因bcl 2和bax表达的关系及牛磺酸的影响。方法 :结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型。检测心肌线粒体中超氧化物歧化酶 (SOD)、Ca2 + ATPase活性及MDA(丙二醛 )含量 ,用免疫组化法检测Bcl 2和Bax蛋白在心肌中的表达量。结果 ;结扎冠脉左前降支可致心肌线粒体MDA含量升高 ,SOD和Ca2 + ATPase活性下降 ;缺血心肌Bax蛋白表达呈显著升高 ;牛磺酸能明显减少缺血心肌线粒体MDA的生成 ,降低心肌Bax蛋白的表达 ,增加Bc1 2蛋白的表达。结论 :结扎大鼠冠状动脉左前降支导致的心肌缺血损伤与Bc1
- 万福生王青松龚文华罗达亚赵小曼李华
- 关键词：心肌缺血牛磺酸BCL-2BAX
- Fas系统参与介导烧伤后心肌细胞凋亡及牛磺酸的影响被引量：1
- 2005年
- 目的观察Fas系统在烧伤后心肌细胞凋亡中的作用及牛磺酸的影响。方法选健康Wistar大鼠,随机分成对照组(Sham)、烧伤组(造成40%TBSAⅢ度烧伤)和牛磺酸保护组(烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸400 mg/kg)。用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达,免疫组化检测Fas/FasL和Caspase-8/3蛋白表达和荧光法分析Caspase-3活性。结果烧伤组大鼠伤后6 h和24 h心肌细胞凋亡指数分别为8.96±2.10和18.67±2.48,较对照组(0.92±0.34)有显著性升高,Fas蛋白阳性表达指数分别为13.51±1.56和14.55±1.89,也显著性高于对照组(2.46±0.75);Caspase-3活性分别为1.38±0.16和1.96±0.71,较对照组(0.35±0.06)有显著性差异。烧伤组凋亡指数与Fas表达之间有良好的相关性(r=0.86)。牛磺酸保护组细胞凋亡指数为2.14±0.68,Fas蛋白表达为3.71±0.82,Fas mRNA表达为0.17±0.03,Caspase-3活性为0.88±0.16,较烧伤组均有显著性降低。结论Fas系统参与了介导烧伤后心肌细胞凋亡,牛磺酸对烧伤后心肌细胞Fas表达及其信号转导有较好的拮抗作用。
- 万福生龚文华赵小曼余乐涵李华李国辉
- 关键词：FAS细胞凋亡心肌牛磺酸烧伤
