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利用细胞透膜短肽提高Leptin减少脂肪沉积功能的研究: 引言瘦素(Leptin)作为一种由脂肪组织分泌的肽类激素,通过负反馈作用于下丘脑的体重调节中枢来减少食物摄入和增加能量消耗以减少体内脂肪沉积。体内注射Leptin具有治疗肥胖症的作用,但是血脑屏障却使外源; 李静何祖勇陈瑶生; 关键词：CPP LEPTIN 原核表达脂肪沉积; 文献传递

转基因猪细胞中CMV启动子区域甲基化的研究: 2015年; 为研究转基因猪外源基因表达与启动子区域甲基化的关系,利用流式细胞仪检测体外传代至第5、10和15代的转基因猪成纤维细胞中EGFP荧光强度的变化情况;采用亚硫酸盐测序的方法对这3代细胞CMV IE启动子区域30个Cp G岛的甲基化程度进行测定。结果显示细胞从第5代培养到第10代时荧光变弱,但是当继续培养到15代时EGFP荧光又渐渐变强,但EGFP阳性细胞的比例没有发生变化,均为100%。第5、10、15代细胞启动子区域的Cp G岛甲基化阳性率分别为3.64%±1.25、2.97%±1.03和1.65%±0.74,统计结果表明3代细胞间的甲基化阳性率差异不显著(P>0.05)。表明转基猪成纤维细胞中CMV启动子区域的甲基化程度随着体外培养时间的变化不明显,与EGFP的表达水平变化无明显相关。; 任广彩张英丛佩清陈瑶生何祖勇; 关键词：甲基化启动子 CPG岛转基因猪

两种信号肽引导木聚糖酶从毕赤酵母中分泌的效率差异研究: 木聚糖酶能够催化木聚糖的β-1.4-糖苷键水解生产木糖，在饲料中添加木聚糖酶能够增加饲料的黏度、提高饲料消化吸收利用率和减少排泄物对环境的污染。但是利用微生物自身产生的酶无法满足工业化应用需求，因此工业化水平的异源表达成...; 黄源凯陈瑶生刘海龙何祖勇; 关键词：木聚糖酶信号肽基因拷贝数毕赤酵母

利用ZFN敲除转基因猪细胞中多拷贝EGFP基因: 2014年; 锌指核酸酶（zinc finger nuclease,ZFN）是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂（double-strand break,DSB）.通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~104倍.目前,利用ZFN对动物内源基因进行敲除的研究较多,但对转基因动物中外源多拷贝基因进行敲除的报道较少.本研究首先利用荧光定量PCR法对本实验室培育的两头转基因猪中增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的拷贝数进行鉴定,发现其拷贝数分别为11.95和17.36拷贝;然后将靶向EGFP的一对ZFN转染进拷贝数为17.36的EGFP转基因猪的成纤维细胞中,并通过流式和CEL-1酶切方法检测敲除效率.结果表明,转染400 ng、800 ng和1 200 ng ZFN的切割效率分别为0.97%、1.39%和1.76%,可见随着转染ZFN剂量的增加,ZFN的切割效率逐渐提高.但是,不发绿色荧光的细胞比例却没有明显提高,因此认为,ZFN敲除转基因动物中多拷贝基因的效率还是比较低.; 任广彩张英丛佩清陈瑶生何祖勇; 关键词：锌指核酸酶增强型绿色荧光蛋白转基因猪

利用锌指核酸酶对猪基因组进行定向遗传修饰: 2013年; 人工锌指核酸(zinc finger nucleases,ZFN)在植物和动物细胞中可以有效提高DNA修饰的效率和特异性使它很快就成为当前的一个研究热点。ZFN可使DNA双链断裂,然后依靠细胞中复杂的DNA修复机制修饰特定的基因。本文主要介绍ZFN在生产转基因猪研究中的应用及其未来的应用前景。目前采用传统的基因打靶和体细胞核移植的方法,科学家们已经获得了一批基因敲除猪。然而采用传统的基因打靶技术对哺乳动物体细胞进行遗传修效率较低,而且位点特异性和外源DNA整合效率都难以控制。ZFN能够结合到DNA特定位点上,并产生切割作用,使基因打靶的效率提高了几个数量级。本文将详细介绍目前应用ZFN技术获得基因敲除猪模型的几项研究,以及应用ZFN技术加快生产可用于农业生产和生物医药研究的转基因猪。文中还将讨论ZFN在猪的基因组遗传修饰中的安全性和有效性,以及ZFN技术在生猪产业中的创新性应用。; 张英何祖勇陈清森陈瑶生; 关键词：遗传修饰锌指核酸酶

供体同源臂长度对ZFN介导的同源重组效率的影响被引量：6: 2016年; 应用锌指核酸酶(Zinc Finger Nuclease,ZFN)和序列同源的供体(Donor)作为模板,借助DNA的同源重组修复机制能够对动物基因组实现精确的遗传修饰。目前关于供体长度与ZFN介导的同源重组修复效率相关性的报道相对较少。本研究构建了一对靶向EGFP的ZFN并鉴定了活性,同时设计了一系列不同长度的供体,应用流式细胞分析术,在稳定整合了带有移码突变的EGFP基因的CHO细胞中系统分析了供体长度对ZFN介导的同源重组修复效率的影响。结果发现当同源臂单臂仅有50 bp时,即可有效支持ZFN介导的同源同组,随着同源臂长度的延伸,同源重组的效率有所提高,但要实现高效率的同源重组(较传统方法提高104倍),同源臂单臂长度需要延长至1 000 bp以上。这为今后如何设计合适的Donor,以提高ZFN等基因组编辑工具介导的同源重组效率提供了借鉴。; 聂宇乔艳乐陈瑶生何祖勇; 关键词：锌指核酸酶 DNA双链断裂同源重组供体

应用RGS双荧光替代性报告载体提高CRISPR/Cas9对猪BMP15基因的打靶效率被引量：4: 2017年; 我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts,PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体(RFP-GFP surrogate reporter),并应用流式细胞术分选出双荧光细胞,富集到基因组被CRISPR/Cas9修饰的细胞,使基因打靶效率提高至18%。本研究结果表明,应用RGS双荧光替代性报告载体可以有效提高CRISPR/Cas9在PEF细胞中对BMP15基因的打靶效率,为今后通过体细胞核移植技术培育BMP15基因编辑猪进行了有效的探索。; 王敏石翾黄翔刘小凤覃玉凤刘小红陈瑶生何祖勇; 关键词：BMP15基因

不同毒力PRRSVs感染的猪肺泡巨噬细胞miRNA组学研究: 本实验所用的主要材料为PRRSV高致病毒株GD株和经典毒株CH-la株，从广东某无PRRS发病史的健康猪场的长大杂交猪分离的PAM。PRRSV感染PAM后进行smallRNA高通量测序与分析，对筛选到的关键miRNAs进...; 肖书奇汪亮亮高进涛李明何祖勇周恩民陈瑶生; 关键词：巨噬细胞

流式细胞术在本科实验教学中的应用被引量：1: 2022年; 流式细胞术是一种功能强大的先进生物检测分析技术,在生物医学等研究中发挥着重要的作用。许多高校都购置了流式细胞仪,但在本科教学中应用却很少,仅专业技术人员或者研究生能够操作。为了让本科生有机会学习和掌握流式细胞术,在生物科学综合实验课程中增加流式细胞术的理论知识、实验与仪器操作、结果分析等内容,用流式细胞仪来检测细胞的转染效率,并与传统的倒置荧光显微镜检测方法进行比较。将流式细胞术引入本科实验教学,不仅普及了流式细胞术知识,丰富了实验教学内容,使本科生了解前沿研究方法与技术,而且培养他们的科研创新思维和分析能力,同时也提高流式细胞仪等大型精密仪器的使用率。; 吴映霞陈笑霞孙彩云何祖勇张楚英张雁; 关键词：流式细胞术本科教学细胞转染

精确编辑两广小花猪MSTN基因信号肽获得双肌臀克隆猪: 引言肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是骨骼肌生长发育的负调控因子,属于转化生长因子β(transforming growth factor-β)超家族成员.研究表明MSTN 包含3 个外显子,2 个内含子....; 李瑞强王敏石翾魏子璇曾武刘小红陈瑶生何祖勇; 关键词：MSTN 信号肽

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何祖勇

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