张岩
- 作品数：6 被引量：34H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属中山医院实验研究中心更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 膜-细胞骨架联接分子ezrin对肝癌细胞系生长和侵袭能力的影响被引量：5
- 2006年
- 目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白ezrin在肝细胞肝癌生长和转移过程中的作用。方法分别应用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测ezrin和骨架蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系中的表达。选取高转移潜能SF7721(SMMC-7721经转基因后稳定表达肝细胞生长因子．从而获得高转移潜能的细胞系)和 MHCC97-H细胞系为研究对象,通过RNA干扰技术下调SF7721和MHCC97-H细胞系中ezrin蛋白的表达,观察其运动和侵袭能力的变化:通过四甲基偶氮唑盐检测细胞增殖能力变化;电子显微镜观察细胞伪足,Transwell检测细胞的运动侵袭能力。结果免疫荧光显示ezrin和骨架蛋白表达于细胞质,且双色荧光证实两者存在共表达;高转移潜能细胞系SF7721,MHCC-I、MHCC97-H ezrin和骨架蛋白的表达明显高于低转移潜能细胞系SMMC-7721、 Hep3B、HepG2细胞(x2=13．277,P=0．010; x2=21．815,P<0．01)。β-肌动蛋白在高低转移潜能细胞系的表达差异无统计学意义。通过RNA干扰技术抑制ezrin蛋白表达后,SF7721和MHHC97-H的细胞的增殖和侵袭能力均显著下降。结论 ezrin和骨架蛋白的过表达与肝癌的转移潜能相关,通过下调ezrin的表达可明显抑制肝癌细胞系SMMC-7721和MHCC97-H细胞的增殖和运动侵袭能力。
- 张岩胡美玉陈碧华王志军吴伟忠周康刘康达
- 关键词：细胞支架蛋白质类
- 从体外培养的外周血单个核细胞克隆人白细胞介素-10cDNA被引量：3
- 2005年
- 目的从体外培养的外周血单个核细胞克隆人白细胞介素(hIL)10cDNA。方法淋巴细胞分离液自静脉血中分离出外周血单个核细胞(PBMCs),含ConA的RPMI1640培养24h,提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)扩增hIL-10cDNA,克隆入pUCmT载体,转化感受态细胞DH5α,蓝白筛选,PCR及PvuI、NotI双酶切鉴定,重组DNA测序。结果RTPCR扩增产物560bp,与预期片段大小一致,随机挑取白色菌落,小量提取的质粒经PCR、限制性内切酶酶切鉴定,目的条带与预期片段的大小均一致,测序结果与Genebank公布的hIL10cDNA序列完全一致。结论从PBMC中扩增hIL10-cDNA,克隆至pUCmT载体,方法较为简便,为进一步进行亚克隆及表达研究提供了可靠的前提条件。
- 汪圣毅王玉琦符伟国刘康达张岩张文夺
- 关键词：体外培养单个核细胞细胞克隆白细胞介素-10血管内膜增生
- 膜-细胞骨架联接分子ezrin在肿瘤生长和转移中的作用被引量：3
- 2007年
- 张岩刘康达
- 关键词：EZRIN肌动蛋白肿瘤转移
- 体外RNA干扰下调ezrin表达对肝癌细胞生长和运动能力的影响被引量：18
- 2006年
- 目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白ezrin对肝癌生长和运动转移能力的影响。方法选取4株肝癌细胞系(SF/SMMC7721、MHCC97-H、MHCC-1和HepG2)作为研究材料,针对ezrin基因设计小干扰RNA(siRNA)并通过脂质体转染入细胞。分别通过荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹验证siRNA对ezrin在基因和蛋白水平的下调及下调作用随转染时间的变化。根据Western印迹的结果选取ezrin蛋白表达最低的时间点检测干扰后肝癌细胞生物学行为的改变。运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测肝癌细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞周期;电子显微镜观察细胞伪足的形态和数量改变;transwell实验检测肝癌细胞运动和转移能力的变化。结果荧光实时定量PCR和Western印迹显示ezrin siRNA对ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用。下调ezrin蛋白可显著减慢4株肝癌细胞的生长速度,处于分裂期的肝癌细胞比例明显下降(SF/SMMC7721:28·07%下降到21·53%;MHCC97-H:24·94%下降到13·92%;MHCC-1:19·30%下降到13·2%;HepG2:7·73%下降到4·24%)。肿瘤细胞的运动侵袭能力下降,细胞伪足变短,且伪足的形成数量显著减少(SF/SMMC7721:20·8个/细胞±3·0个/细胞与13·2个/细胞±2·4个/细胞,P<0·05;MHCC97-H:18·4个/细胞±2·7个/细胞与14·0个/细胞±2·9个/细胞,P<0·01;MHCC-1:22·6个/细胞±3·5个/细胞与13·3个/细胞±1·9个/细胞,P<0·01;HepG2:31·0个/细胞±2·9个/细胞与17·8个/细胞±2·3个/细胞,P<0·01;每株计数5个细胞)。穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少(SF/SMMC7721:49·9个±7·7个与31·9±5·2个,P<0·05;MHCC97-H:58·5个±4·2个与33·0个±3·3个,P<0·01;MHCC-1:57·6个±6·1个与28·3个±3·4个,P<0·01;HepG2:37·3个±3·0个与25·3个±2·3个,P<0·01;每株8个视野)。结论ezrin在肝癌生长和侵袭转移过程中发挥重要的作用,有可能成为抑制肝癌复发转移的关键分子。
- 张岩胡美玉陈碧华王志军查锡良刘康达
- 关键词：肿瘤转移EZRIN
- 腺病毒介导的ezrin抑制对肝癌细胞生物学行为的影响
- 2009年
- 膜细胞骨架连接蛋白ezrin是一种与细胞骨架重排，细胞变形运动有关的分子，近年来被报道与肿瘤转移有关。我们以前期研究陋到筛选出的有效小干扰RNA序列为基础，构建以ezrin为靶点的腺病毒小发夹RNA（shRNA）载体，使ezrin在细胞内获得稳定持续的下调，从而为深入研究膜-骨架连接蛋白ezrin在肿瘤细胞运动转移方面的作用及其相关的分子信号转导奠定了基础。
- 王志军张岩刘康达柯爱武
- 关键词：肝细胞小发夹RNAEZRIN腺病毒载体
- 肝细胞生长因子下游分子ezrin对肝癌恶性生物学行为的影响被引量：5
- 2006年
- 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)下游分子ezrin对肝癌细胞生长和转移的影响,为肝癌转移治疗提供新的思路和理论基础。方法选取同一亲本来源的低转移细胞系SMMC7721和高转移细胞系SF7721为研究对象,首先运用免疫荧光、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot比较ezrin和actin的表达差异。进一步应用RNA干扰下调SF7721中ezrin表达,观察其运动和侵袭能力的改变。结果SF7721的ezrin和F-actin表达明显高于SMMC7721,增高的actin为γ-actin。下调ezrin后,SF7721的生长(分裂期：28．07％下降到23．53％)和侵袭能力[穿膜细胞数：(47,75±4．46)个／视野下降到(31．75±2．81)个／视野]均显著下降(P＜0．05),与SMMC7721的生长和转移差异无统计学意义(P＞0．05)。结论ezrin与HGF介导的肝癌生长侵袭相关,有可能成为抑制肝癌复发转移的新靶点。
- 张岩胡美玉王志军查锡良刘康达
