龚薇
- 作品数：34 被引量：62H指数：5
- 供职机构：生物化学与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 法尼醇X受体对HepG2细胞蛋白C表达的影响及机制的初步研究
- 2010年
- 目的观察法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)的天然激动剂鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)对HepG2细胞蛋白C(protein C,PC)表达的影响,探讨其引起变化的可能机制。方法以不同浓度(25、50、75μmol/L)FXR激动剂CDCA刺激HepG2细胞,RT-PCR分别检测各组细胞FXR特异性靶基因小异源二聚体伴侣分子(small heterodimer partner,SHP)及PCmRNA表达变化,并用实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析各组PC的表达量;ELISA检测各组细胞培养上清液中PC蛋白分泌量的变化;瞬时转染结合报告基因检测在人胚肝L02细胞中转入组成性活化的FXR表达质粒(VP-FXR),观察PC启动子活性的改变。结果经FXR配体CDCA刺激的HepG2细胞,随着CDCA浓度的增高,SHP、PC mRNA的表达逐渐增高,细胞培养上清液中PC蛋白表达也逐渐升高,呈剂量依赖性;在人胚肝L02细胞中,活化的FXR可增强PC启动子的活性约2.9倍。结论 CDCA活化FXR引起HepG2细胞中PC mRNA和蛋白表达的升高,其调控机制与PC启动子的活化相关。
- 李佳霖李媛晁帆龚薇许志臻何凤田
- 关键词：法尼醇X受体鹅脱氧胆酸蛋白质CHEPG2细胞
- 人HMGB1 A box和酸性尾端的新型融合蛋白及其应用
- 本发明涉及一种编码人HMGB1A box和酸性尾端的新型融合蛋白的重组质粒，其中HMGB1 A box与酸性尾端之间缺失HMGB1 B box，并且HMGB1 A box与酸性尾端通过柔性连接子连接。本发明还提供该重组质...
- 何凤田龚薇
- 文献传递
- 噬菌体抗体库技术制备胃癌单抗MGd1的抗独特型抗体
- 2005年
- 目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件。方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VLDNA,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库。以MGd1对文库进行4轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-IdScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定。结果VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。抗体ScFv文库经4轮筛选后,在随机筛检的40个克隆中得到17个呈现抗-IdScFv的噬菌体单克隆。在17个克隆中,有3个呈现β或γ型抗-IdScFv。结论应用噬菌体抗体库技术成功制备了针对单抗MGd1的抗-IdScFv,从而为筛选新的胃癌重组抗-Id瘤苗奠定了基础。
- 何凤田李蓉芬郑英如高会广吉清龚薇胡颖
- 关键词：胃癌抗独特型抗体噬菌体抗体库
- 人可溶性APRIL突变体的原核表达与纯化
- 2007年
- 目的制备人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation inducing ligand,sAPRIL)的两种突变体,为寻找APRIL的竞争抑制剂创造条件。方法采用一步反向PCR法,以人APRIL第186位甘氨酸(186G)和187位谷氨酰胺(187Q)残基为突变位点,构建如下两个突变体DNA,即sAPRIL突变体-1(mutant sAPRIL-1,msAPRIL-1)DNA(186G被赖氨酸残基K置换,187Q缺失)和msAPRIL-2 DNA(186G187Q置换为186K187G);测序后将两突变体DNA分别亚克隆于原核表达载体pQE-80L,继而在大肠杆菌DH5α中表达相应突变体蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,经Ni2+-NTA和Sephadex G-75柱层析纯化相应突变体蛋白。结果一步反向PCR结合DNA测序,得到了与上述设计一致的两个sAPRIL突变体DNA。将两突变体DNA分别亚克隆于pQE-80L后,在大肠杆菌DH5α中成功表达了相应突变体蛋白。经Ni2+-NTA柱层析成功地纯化了两突变体蛋白,经Sephadex G-75柱层析成功获得了两突变体蛋白的三聚体分子。结论成功制备了sAPRIL的两种突变体蛋白,为寻找基于sA-PRIL突变体的抗肿瘤分子奠定了基础。
- 郑英如李力李媛张立龚薇刘宝英
- 关键词：增殖诱导配体突变体原核表达肿瘤
- 开展研讨式生物化学论坛,培养医学八年制学生科研思维能力被引量：3
- 2012年
- 在医学基础课程学习阶段形成一定的科研思维体系,对医学八年制学生而言至关重要。笔者在医学八年制生物化学教学中,以理论课所教授知识为基础,引导学生提出问题,在老师的指导下开展研讨式论坛,从而培养学生形成自主科研思维体系,为今后全面提高科研创新能力打下坚实基础。
- 龚薇连继勤黄刚何凤田
- 关键词：医学八年制科研思维
- 教学方法改革在提高生物化学教学质量中的探讨被引量：13
- 2013年
- 教学方法改革是本校推进人才培养模式转型的重要举措。生物化学是高校医学专业的必修课程,是进行教学方法改革的重要学科。为进一步提高生物化学教学质量,本研究在不同层次学生的生物化学教学中选择合适的教学方法,进行课堂教学方法改革,取得了理想的教学效果,从而为教学方法改革的应用积累了一定的经验。
- 黄刚付晓红连继勤龚薇申晓冬何凤田
- 关键词：生物化学教学方法教学改革教学质量
- 盐酸青藤碱诱导EA.hy926细胞自噬及其在抗炎中的作用被引量：8
- 2013年
- 目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞EA.hy926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的EA.hy926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况;荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后EA.hy926细胞酸性小体变化情况。结果经终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理EA.hy926细胞后,与对照组比较,100μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08±0.05)上调(P<0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P<0.05)及EA.hy926细胞中酸性小体减少;盐酸青藤碱可抑制EA.hy926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导EA.hy926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一。
- 杨亭倪振洪龚薇何凤田
- 关键词：盐酸青藤碱自噬HMGB1ERK抗炎
- HMGB1酸性尾端抗菌相关功能位点解析及以该分子为靶点的抗炎措施研究
- 第一部分HMGB1酸性尾端抗菌相关功能位点解析
研究目的:高迁移率族蛋白B1/(high-mobility group box-1,HMGB1/)属高迁移率族蛋白超家族成员,由A box、B box及酸性尾端三...
- 龚薇
- 关键词：高迁移率族蛋白B1抗菌功能原核表达聚合酶链式反应蛋白纯化高迁移率族蛋白B1抗菌功能原核表达聚合酶链式反应蛋白纯化
- 文献传递
- 人类乳头瘤病毒18 E7原癌蛋白对宫颈癌细胞系中组蛋白去乙酰化酶1表达的下调作用被引量：5
- 2010年
- 目的研究宫颈癌中人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染与组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)表达之间的关系。方法运用RT-PCR和Western blot方法检测3株宫颈癌细胞中HDAC1表达水平。经脂质体2000介导将含有HPV18 E7基因的重组表达质粒瞬时转染人宫颈癌C-33A细胞,运用RT-PCR和Westernblot方法检测转染后C-33A细胞中HDAC1的RNA和蛋白水平改变。结果HDAC1在C-33A细胞中表达最高,CaSki细胞中次之,HeLa细胞中最少。C-33A细胞在转染HPV18 E7基因后HDAC1表达降低。结论HDAC1表达高低可能与HPV是否感染及感染亚型有关,HPV18 E7可能直接或间接下调细胞中HDAC1表达。
- 周鹏何凤田刘东擘黄刚龚薇许志臻
- 关键词：表观遗传学宫颈癌组蛋白去乙酰化酶
- 肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子免疫抑制分子的表达及免疫原性分析
- 2007年
- 目的制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子(BAFF)突变体,并对其免疫抑制功能进行分析。方法经原核表达和Ni-NTA层析纯化制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性BAFF突变体;用所制备的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中抗人BAFF抗体的滴度;四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测免疫小鼠血清抑制重组sBAFF和天然sBAFF功能的情况。结果重组蛋白在大肠杆菌中均获得了高效表达;经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均达90%以上;用重组蛋白免疫小鼠均可诱导产生高滴度抗人可溶性BAFF抗体;免疫小鼠血清可抑制重组sBAFF和天然sBAFF刺激淋巴细胞增殖的功能。结论成功制备了可诱导产生高滴度特异性抗体的BAFF免疫抑制分子,为进一步探讨其治疗作用奠定了基础。
- 高会广何凤田李蓉芬吉清黄刚胡大强张立龚薇胡颖
- 关键词：肿瘤坏死因子类
