张万菊 作品数:27 被引量:156 H指数:6 供职机构: 上海市公共卫生临床中心 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
多重PCR检测方法和液态芯片技术在呼吸道病毒检测中的应用研究 被引量:2 2014年 目的 评估澳大利亚维多利亚感染性疾病参比实验室(The Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory,VIDRL)的呼吸道病毒多重PCR检测方法和Luminex公司多指标同步分析液态芯片技术-呼吸道病毒检测试剂盒(xTAG RVP),应用于多种常见呼吸道病毒检测的优势和缺点,为更好地、有针对性地选择合适技术进行临床实验诊断或公共卫生应急检测提供依据.方法 使用VIDRL的呼吸道病毒多重PCR检测方法和Luminex公司xTAG RVP试剂盒对198份临床流感样症状患者的咽拭子标本进行常见呼吸道病毒的核酸检测.结果 198份临床标本经VIDRL多重PCR方法和xTAG RVP方法检测,阳性率分别为38.89%和45.45%,符合率为72.22%.单一病毒的符合率为87.88%~100%.结论 xTAG RVP方法与VIDRL多重PCR方法相比,两者在常见呼吸道病毒检测中的特异性和敏感性相近,xTAG RVP方法具有明显的快速和高通量的优势. 张万菊 管文采 田棣 何静 刘祎 徐磊 钱方兴 俞慧菊 李扬 揭志军 胡芸文关键词:聚合酶链反应 人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白的原核表达及纯化 被引量:6 2009年 目的表达并纯化人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白。方法用RT-PCR法从人甲型流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)中扩增NS1基因,克隆入原核表达载体pTXB1,构建重组原核表达质粒pTXB1/NS1,经酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达形式和表达量。经几丁质柱亲和层析纯化表达蛋白,串联飞行时间质谱仪检测其相对分子质量。结果所构建的重组表达质粒pTXB1/NS1序列完整,插入的基因片段全长690bp。以1.0mmol/LIPTG37℃诱导4h,重组蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的50%以上。破菌上清及沉淀中均有目的蛋白表达。纯化的NS1蛋白纯度达95%以上,相对分子质量约为26000。结论已成功表达并纯化了人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白,为其进一步的研究奠定了基础。 麻粉莲 李引乾 郑丽舒 张骞 张万菊 张钫 刘斌 侯云德关键词:H1N1亚型 NS1蛋白 原核表达 纯化 流感病毒神经氨酸酶广谱抑制多肽的筛选研究 被引量:4 2007年 以纯化的流感病毒颗粒H1N1、H3N2为靶点对噬菌体展示的随机12肽库进行了筛选。经ELISA、神经氨酸酶抑制活性鉴定,获得52个阳性噬菌体克隆。根据测序和氨基酸序列分析,挑选出不同克隆间同源性最高的6条多肽进行化学合成。神经氨酸酶抑制活性实验显示,6条多肽中54-N1和69-N2的抑制活性最强,对N1、N2和乙型流感病毒三种流感病毒神经氨酸酶均有明显的抑制活性,54-N1的IC50值为7.486~14.693μmol/L,69-N2的IC50值为6.605~13.007μmol/L。同时,54-N1和69-N2可抑制流感病毒在MDCK细胞中的生长。病毒空斑抑制实验显示,54-N1和69-N2可明显抑制空斑形成的大小和数目。通过分析,54-N1的IC50值为18.38-31.76μmol/L,69-N2的IC50值为16.56-25.49μmol/L。两条多肽的浓度在高达10mmol/L时仍对细胞无任何毒性。54-N1和69-N2作为新的流感病毒神经氨酸酶抑制剂,与现有NA抑制剂Oseltamivir进行了比较和讨论,为进一步研制局部应用的广谱抗流感病毒的鼻腔喷雾剂奠定了基础。 匡治州 郑丽舒 段招军 漆正宇 瞿小旺 刘文培 张万菊 李丹地 高寒春 侯云德关键词:流感病毒 神经氨酸酶抑制剂 噬菌体展示 胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性分析 被引量:13 2013年 目的了解胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性。方法分别用甲型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)和甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)对171例疑似甲型H1N1流感(2009)患者鼻咽拭子标本进行检测,以实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)核酸检测结果为参考,比较胶体金免疫层析试剂盒对不同病程以及不同病毒核酸载量标本检测的敏感性。结果 2种试剂盒的检测敏感性与标本的病毒核酸载量呈正相关(P<0.01),病毒载量≥108拷贝/mL时均可达73.3%。同时,2种试剂盒的阳性检出率与标本的病程呈负相关(P<0.01),发病1~2 d时分别为66.7%和62.5%,推测其在实际应用中的理论敏感性分别可达77.3%和74.6%。结论胶体金免疫层析试剂盒检测甲型H1N1流感病毒(2009)在发病初期及病毒载量较高时有较好的检测效果,可帮助临床早期诊断和海关口岸等机构的现场筛查。但鉴于胶体金免疫层析法自身的局限性,其结果只能作为初步参考,最终的确认结果应以PCR结果为准。 田棣 何静 刘祎 张万菊 徐磊 陈功祥 周志统 胡芸文关键词:胶体金免疫层析法 实时荧光定量聚合酶链反应 2009-2011年上海ARTI人群中小RNA病毒感染的分子流行病学研究 被引量:3 2015年 目的 探讨上海地区急性呼吸道感染(ARTI)人群中小RNA病毒感染的流行规律及临床特征.方法 采用套式多重RT-PCR方法,同时检测鼻咽拭子标本小RNA病毒和其他8种常见呼吸道病毒.对其中小RNA病毒阳性标本进行基因分型,并进一步分析其流行病学和临床特征.结果 2282份鼻咽拭子标本中检出小RNA病毒阳性185例(8.1%),其中鼻病毒(HRV)为151(81.6%)例,肠道病毒(EV)为34(18.4%)例.HRV-A(61.6%)是HRV的主要亚型.HRV在0-4岁组及65岁以上组中检出率高于FluA、RSV等常见呼吸道病毒.HRV和EV在不同季节均有检出,其中HRV在秋冬季达到高峰.HRV引起的URTI和LRTI的比例分别为62.3% (94/151)、37.8% (57/151),而EV感染病例均为URTI.HRV感染阳性的LRTI病例中亚型与LRTI的发生无显著相关性(P>0.05).结论 本研究表明,2009-2011年小RNA病毒成为上海地区急性呼吸道感染谱的重要组成部分,其中HRV(HRV-A)为主要病原.HRV是0-4岁组及65岁以上组中最常见的呼吸道病毒,并以秋冬两季为高发季节.HRV亚型与临床重症并无相关性. 何静 徐磊 王蔚 管文彩 田棣 张万菊 刘祎 钱方兴 揭志军 俞慧菊 李杨 袁正宏 胡芸文关键词:呼吸道感染 RNA 病毒 2010—2013年上海长宁地区成年人急性病毒性胃肠炎的流行病学研究 被引量:1 2016年 目的研究上海长宁地区成年人急性病毒性胃肠炎的流行病学特点。方法收集2010年6月至2013年12月上海长宁地区成年急性胃肠炎患者的粪便标本1554例,采用酶联免疫吸附测定法及多重聚合酶链反应法进行多种病毒检测。结果在1554例病例中,年龄(46.19±15.59)岁,其中男691例,女863例。共检出病毒感染患者407例,检出率26.19%,其中97.05%(395/407)为单一病毒感染,2.95%(12/407)为混合感染。单一病毒感染中轮状病毒189例,诺罗病毒148例,札幌病毒37例,星状病毒14例,腺病毒7例。在不同的月份中,流行高峰在每年的10月至次年2月;病毒阳性组水样泻、呕吐、发热发生率均高于病毒阴性组[95.09%(387/407)比88.14%(1011/1147)、31.20%(127/407)比18.83%(216/1147)、11.06%(45/407)比7.59%(87/1147)],差异有统计学意义(P〈0.01或〈0.05)。结论成年人急性病毒性胃肠炎以轮状病毒感染多见,有较高的水样泻、呕吐及发热发生率,流行高峰在冬季。 徐仲卿 陈健君 朱绍琴 张万菊 胡芸文 钱方兴关键词:轮状病毒感染 诺罗病毒 腺病毒 胃肠炎 H1N1病毒感染小鼠模型中HIF-1α对炎症因子表达影响的作用研究 被引量:3 2018年 目的探讨在H1N1病毒感染小鼠模型中缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)与炎症因子的表达变化及HIF-1α对炎症因子表达的影响。
方法建立H1N1病毒感染小鼠模型,分组为:PBS对照组、H1N1病毒组、H1N1病毒+HIF-1α抑制剂组。采用Luminex、ELISA等方法分别检测血清及肺组织中炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10)的含量。ELISA和Western blot分别检测血清和肺组织中HIF-1α的含量。结果与PBS对照组相比,H1N1病毒组血清和肺组织中炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10)和HIF-1α的含量均明显升高(P〈0.05);与H1N1病毒组相比,H1N1病毒+HIF-1α抑制剂组中HIF-1α和炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10)的含量均明显降低(P〈0.05)。结论在H1N1病毒感染小鼠模型中,炎症因子和HIF-1α的含量明显升高,抑制HIF-1α后,炎症因子含量降低,HIF-1α可能促进炎症因子的表达。 韩朋 朱召芹 张万菊 孟潇潇 朱勇 周晓辉 郭新坤 胡芸文 王瑞兰关键词:H1N1病毒 HIF-1Α 炎症因子 2015—2016年上海地区成人门诊腹泻病例中诺如病毒GⅡ型流行特征 被引量:5 2020年 目的了解2015—2016年上海地区成人门诊急性腹泻病例中诺如病毒(norovirus,NoV)GⅡ型的基因分型及分子流行病学特征。方法收集上海地区2015年3月至2016年12月912份成人急性腹泻粪便标本,采用一步法定量逆转录PCR方法检测NoV GⅡ型,并扩增开放阅读框1(open reading frame,ORF1)的聚合酶和ORF2衣壳区域进行测序分型。结果2015年3月至2016年12月912份成人急性腹泻粪便标本NoV GⅡ型阳性检出率为17.76%(162/912),其中2015年NoV GⅡ型阳性率为15.08%(65/431),2016年阳性率为20.17%(97/481),阳性标本中针对ORF1的RdRp区域和ORF2区域5′端均分型的标本为145份,共有10种型别,分别为GⅡ.Pe_GⅡ.4 Sydney 2012(60份)、GⅡ.P17_GⅡ.17(45份)、GⅡ.P16_GⅡ.13(10份)、GⅡ.P12_GⅡ.3(10份)、GⅡ.P7_GⅡ.6(9份)、GⅡ.P21_GⅡ.21(5份)、GⅡ.P16_GⅡ.4 Sydney 2012(2份)、GⅡ.Pe_GⅡ.17(2份)、GⅡ.P2_GⅡ.2(1份)、GⅡ.P7_GⅡ.14(1份)。结论上海地区2015年春季主要流行GⅡ.P17_GⅡ.17,2015/2016年冬春季主要流行GⅡ.Pe_GⅡ.4 Sydney 2012和GⅡ.P17_GⅡ.17,而2016年秋季主要以GⅡ.Pe_GⅡ.4 Sydney 2012流行为主。进行持续的NoV暴发监测对于确定基因型分布的变化趋势和新毒株的发现非常重要。 陈海丽 杨春忆 张万菊 刘祎 田棣 王蔚 易志刚 朱召芹关键词:诺如病毒 成人腹泻 2010年—2013年上海市长宁区成人轮状病毒感染引起急性胃肠炎的病原学分析 被引量:6 2016年 背景:急性胃肠炎是全球第二大公共卫生问题。轮状病毒(RV)是引起成人急性胃肠炎的病原体之一,对RV感染进行积极研究可为疾病预防和控制提供依据。目的:了解上海地区成人急性胃肠炎患者中RV感染的流行病学特征。方法:采集2010年6月—2013年12月上海市长宁区定点医院成人急性胃肠炎患者的粪便标本和临床资料,采用ELISA和PCR法进行RV及其基因型检测。结果:共采集可供分析的急性胃肠炎患者粪便标本1 554份,其中男691例,女863例,平均年龄(46.19±15.59)岁。189例患者检出RV,检出率为12.2%,其中A组RV 163例(10.5%),B/C组RV 26例(1.7%),A组RV基因型主要为G9型(30.1%)和G1型(25.2%)。RV阳性组水样泻、呕吐症状发生率显著高于阴性组(P〈0.05)。2010、2011、2012、2013年RV检出率分别为12.2%、14.9%、6.8%和16.3%。18-39岁年龄段组RV检出率显著低于40-59岁、60-79岁、≥80岁年龄段组(8.7%对14.8%、14.2%和17.1%,P〈0.05)。RV感染流行高峰出现在每年11月至次年2月。结论:在上海地区,成人RV相关性急性胃肠炎多见于中老年人,流行高峰为冬季,A组病毒基因型以G9和G1型为主。 徐仲卿 沈思兰 钱方兴 朱绍琴 张万菊 胡芸文 孟祥军关键词:轮状病毒感染 胃肠炎 成年人 基因型 基于CRISPR/Cas9技术的MAVS和NFκB1基因敲除MDCK细胞系的构建及初步鉴定 被引量:2 2020年 目的构建线粒体抗病毒信号(mitochondrial antiviral signaling,MAVS)和核因子κB1(nuclear factor kappa B1,NFκB1)基因敲除的犬肾细胞系(Madin-Daby canine kidney cells,MDCK),对细胞系的生长特性、流感病毒(influenza virus,Flu)的增殖特性进行初步鉴定。方法采用CRISPR/Cas9技术,将MDCK细胞的MAVS和NFκB1基因敲除,获得稳定的敲除细胞系。接种Flu并检测培养上清中病毒的血凝(hemagglutinination,HA)滴度和TCID50滴度,与野生MDCK细胞进行比较。结果获得2株稳定敲除的MDCK细胞系MDCK-MAVS-和MDCK-NFκB1-,与野生MDCK细胞同样为贴壁的上皮样细胞。接种Flu后,2株敲除细胞系测定的病毒HA滴度与野生细胞相比无明显差异,TCID50分别比野生MDCK细胞系提高了9.5倍和10倍,其差异有统计学意义(P=0.0316)。结论本研究构建的2株基因敲除细胞系MDCK-MAVS-和MDCK-NFκB1-能够提高Flu的感染力,为Flu的分离培养提供了新的候选细胞系。 田棣 刘祎 陈海丽 杨春忆 王蔚 易志刚 张万菊关键词:核因子 基因敲除