仝佳
- 作品数：47 被引量：108H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学语言文字文化科学更多>>
- GITRL基因SNP-rs2236876分型方法的比较
- 2015年
- 目的:对3种单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)分型方法进行比较,选择准确有效的SNP分型方法对GITRL SNP-rs2236876A/G进行基因分型。方法:采用Taqman-MGB探针法,限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites,PCR-RFLP)法和直接测序法对GITRL SNPrs2236876A/G进行分型并比较。结果:PCR-RLFP法分型结果直接通过电泳图可见,适合少量的实验对象;TaqmanMGB探针法通过不同的荧光区分不同的基因型,适合大量的实验对象;直接测序法交由测序公司测定,样本数量浮动范围较大,费用较高。结论:Taqman-MGB探针法适用于GITRL基因rs2236876A/G基因分型,PCR-RFLP法适用于基因分型结果的验证,直接测序法适用于鉴定有争议的PCR-RFLP法的验证结果。
- 吴晶晶仝佳陈娟袁靖田洁汤新逸王胜军
- 关键词：TAQMAN-MGB探针PCR-RFLP
- 支气管哮喘患儿血浆中IL-9的检测及临床意义被引量：5
- 2010年
- 目的检测支气管哮喘患儿血浆中白细胞介素-9(IL-9)的水平,探讨IL-9在支气管哮喘发生发展中的意义。方法收集支气管哮喘患儿和健康对照外周血标本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中IL-9和总IgE浓度。结果支气管哮喘急性发作期患儿血浆IL-9水平高于健康对照组(P<0.05),而临床缓解组和健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。支气管哮喘急性发作期患儿血浆IL-9水平与总IgE浓度呈正相关。结论支气管哮喘患儿血浆中IL-9水平升高,与疾病的发生发展关系密切。
- 徐庆雷周红王洪建胡礼仪马斌仝佳陈建国王胜军
- 关键词：支气管哮喘白细胞介素-9酶联免疫吸附试验
- 肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达被引量：1
- 2015年
- 目的利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化。方法首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFast Bac1中,构成重组质粒pFast Bac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFast Bac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞。通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白。结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致。Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70μg/m L,纯化度达90%。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白。
- 赵培培孔枕枕刘海冰茅凌翔苏兆亮仝佳王胜军陈建国
- 关键词：EV71VP1蛋白
- hGITRL_(aa52-177)蛋白在杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的利用杆状病毒系统表达hGITRLaa52-177蛋白。方法PCR扩增获得hGITRL胞外段(hGITRLaa52-177)基因,克隆入pFastBacHTa转移载体,在E.coliDH10Bac内通过转座子Tn7的介导,得到重组杆粒,转染Tn细胞表达目的蛋白。通过SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定目的蛋白的表达。结果重组载体pFastBacHTa-hGITRLaa52-177以及重组杆粒Bacmid-hGITR-Laa52-177构建正确,在Tn细胞内成功表达6×His-hGITRLaa52-177重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Westernblotting显示重组hGITRLaa52-177蛋白相对分子质量约为Mr18000。结论杆状病毒-昆虫表达系统获得hGITRLaa52-177蛋白,为进一步从蛋白质水平研究hGITR/hGITRL对机体免疫调节的影响奠定了基础。
- 唐莉王胜军毛朝明陈君胡正军鲍俊峰仝佳邵启祥许化溪
- 关键词：杆状病毒真核表达
- T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究
- 2011年
- 目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积的变化;HE染色观察肿瘤组织的病理变化;Western blot检测肿瘤组织T-bet的表达,QRT-PCR检测肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平。结果:瘤内注射T-bet质粒载体后Western blot检测发现,肿瘤组织T-bet蛋白表达显著高于对照组;QRT-PCR结果显示,肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。T-bet质粒干预组小鼠肿瘤生长明显缓慢,存活期延长。HE染色组织病理观察可见mT-bet干预组小鼠局部组织淋巴细胞大量浸润。结论:T-bet基因局部注射可延缓小鼠肺癌Lewis皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答能力,增强对已发肿瘤的生长限制作用,为T-bet应用于肿瘤治疗积累试验数据。
- 赵银霞王楷文杨恒郑东苏兆亮仝佳王胜军许化溪
- 关键词：肺癌细胞系质粒小鼠
- T-bet基因shRNA真核表达载体的构建及其功能的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的:构建靶向Th1细胞特异性转录因子T-bet的小发卡结构RNA(shRNA)的真核表达载体,并评价其功能,为开展T-bet相关性疾病的免疫干预研究奠定基础。方法:设计并合成靶向T-bet的shRNA序列,构建真核表达载体,并转染DC2.4细胞;MTT法检测转染后DC2.4细胞增殖能力,用RealtimePCR和Westernblot分别从基因及蛋白水平检测转染前后DC2.4细胞T-bet表达水平变化;RealtimePCR检测IFN-γ的mRNA;流式细胞术(FCM)检测细胞表面CD80、CD86与MHCⅡ类分子表达情况。结果:构建的T-bet靶向shRNA真核表达载体,能够显著抑制DC2.4细胞T-bet的表达,且转染后DC2.4细胞增殖受到抑制,CD80、CD86及MHCⅡ类分子表达下调,IFN-γmRNA水平显著下降。结论:成功地构建了T-betshRNA真核表达载体,转染DC2.4细胞后能有效地抑制其T-bet、IFN-γ的表达,影响其抗原提呈功能。
- 薛渊王胜军何志强石燕周成林马洁仝佳邵启祥许化溪
- 关键词：T-BET真核表达树突状细胞
- 人GITR基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2007年
- 目的:克隆人GITR基因全长编码区的cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从正常人外周血单个核细胞获得GITR基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定。结果:扩增得到的人GITR基因编码区cDNA的全长726 bp,编码241个氨基酸残基,与GeneBank注册的序列完全一致。结论:获得人类GITR基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 仝佳王胜军毛朝明杨云良陈君杨敏
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR调节性T细胞
- 小鼠GITRL基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2004年
- 目的 :克隆小鼠GITRL基因全长编码区的cDNA ,同时对其序列分析。方法 :采用RT PCR方法 ,从小鼠树突状细胞获得GITRL基因的cDNA ,克隆至pMD18 T载体 ,选择阳性克隆并进行序列测定。结果 :扩增得到的GITRL基因编码区cDNA的全长 5 19bp ,编码 173个氨基酸残基 ,与GeneBank中发表的序列完全一致。结论 :获得小鼠GITRL基因的克隆 ,为进一步研究其生物学功能提供基础。
- 王胜军马斌仝佳许化溪杨胜利
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR调节性T细胞小鼠
- Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型IL-25表达水平的变化及意义被引量：9
- 2010年
- 目的以Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型为研究对象,动态观察其IL-25的表达水平,探讨IL-25与关节炎发生发展的关系及其可能的机制,为寻找新的类风湿性关节炎免疫干预新途径积累实验数据。方法采用RT-PCR法扩增目的基因,构建mIL-25标准质粒,QRT-PCR检测模型鼠脾脏及其关节病变局部IL-25的表达水平;应用ELISA技术检测模型鼠血清和脾细胞培养上清IL-25蛋白的含量。结果在Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的发病过程中,模型鼠脾细胞和关节滑膜组织IL-25的mRNA表达水平、均呈持续上升趋势,与对照小鼠相比差异显著(P<0.05)。这种IL-25蛋白和转录水平的表达,随着关节炎症程度的增加而升高。此外,模型鼠脾细胞对ConA的刺激表现出强IL-25表达性应答。结论 IL-25的表达水平与Ⅱ型胶原诱导的关节炎的发生发展密切相关。
- 王楷文周成林王胜军赵银霞杨恒郑东薛渊Sandoghchian Siamak仝佳苏兆亮邵启祥许化溪
- 关键词：IL-25自身免疫性疾病
- 抗环瓜氨酸肽抗体、类风湿因子和白介素-17对类风湿关节炎的诊断意义被引量：4
- 2010年
- 目的:研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)和白介素-17(interleukin-17,IL-17)水平变化及临床应用价值。方法:收集80例RA患者血清,以80例健康体检者血清作对照。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清抗CCP抗体,IL-17含量,特种蛋白仪检测RF含量,并进行统计分析。结果:RA患者活动期上述指标的含量均显著高于稳定期和健康对照组(P<0.01)。RA患者组三项指标的阳性率明显高于正常对照组(P<0.01)。RF诊断RA的敏感性高于抗CCP抗体及IL-17,而抗CCP抗体对RA的特异性显著高于RF及IL-17。两两联合检测及三者联合检测敏感性较单独检测都有所减低,而特异性增高明显,三者联合检测,特异性达到100%。结论:动态监测抗CCP抗体、RF和IL-17有助于观察RA病情变化,提高RA诊断率。
- 张慧毛朝明蒋茜仝佳王胜军邵启祥许化溪焦志军
- 关键词：类风湿关节炎抗环瓜氨酸肽抗体类风湿因子白细胞介素-17
