张颖慧
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新型抗HBV化合物:-βL-D4A对DNA聚合酶δ的作用及其机制
- 2008年
- 目的对DNA聚合酶δ进行纯化和鉴定,通过检测β-L-D4A对DNA聚合酶δ的作用,观察β-L-D4A的毒副作用。方法运用多次离子交换层析的方法提取、纯化人Hela细胞的DNA聚合酶δ;检测β-L-D4A对DNA聚合酶δ的酶动力学作用。结果提纯并鉴定了DNA聚合酶δ,收得率是15%,比活力是1 911 ukat/mg。β-L-D4A为抑制剂时,Km是2.45μmol/L,IC50是150.1μmol/L,K i是132.7μmol/L,均提示β-L-D4A对DNA聚合酶δ的抑制作用远小于拉米夫定。结论β-L-D4A是DNA聚合酶δ的竞争性抑制剂,它对该酶的毒副作用远小于拉米夫定,可望成为更高效低毒的抗HBV类药物。
- 李岩林菊生张颖慧王晓燕何星星
- 关键词：核苷类DNA聚合酶Δ酶动力学毒副作用
- 靶向Kus基因的串联短发夹状RNA表达系统对HepG2细胞中Ku70和Ku80的同时干预作用
- 2007年
- 目的在同一载体上串联针对不同靶基因的短发夹状RNA（shRNA）,探讨其同时干预不同靶基因的效应。方法在已筛选到高效干预靶基因Ku70、Ku80的shRNA表达载体的基础上,构建串联的shRNA表达载体psiRNAKus,该载体能同时表达针对Ku70的shRNA和针对Ku80的shRNA,酶切鉴定和DNA测序确定psiRNAKus构建成功后,将其转染入肝癌细胞株HepG2,转染后48 h提取细胞总RNA和蛋白质,RT-PCR和Western blot法检测其干预靶基因的效果。结果psiRNAKus表达的shRNAs能够同时抑制Ku70和Ku80在转录水平和翻译水平的表达。结论在同一载体上串联的针对不同靶基因的shRNA表达系统有望在实验和临床治疗中得到应用。
- 任精华林菊生常莹吴颖张颖慧张强何星星
- 关键词：KU70KU80
- 利用杆状病毒表达载体系统表达重组乙型肝炎病毒核心蛋白被引量：3
- 2007年
- 目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染Sf9细胞进行乙型肝炎病毒核心蛋白表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达情况。结果成功构建了含HBV C基因的重组杆状病毒,而且在昆虫细胞Sf9中表达了乙型肝炎病毒核心蛋白。结论利用Bac to Bac杆状病毒表达系统,成功地表达了乙型肝炎病毒核心蛋白,为进一步研究奠定了基础。
- 高琳琳王晓燕张颖慧李岩邓菲张艳芳林菊生
- 关键词：昆虫细胞
- 新型核苷类似物β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用及其机制被引量：1
- 2008年
- 目的:对人DNA聚合酶δ进行纯化和鉴定,通过检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用,观察β-L-D4A的毒副作用.方法:运用多次离子交换层析的方法提取、纯化人Hela细胞的DNA聚合酶δ;检测β-L- D4A对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学作用.结果:提纯并鉴定了DNA聚合酶δ,收得率是15%,比活力是1911 Ukat/mg.β-L-D4A为抑制剂时,对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学参数分别是Km=1.86 umol/L,2.45 umol/L,IC50 =25.21μmol/L和150.1μmol/L,Ki=24.03μmol/L和132.7μmol/L,结果均提示β-L-D4A对DNA聚合酶β和δ的抑制作用远小于拉米夫定.结论:p-L-D4A是人DNA聚合酶β和δ的竞争性抑制剂,他对这两种酶的毒副作用远小于拉米夫定,可望成为更高效低毒的抗HBV类药物.
- 李岩林菊生张颖慧王晓燕何星星汪鸿高玲玲
- 关键词：核苷类Β-L-D4A毒副作用
- DNA聚合酶γ的提取、纯化和鉴定
- 2007年
- 目的:提取并纯化人宫颈癌细胞(HeLa)的线粒体DNA聚合酶γ(DNA polymeraseγ,Polγ),鉴定其纯度和活性.方法:运用离子交换层析等方法提取纯化HeLa细胞的线粒体Polγ,并用Bradford法检测蛋白浓度.经SDS-PAGE检测蛋白纯度和相对分子量,Western blotting验证蛋白.用α-^(32)P- dTTP掺入法,液体闪烁计数器进行放射性测量以确定Polγ的活性.结果:成功提取并纯化HeLa细胞的线粒体Polγ,经SDS-PAGE鉴定,有一个大约140 kDa的亚基单位,Western blotting证实为Polγ.对其进行150倍纯化,收得率为6%,酶的总活力为4.81 U,比活力为36.17 U/mg.结论:HeLa细胞的线粒体Polγ通过离子交换层析法提取和纯化后活性较高,可用于体外药物线粒体毒性的检测.
- 张颖慧林菊生李岩高琳琳王晓燕
- 关键词：人宫颈癌细胞线粒体离子交换层析
