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表达HAV结构基因的重组腺病毒鉴定及细胞病变分析被引量：3: 2003年; 利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构基因(vp3+vp1),克隆到穿梭质粒pXCX2NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。在光学显微镜下观察到明显的细胞病变(CPE);经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定证明HAV的结构基因已插入到腺病毒基因组中;在电子显微镜下观察发现有二十面体的病毒颗粒。以上结果表明获得了重组腺病毒rAdHAV,纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。; 李嘉琦吴娟孙茂盛戴长柏; 关键词：重组腺病毒细胞病变甲型肝炎病毒

重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗的小鼠保护性被引量：5: 2005年; 目的评价重组表达的轮状病毒(R V)抗原表位疫苗的小鼠体内保护效果及安全性。方法在以FlockH ouse virus病毒外壳蛋白为载体的外源抗原表位呈递系统(FH V-R NA2系统)中构建和重组表达R V V p4蛋白上第223～262位抗原表位(R EA BC)在原核系统犤;质粒pET,大肠杆菌BL21(D E3)犦中表达的REABC免疫小鼠用细胞培养适应的参照RV W a(G1PA型)和SA11(G3P2型)经口腔灌胃攻击,对R V攻击后的免疫小鼠和对照小鼠的感染症状、排毒情况、血清抗体中和病毒感染性效价进行测定和分析。结果R EA BC可诱导免疫小鼠产生较强的抗-W a和抗-SA11株血清中和抗体和特异的免疫记忆反应,有效保护免疫小鼠对W a和SA11的攻击(不腹泻),减少病毒在体内复制水平和排毒时间,与对照组相比差异具有显著性(P<0.001)。结论重组表达RV抗原表位REABC对小鼠具有较好的免疫保护效果和安全性。; 刘晓李嘉琦熊新宇陈瑜娜彭梅代青文喻玲陈元鼎; 关键词：轮状病毒免疫保护性

“蛋白质转导”——基因治疗的一种新方法被引量：1: 2001年; 吴娟李嘉琦; 关键词：基因治疗

腹腔注射重组腺病毒诱导的免疫反应被引量：8: 2002年; 为研究重组腺病毒接种实验动物后的免疫反应性，利用ＲＴ－Ｐ　Ｃ　Ｒ方法，从ＨＡＶ的ＲＮＡ中克隆了结构蛋白基因插入穿梭质粒ｐＸＣＸ２Ｎｏｔ　Ｉ，通过磷酸钙－ＤＮＡ共　沉淀技术，将复制缺陷型腺病毒载体与线形化的ｐＸＣＸ２－ＣＭＶ－ＨＡＶ共转染２９３细胞。一系列检测方法证明产生了重组腺病毒ｒＡｄＨＡＶ。纯化后的ｒＡｄＨＡＶ滴度为１×１０９ＴＣＩＤ５０／ｍＬ　，腹腔注射免疫昆明种小白鼠后，可诱导产生抗ＨＡＶ　ＩｇＧ和ＨＡＶ中和抗体。复制缺陷型腺病毒　可作为发展基因工程病毒疫苗载体的有效系统。; 吴娟李嘉琦孙茂盛戴长柏; 关键词：重组腺病毒腹腔注射免疫反应

腺病毒介导HAV结构基因表达及其产物的免疫学性质检测: 2002年; 目的探讨重组腺病毒免疫实验动物后的抗体反应。方法利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构蛋白vp3+vpl基因,克隆到穿梭质粒pXCX2 NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将E1缺失的复制缺陷型腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。结果通过胞内同源重组,经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定表明,获得了复制缺陷型重组腺病毒rAdHAV。纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。昆明种小白鼠口服rAdHAV后,诱导产生了抗HAV IgG。结论复制缺陷型腺病毒可望成为发展口服病毒疫苗的有效载体系统。; 吴娟李嘉琦孙茂盛戴长柏; 关键词：重组腺病毒 HAV 免疫反应基因表达病毒疫苗

HBV重组抗原表位抗原性的研究被引量：1: 2007年; 目的在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达HBV抗原表位,并对其抗原性进行研究。方法人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。以表达产物为包被抗原对其抗原性进行研究。结果嵌和蛋白与抗-HBs血清可发生特异性结合反应。结论在外源抗原表位表达系统中表达的HBV抗原表位具有良好的抗原性。; 潘云华周东霞李嘉琦陈元鼎; 关键词：HBV 抗原表位抗原性

中国丙型肝炎患者中发现新的丙型肝炎病毒核苷酸序列被引量：1: 2000年; 应用RT PCR和DNA克隆重组技术 ,从中国云南地区丙型肝炎患者血清中克隆到 3个丙型肝炎病毒 (HCV) 5′端非编码区 (5′NCR)核苷酸序列。这 3个序列分别来自 3个不同的丙型肝炎患者。与国内外已发表的HCV原型株同源序列比较研究发现 ,这 3个HCV 5′NCR序列中分别存在部分核苷酸序列的缺失或出现插入重复。在YS2 2 5 15′NCR序列 - 15 5～ - 174位之间 ,有 18个核苷酸序列缺失 ;在YS2 0 3 4和YS2 42 15′NCR序列 - 5 5～ - 5 6位之间 ,分别有 2 8个 (YS2 0 3 4)和 40个 (YS2 42 1)核苷酸序列插入。这些插入序列 (2 8个核苷酸 )在其相邻部位已有存在 ,即为重复序列。YS2 42 1插入序列中有 11个核苷酸出现两次重复。其它部位的核苷酸变异也同已知基因型的相应核苷酸变异有很大差异。结果表明 ,这; 陈元鼎刘名英李嘉琦赵玮彭梅周曾全余文霖李惠琼; 关键词：丙型肝炎病毒核苷酸序列丙肝

Caspases与细胞凋亡被引量：6: 2003年; Caspases是一类蛋白裂解酶,在细胞内以无活性的酶原形式存在。Caspases具有半胱氨酸激活位点和底物裂解位点,当作用于胞内特异性底物后将引起细胞凋亡。Caspases的底物特异性由其裂解位点N-端的4个氨基酸残基决定,其底物裂解部位通常位于靶蛋白质一级结构中Asp残基后,数目由一个到多个不等。Caspase酶系作为细胞凋亡的中枢效应器,在细胞凋亡的启动及进程中发挥着极为重要的作用。无活性的caspases酶原主要通过上游caspseses加工机制、邻近诱导机制或偶联调节亚基机制三种方式被激活而引发细胞凋亡。细胞凋亡是细胞生命活动的基本特征之一。本文就引起凋亡的酶系和细胞凋亡的生化机理加以综述。; 李嘉琦吴娟; 关键词：CASPASES 细胞凋亡底物特异性生化机制

乙型肝炎病毒重组抗原表位检测敏感性研究被引量：1: 2007年; 目的:在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I3位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和West-ernblot检测表达产物的抗原性,并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗-HBs。结果:嵌和蛋白可与抗-HBs特异性结合,其ELISA检测抗-HBs阳性率为77.5%,Westernblot的为68%,而对照试剂盒的为62%。结论:在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性,有诊断应用价值。; 潘云华周东霞李嘉琦陈元鼎; 关键词：HBV 抗原表位抗原性

轮状病毒感染成年小鼠的研究被引量：8: 2004年; 目的研究成年昆明种小鼠对实验感染人轮状病毒(rotavirus,RV)的敏感性。方法在实验条件下,用A组人Wa和恒河猴SA11株RV感染成年昆明种小鼠,观察小鼠的临床反应和排毒情况。结果成年昆明种小鼠感染Wa和SA11RV第二天后出现明显的临床腹泻症状,第四天达到高峰;至少在感染后连续6天的动物大便中可检测到较高滴度的RV抗原。结论成年昆明种小鼠对RV感染有很高的敏感性,可做为动物模型,在RV感染的药物治疗效果评价和疫苗保护性效果评价中具有重要价值。; 李嘉琦刘晓熊新宇陈瑜娜陈元鼎; 关键词：成年小鼠轮状病毒感染 RV 成年感染后腹泻症状高滴度

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