杜惠芬
- 作品数：42 被引量：74H指数：5
- 供职机构：甘肃省医学科学研究院更多>>
- 发文基金：甘肃省科技支撑计划甘肃省卫生行业科研计划项目科技型中小企业技术创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 胰蛋白酶抑制剂抗血管生成实验研究
- 2004年
- 李克生杜惠芬郭红云施苓
- 关键词：胰蛋白酶抑制剂鸡胚乳腺癌癌细胞肺癌
- 再生基因4(REG4)真核表达载体的构建及其蛋白在HEK293T细胞中的表达、纯化
- 2023年
- 目的构建再生基因4(regenerating gene 4,REG4)的真核表达载体,转染人胚肾细胞293T(human embryonic kidney 293T cells,HEK 293T),获得重组人再生胰岛衍生蛋白IV(regenerating islet-derived protein IV,Reg IV)。方法根据NCBI数据库REG4基因序列进行基因优化、合成,将其克隆至pCDNA3.4载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pCDNA3.4-REG4质粒瞬时转染至HEK 293T细胞(实验组),同时以pEGFP-C1质粒作为转染对照组,未转染重组质粒的HEK 293T细胞作为空白对照组。荧光显微镜观察转染对照组转染效率,分别收集实验组及空白对照组细胞和细胞培养液上清,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与免疫印迹试验(Western-Blot,WB)检测Reg IV蛋白表达水平。通过镍柱及丙烯葡聚糖凝胶S-400(Sephacryl S-400)柱进行蛋白纯化,SDS-PAGE及WB对纯化后重组蛋白进行鉴定。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pCDNA3.4-REG4构建成功。转染对照组(pEGFP-C1质粒)荧光显微镜观察结果显示转染效率约50%,表明转染成功。WB结果显示仅在实验组(pCDNA3.4-REG4质粒)的细胞中检测到RegIV蛋白。镍柱纯化时目的蛋白无法与镍柱填料有效结合,SephacrylS-400凝胶柱层析纯化获得了此重组蛋白。结论成功构建了REG4基因真核表达载体并在HEK 293T细胞中成功表达,为深入研究Reg IV蛋白的作用机理及开发潜在的抗癌靶向药物奠定了基础。
- 徐杨杜惠芬李克生柴丹丹石晓玲连晓雯张学良
- 关键词：真核表达瞬时转染蛋白纯化
- 肠炎沙门菌脂多糖抗原的制备及其生物学特性被引量：1
- 2011年
- 目的制备肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)抗原,并鉴定其生物学特性。方法分别用热酚水法和水饱和冷酚法提取SE LPS抗原,免疫BALB/c小鼠,制备LPS单克隆抗体。采用蒽酮-硫酸法测定LPS多糖含量,考马斯亮蓝染色法测定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其分子结构,Western blot分析其反应原性,间接ELISA法分析其特异性。结果热酚水法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为3.413 mg/ml和46μg/ml,水饱和冷酚法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为2.248 mg/ml和31μg/ml;提取的LPS呈现明显的梯度型条带;制备的2株抗LPS单抗(1D3和2E5)均能与提取的LPS发生特异性反应;制备的LPS除了与伤寒沙门菌A～F多价血清发生交叉反应外,与其他各种肠道菌单价或多价血清均未发生反应。结论热酚水法和水饱和冷酚法均可制备出活性、纯度均较好的LPS,但水饱和冷酚法操作简单,且提取的样品纯度高,特异性和反应原性良好,可用于肠炎沙门菌特异性抗原位点单抗的制备及免疫学检测。
- 鲁学萍杜惠芬李克生连晓雯刘红亮袁明叶文华
- 关键词：沙门菌肠炎脂多糖类抗原
- 兰州地区恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG和IgM检测结果对比分析被引量：4
- 2010年
- 采用间接ELISA法对兰州地区435例不同临床类型恶性肿瘤患者血清中的弓形虫抗体IgG和IgM进行检测，以50例健康体检者作为对照，对前者伴发弓形虫病的情况进行统计，得出兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者伴发弓形虫病的特点及规律。
- 连晓雯李克生杜惠芬袁明叶文华周永奇
- 关键词：恶性肿瘤弓形虫病
- 胰蛋白酶抑制剂体外抑制肿瘤细胞降解细胞外基质的研究被引量：11
- 2004年
- 国内已有文献报道,牛肺胰蛋白酶抑制剂对B16黑色素瘤实验性肺转移及Lewis肺癌有抑制作用.肿瘤侵袭与转移机制较复杂,是一个多环节,多步骤的过程,涉及细胞间,细胞与基质间的作用,以及多种基因改变等过程,其中肿瘤细胞穿透细胞外基质尤为重要.利用可降解细胞外基质的蛋白酶抑制剂来抑制肿瘤的侵袭与转移已引起人们极大的兴趣,其中纤溶酶抑制剂--胰蛋白酶抑制剂也倍受关注.已有研究证明,尿胰蛋白酶抑制剂对乳腺癌细胞降解细胞外基质有明显地抑制作用[1].本实验对胰蛋白酶抑制剂抗转移机制进行了研究.
- 杜惠芬李克生郭红云李雪萍
- 关键词：胰蛋白酶抑制剂肿瘤细胞细胞外基质肿瘤侵袭肿瘤抑制
- 柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白的原核表达及纯化
- 2018年
- [目的]原核表达并纯化柯萨奇病毒A组16型(CVA16) VP1蛋白。[方法]根据Gen Bank CVA16 VP1基因序列,合成VP1全基因,连接到载体p ET30a,构建原核表达质粒p ET30a-CVA16-VP1。将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组蛋白。[结果]成功构建重组质粒p ET30a-CVA16-VP1,表达蛋白经SDS-PAGE显示分子量约为38.7 k Da,目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白经复性、纯化,纯度达90%以上;经Western Blot检测,证实表达的蛋白为VP1蛋白。[结论]成功获得了高纯度的VP1蛋白,为此抗原用于临床诊断打下了基础。
- 潘朋歌李克生杜惠芬曾潮宁
- 关键词：VP1蛋白原核表达纯化
- 抗人血红蛋白单克隆抗体
- 本发明涉及一种抗人血红蛋白单克隆抗体，其特异性高，制备方法简便。
- 李克生杜惠芬施岺何晓东王永昌王兰刘元强
- 文献传递
- 金标法检测尿β_2-MG在肾功能损伤诊断中的临床价值被引量：11
- 2019年
- 目的评价尿液β_2-微球蛋白(β_2-MG)金标检测试剂盒在肾功能早期损伤诊断中的应用价值。方法将临床诊断为肾病综合征患者53例、慢性肾炎综合征患者40例、慢性肾衰竭患者18例、高血压肾病患者33例、糖尿病肾病患者23例作为研究组,体检健康者157例作为对照组,以β_2-MG金标检测试剂盒检测β_2-MG水平,并与胶乳增强免疫比浊法检测结果进行比较。结果金标法与胶乳增强免疫比浊法检测尿液β_2-MG阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);金标法检测临床确诊肾病的167例患者尿β_2-MG的灵敏度为76.7%,符合度为85.2%,特异度为94.3%。结论尿液β_2-MG金标检测试剂盒对诊断肾功能早期损伤具有一定的临床应用价值。
- 徐杨杜惠芬李克生李光迪张瑞君柴丹丹连晓雯
- 关键词：Β2-微球蛋白早期肾损伤金标法
- 抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- 2002年
- 李克生杜惠芬
- 关键词：杂交瘤细胞肌红蛋白单克隆抗体杂种细胞分泌抗体
- 单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析
- 2012年
- 对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带。连接转化至克隆载体pMD18-T,测序正确后连接表达载体pET-30a(+),酶切和PCR鉴定正确后转化至BL21(DE3),构建重组质粒pET-30a-hlyA。IPTG诱导表达蛋白,并分析其可溶性。PCR扩增的hlyA基因全长约1 600 bp,成功构建了重组质粒pET-30a-hlyA,转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,结果显示表达的蛋白分子量约为60 kD,以可溶性和包涵体2种形式存在,且以可溶性为主要形式。成功克隆和表达了单核细胞增生性李氏杆菌hlyA基因和溶血素蛋白,并得到纯化蛋白。
- 杜丽娟李克生杜惠芬付宝权连晓雯胡永浩
- 关键词：溶血素原核表达可溶性蛋白
