张泉
- 作品数：69 被引量：317H指数：9
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏高校优势学科建设工程资助项目江苏省高校高新技术产业发展项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 重组大肠杆菌碱裂解方法的改进被引量：3
- 2007年
- 为了降低质粒DNA的生产成本,对经典碱裂解法中的溶液III进行了改进,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为指示菌,用标准碱裂解和改进碱裂解法提取质粒pcDNKLYZ,以提取的质粒产量和质量为指标,判断优化碱性裂解法的性价比,结果显示,用改进后的碱裂解法裂解重组菌,提取的pcDNKLYZ质粒产量和质量等指标与标准方法接近,而成本仅为标准方法的1/4,可用于重组质粒的大规模制备。
- 张泉朱鸿飞于可响薛方明孙怀昌
- 关键词：重组大肠杆菌碱裂解法
- 肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2019年
- 根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。
- 冯洁张泉张泉谢建云胡建华高诚高崧
- 关键词：肝螺杆菌环介导等温扩增
- 非洲猪瘟病毒无标签重组B602L抗原制备与鉴定被引量：5
- 2020年
- 为了获得无标签重组抗原用于非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测,本研究将B602L与类弹性蛋白多肽(ELP)基因进行融合表达,利用简单、经济的相变循环(ITC)纯化ELP-B602L融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,再用ITC回收重组B602L蛋白;用抗体阳性猪血清对重组B602L进行鉴定;以重组B602L蛋白为包被抗原进行ELISA鉴定。结果显示重组大肠杆菌能正确表达ELP-B602L融合蛋白,纯化融合蛋白纯度大于85%;TEV蛋白酶活性包涵体切除ELP标签的效率大于90%,回收的重组B602L蛋白纯度大于90%,能与抗体阳性猪血清反应;以重组B602L蛋白为包被抗原建立的ELISA与抗体阳性血清反应为阳性,与抗体阴性血清反应为阴性,OD450值与血清稀释倍数具有线性相关性。
- 张晓凯徐保娟崔晓霞李洋洋周晓慧张鑫宇张泉夏晓莉孙怀昌
- 关键词：非洲猪瘟病毒
- 犬瘟热病毒受体研究进展
- 2022年
- 犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染引起的一种传染病。CDV可感染多种动物,并且给犬业和其他毛皮动物产业造成巨大的经济损失。CDV的受体是与CD发病机制密切相关,主要是SLAM(信号淋巴细胞活化分子)和PVRL4(脊髓灰质炎病毒受体样蛋白4,又称连接蛋白4)。除了这两种受体外,CDV还可能通过其他受体感染动物。本文就CDV感染受体的研究进展进行总结,以期更好地了解CDV的发病机制。
- 朱立麒朱宸孙靖谕曹舒扬谢灵志钱淼殷俊张泉
- 关键词：犬瘟热病毒受体发病机制
- 重组大肠杆菌的高密度发酵放大工艺研究被引量：7
- 2007年
- 在初步筛选获得性价比较好的大肠杆菌高密度发酵培养基的基础上,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为模型,用150 L发酵罐进行工艺放大研究,通过对细菌生长密度(D600 nm值)、质粒产量的比较和分析,探讨用于重组质粒规模化生产的发酵工艺。结果表明:国产培养基中添加100 mL.L-1甘油、磷酸盐和硫酸盐后,重组菌的生长密度和质粒产量均与进口LB培养基接近或略高;收集的菌体分别于-70和-20℃保存,质粒提取和定量检测结果显示保存6周后质粒产量无明显变化;质粒提取和定量检测结果显示每克湿菌用5 mL溶液悬浮,可获得较高的质粒产量。
- 张泉于可响郭晓宇朱鸿飞孙怀昌
- 关键词：大肠杆菌溶菌酶高密度发酵
- 非洲猪瘟病毒与宿主细胞相互作用研究进展被引量：20
- 2020年
- 非洲猪瘟(ASF)自2018年8月在我国暴发,对养猪业构成巨大威胁.该病是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的家养猪高热、急性和高死亡率的出血症和淋巴组织坏死症;认识和了解病原ASFV与宿主的相互作用是理解致病机制的基础和疫病防控的前提.本文对ASFV与宿主细胞受体和内体系统的互作、基因转录和蛋白合成系统的互作、细胞凋亡和内质网应激系统的互作、天然免疫干扰素应答系统的互作、抗原递呈细胞的互作五个方面现有研究进展进行综述;并试图在此基础上理解ASFV的免疫保护和免疫逃逸作用,思考ASFV与宿主互作中需要回答的问题,为研制保护性疫苗和深入认识ASF致病机制提供线索.
- 敖大陈南华钱莺娟钱莺娟陈鸿军郭晓宇张泉
- 关键词：非洲猪瘟病毒宿主相互作用免疫逃逸
- 非洲猪瘟病毒强免疫原性重组CD2v抗原的制备与初步应用被引量：11
- 2020年
- 旨在获得非洲猪瘟病毒(ASFV)强免疫原性重组CD2v抗原,利用生物信息学软件进行CD2v抗原指数分析,将其细胞质内免疫显性区与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,对ELP-CD2v融合蛋白的相变循环(ITC)条件进行优化,在优化条件下进行融合蛋白纯化,利用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,通过免疫转印法对重组CD2v抗原进行鉴定,利用重组CD2v抗原建立ELISA抗体检测方法,与多抗原ELISA对ASFV抗体阳性和阴性血清进行平行检测。结果显示,ELP-CD2v融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC条件为28℃和1.5 mol·L^-1 NaCl,在0.2%Triton X-100存在下进行ITC,纯化的融合蛋白纯度为76.3%;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,再次ITC回收的重组CD2v抗原纯度为91.7%,能被ASFV抗体识别;根据多抗原ELISA检测结果选择血清样品,用重组CD2v抗原ELISA进行检测,结果显示,15份ASFV抗体阴性血清均为CD2v抗体检测阴性,15份ASFV抗体阳性血清均为CD2v抗体检测阳性。这些研究结果表明,ASFV的CD2v蛋白胞内区存在强免疫原性表位,其重组抗原有望用于CD2v的抗体检测。
- 周晓慧肖景景张鑫宇张泉夏晓莉孙怀昌
- 关键词：非洲猪瘟病毒
- CTAB选择性沉淀和纯化质粒DNA工艺的建立被引量：2
- 2008年
- 通过直接在大肠杆菌碱裂解上清中加入十六烷基三甲基溴化铵（CTAB），优化CTAB与质粒DNA量的比例、质粒DNA选择性释放溶液的选择和TritonX－114的使用，建立了简单、易行的大规模质粒DNA纯化工艺。纯化质粒DNA的质量检测结果显示，CTAB纯化的质粒DNA无菌体RNA污染，菌体基因组DNA、内毒素和蛋白含量分别小于100ng／mg、50EU／mg和10μg／mg质粒DNA，OD260／OD280比值介于1．75－1．85之间，超螺旋质粒DNA的比例大于80％，该工艺纯化的质粒DNA能达到或接近FDA规定的人用质粒DNA的各项指标，整个过程不使用动物源性酶和苯酚、氯仿、无水乙醇等有毒或易燃、易爆试剂，成本低廉，工艺环保。
- 张泉于可响袁维峰薛方明孙怀昌朱鸿飞
- 关键词：十六烷基三甲基溴化铵质粒DNA纯化
- 小反刍兽疫研究进展被引量：11
- 2009年
- 徐向明张泉
- 关键词：小反刍兽疫世界动物卫生组织接触性传染病VIRUS肠炎牛瘟
- 实验大鼠和小鼠多种细菌PCR检测与分析被引量：5
- 2018年
- 目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848份,采用PCR方法对上述6种病原体进行检测。结果 SPF级设施均无金黄色葡萄球菌污染,清洁级设施2014年无肺炎克雷伯杆菌污染,其它病原体在不同级别设施内均有不同程度的污染,所有清洁级设施均存在螺杆菌和牛棒状杆菌污染。螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌和牛棒状杆菌在不同级别动物上均检出阳性。螺杆菌、绿脓杆菌阳性率呈下降趋势,而啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、肺炎克雷伯杆菌阳性率则呈上升趋势。结论本研究全面、系统地分析了上海地区实验大鼠、小鼠细菌携带状况,为提高实验动物质量和饲养管理水平起促进作用,为我国实验动物国家标准的修订和完善提供依据和参考。
- 冯洁谢建云魏晓锋冯丽萍张泉张泉
- 关键词：小鼠细菌PCR
