杨致邦
- 作品数：163 被引量：461H指数：11
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程文化科学更多>>
- 抗幽门螺杆菌rHpaA鸡蛋黄抗体的研制被引量：2
- 2006年
- 目的:采用基因工程技术表达重组幽门螺杆菌黏附素rHpaA,以此蛋白为抗原制备抗rHpaA的高特异性鸡蛋黄抗体。方法:诱导重组质粒pQE30-HpaA在大肠杆菌中大量表达rHpaA蛋白,用rHpaA免疫鸡,以水稀释法联合盐析法提取纯化IgY,采用Bradford法测定含量,SDS-PAGE电泳分析纯度,Western blot鉴定抗原特异性,ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。结果:IgY提纯后含量为24·6mg/ml,纯度约为90%,Western blot显示在相对分子量30000处出现单一条带,ELISA效价为1∶12800,巴氏消毒后未见效价损失。结论:成功获得了高浓度、高纯度、高效价、耐巴氏消毒的特异性IgY,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的特异性IgY制剂奠定了基础。
- 黄进杨致邦黄伟毛小琴邓颖叶翠莲
- 关键词：蛋黄抗体幽门螺杆菌黏附素
- 幽门弯曲菌培养特性探讨被引量：2
- 1990年
- 本文用多种培养基分别加入血清、脱纤维血、维生素、葡萄糖、活性炭和淀粉分离培养幽门弯曲菌,并与直接镜检、脲酶试验比较。该菌在心脑血琼脂平板上生长良好,在血清琼脂、普通血琼脂、空弯血琼脂上几乎不生长。加入活性炭和淀粉能提高检出率。加入维生素K_1和葡萄糖能显著提高检出率,菌落明显增多。
- 杨致邦朱旦胡志琼邹政唐承薇皮新生
- 关键词：幽门弯曲菌
- 一株润滑油降解放线菌的分离鉴定及特性被引量：3
- 2010年
- 以HVI500矿物基础油为唯一碳源进行选择性富集培养,从石油污染土壤中筛选出1株菌,命名为HVI0901。采用CODCr法测定了含HVI500矿物基础油培养液的COD值,由于HVI500矿物基础油被降解而使培养液的COD值降低,确定HVI0901为HVI500矿物基础油降解菌。通过形态学观察、生理生化实验和16S rDNA基因序列比对分析,初步确定HVI0901属于戈登氏菌属(Gordonia)。采用倾注平板法计数不同温度条件下HVI0901的菌落,用CODCr法测定不同pH值条件下HVI500矿物基础油培养液的COD值,探讨了温度和pH值对HVI0901降解基础油的影响。结果表明,HVI0901在不同温度和pH值条件下的降解能力不同,在32℃、pH值为7.8时,其降解HVI500矿物基础油的作用最佳。
- 张楠陈波水杨致邦余瑛黄伟九
- 关键词：生物降解化学需氧量润滑油
- 幽门螺杆菌VacA-HpaA融合蛋白的表达及其免疫学特性
- 2006年
- 目的构建H.pylori细胞空泡毒素VacA与黏附素HpaA融合基因的原核表达载体,诱导其表达融合蛋白,并检测表达产物的抗原性与免疫原性。方法用PCR从pQE30-VacA质粒扩增出VacA基因,克隆至pTrc99A-HpaA载体中,与HpaA基因融合后,插入原核表达载体pQE30中,再将pQE30-VacA-HpaA转化入大肠杆菌DH5α,诱导表达并提纯融合蛋白,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,Bradford法检测融合蛋白含量,Western blot鉴定特异性。将融合蛋白免疫家兔,得到多克隆抗血清,用双向免疫扩散和ELISA检测免疫原性。结果SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量约为65000,表达量在35%以上,主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0·72mg/ml,具有良好的VacA和HpaA抗原性与免疫原性。结论VacA-HpaA融合蛋白已成功表达,且具有良好的免疫原性,为进一步研究制备H.pylori疫苗创造了条件。
- 叶翠莲杨致邦黄进邓颖刘淼吴利先
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素黏附素融合蛋白
- 幽门螺杆菌重组1188蛋白的表达被引量：1
- 2011年
- 目的表达幽门螺杆菌(H.pylori)重组1188蛋白,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从H.pylori标准株NCTC 11637的基因组DNA中扩增hp1188基因片段,插入原核表达载体pQE-30,构建重组载体pQE30-hp1188,经DNA测序分析确认后,转化大肠杆菌DH5α,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Ni2+-NTA树脂纯化表达蛋白,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达形式和表达量。结果重组表达质粒pQE30-hp1188构建成功,所得序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为30.6 kD,与预期一致,蛋白表达量占全菌总蛋白的47%,上清液和沉淀中均有表达,重组蛋白纯化后纯度达90%以上。结论成功克隆hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
- 韩飞杨致邦
- 关键词：克隆
- 粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位的克隆与表达
- 2003年
- 目的 :构建表达粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)基因的重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法 :用PCR方法从霍乱弧菌中扩增CTB片段 ,将其转入原核载体质粒pET-32a( +) ,在大肠杆菌Top10克隆 ,并在BL21中表达。结果 :重组质粒PET-CTB的全长序列经分析与基因文库公布的一致 ;表达蛋白经SDS-PAGE分析 ,相对分子量与文献相符 ;重组蛋白竟Westernblot检测有抗原性。结论 :基因重组菌表达的CTB蛋白可能作为有效。
- 吴利先杨致邦林珊
- 关键词：粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位基因重组基因克隆霍乱弧菌PCR方法
- 幽门螺杆菌球形菌与溃疡复发关系的临床研究被引量：1
- 1998年
- 目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）球形菌与溃疡复发的关系。方法：１１例Ｈｐ阳性活动期十二指肠溃疡（ＤＵ）患者，经标准三联疗法（铋剂１０ｍｇ、四环素５００ｍｇ、甲硝唑４０ｍｇ，每日３次共１４天）治疗后４周，复查胃镜，胃粘膜涂片Ｇｒａｍ及免疫组织化学染色检查Ｈｐ球形菌，以及尿素酶试验和ＰＣＲ检测。结果：ＤＵ愈合率９６％，Ｈｐ根除率８５％。１２人检出Ｈｐ球形菌且ＤＵ均愈合占１０４％，其中９人完成一年随访，溃疡均复发占１０％，涂片均检出典型Ｈｐ。而Ｈｐ根除组８６人随访一年４人溃疡复发占４７％，均为Ｈｐ阳性。比较两组溃疡复发率差异显著（Ｐ＜００５）。
- 余剑平杨致邦杨致邦张玉洪王丕龙
- 关键词：溃疡复发
- 幽门螺杆菌vacA毒性片段与cagA融合基因的构建与表达
- 2004年
- 目的 构建幽门螺杆菌空泡毒素 (VacA)毒性片段和细胞毒素相关蛋白 (CagA)的融合基因 (vlc) ,在原核细胞中表达 ,为Hp双价融合蛋白候选疫苗的研究提供材料。 方法 用GeneSOEing技术将vacA毒性亚单位片段 (v)与cagA保守片段 (c)用疏水性多肽接头 (Gly4Ser) 3 进行拼接 ,构建融合基因vlc,将vlc定向插入原核表达质粒pQE30 ,经DNA测序分析确认后 ,转化E .coliDH5a ,IPTG诱导表达 ,Westernblot分析其抗原性。结果 DNA序列分析表明融合基因的连接顺序、方向正确 ,有一个碱基发生了无义突变。工程菌诱导后可表达相对分子量为 5 8× 10 3 的融合蛋白 ,与预期分子量一致 ,约占菌体总蛋白的 8%。Westernblot显示融合蛋白具有良好的抗原性。结论 融合基因vlc构建成功 ,表达的融合蛋白具有良好的抗原性 ,有望进一步进行免疫保护性机制的研究和Hp疫苗的制备。
- 林珊珊杨致邦刘淼吴利先
- 关键词：幽门螺杆菌空泡毒素细胞毒素相关蛋白融合基因
- “医学综合实验”课程的开设与实践被引量：8
- 2016年
- 构建一门培养学生的创新思维、分析问题和解决问题的综合实践能力以及科研能力的医学综合实验课程。开设了以医学热点问题为主线的"医学综合实验"课,该课程围绕当前医学热点问题,与临床实践密切结合,充分应用多学科基础医学的实验技术。在教学方法上,以学生为主体,通过对临床病例的讨论,提出问题,分析问题,设计实验,通过实验探讨医学问题。从实验设计到实验的全过程均在教师指导下由学生自主完成。经过教学实践,激发了学生的创新性思维,增强了学生的动手能力,提高了学生对科研工作的兴趣。
- 李晓愚李革刘利聆彭惠民王继红汪洋廖红刘含登杨致邦
- 关键词：实验教学
- 幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析被引量：4
- 2009年
- 目的探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性。方法克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白。SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液以及不同的染色时间染色电泳蛋白条带,分析切胶纯化的最佳条件。Western blot鉴定重组HpaA蛋白的抗原性。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,双向免疫扩散法检测血清抗HpaA抗体,鉴定重组蛋白的免疫原性。结果4 mol/L醋酸钠溶液、pH13.0、作用1 h为切胶纯化的最佳条件。经切胶纯化法获得的重组HpaA蛋白体积为6 ml,浓度为0.2942 mg/ml,蛋白量为1.7652 mg,得率为77.1%,West-ern blot显示该蛋白具有良好的抗原性。小鼠免疫血清能与重组HpaA蛋白反应,双扩效价大于等于1∶16,具有良好的免疫原性。结论切胶能够纯化重组HpaA蛋白包涵体,获得高纯度的可溶性重组HpaA蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于进一步的科学研究。
- 范贵荣杨致邦栗俊杰郭丽媛向瑜韩飞
- 关键词：幽门螺旋杆菌粘附素
