王华岩
- 作品数：61 被引量：104H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 过表达磷脂酶D3影响成肌细胞中Akt磷酸化水平被引量：1
- 2009年
- 磷脂酶D(PLD)催化卵磷脂(Phosphatidylc holine,PC)水解产生胆碱(Choline)和磷脂酸(Phosphatidic acid,PA),其代谢产物参与调控细胞内许多生理和生化过程。在过表达磷脂酶D3(PLD3)的成肌细胞(C2C12细胞)中,研究了PLD3对胰岛素刺激后Akt通路激活的影响。研究结果表明,PLD3过表达细胞的Akt磷酸化水平比对照组低,并且不受胰岛素浓度变化的调控。虽然PLD3过表达细胞中Akt磷酸化水平随胰岛素刺激时间的延长而有所增加,但磷酸化总水平比对照组低。磷脂酶D抑制剂丁-1醇能够抑制对照组胰岛素刺激下Akt磷酸化,却不能抑制PLD3过表达细胞的Akt磷酸化,并且PLD3过表达细胞Akt磷酸化水平比对照组高6倍。用磷脂酸(PA)做刺激时,对照组的Akt磷酸化明显增加,而PLD3过表达细胞株的Akt磷酸化没有显著变化;用PA和胰岛素同时刺激时,PLD3过表达株和对照组的Akt磷酸化均比PA单独刺激时降低。这说明PLD3的过表达抑制成肌细胞内胰岛素信号的传导。
- 张军林陈帅张淑金卢智娟杨和平王华岩
- 关键词：AKT胰岛素C2C12细胞
- 通用型双筛选标记打靶载体的构建
- 基因打靶技术通过外源DNA与受体细胞染色体DNA同源序列之间的重组来改造基因组特定靶位点，从而改变生物的遗传特性，是转基因动物研制的关键手段。本研究希望能够建立一套切实可行的基因打靶载体系统，为开展动物转基因研究提供有价...
- 韩翠芹邓捷王华岩
- 关键词：基因打靶技术转基因动物外源DNA基因重组
- 文献传递
- 一种猪羊水干细胞系的建立及检测方法
- 本发明提供了一种猪羊水干细胞系的建立方法，该方法包括以下步骤：1)羊水干细胞的原代分离培养；2)将分离培养的原代羊水干细胞进行机械分离纯化；3)检测并将分离纯化后的羊水干细胞进行培养，建立猪羊水干细胞系，本发明提供了一种...
- 王华岩卢智娟成德张淑金高志敏
- 一种人羊水干细胞系的建立方法
- 本发明涉及一种人羊水干细胞系的建立方法，该方法包括以下步骤：1)羊水干细胞的原代分离培养；2)将分离培养的原代羊水干细胞进行分离纯化；3)将分离得到的羊水干细胞经过单克隆筛选和扩增培养，建立羊水干细胞系。本发明提供了一种...
- 王华岩陈帅王晗窦忠英
- 文献传递
- 不同实验室来源的猪iPS细胞系转录组表达谱分析
- Porcine induced pluripotent stem cells (piPSCs) have significant biomedical and agricultural applications andh...
- 王华岩
- 关键词：转录调控基因表达谱
- 肌肉增强子因子2对猪肌肉生长抑制素启动子活性的调节被引量：3
- 2012年
- 肌肉生长抑制素(Myostatin,Mstn)是转化生长因子-β超家族的成员,在哺乳动物的骨骼肌生长和分化过程中起负调控作用,其转录调控受到多个基因的影响,其中肌肉增强子因子2(MEF2)是重要的调控因子之一。因此,对猪Mstn启动子上MEF2位点及其作用方式的探讨具有重要意义。首先,通过PCR方法扩增了猪Mstn基因上游1 969 kb的启动子序列,利用生物信息学方法分析该序列包含3个MEF2的结合位点;其次,采用逐步删除的方法获得5个长度不等的启动子,用荧光素酶报告系统评估了它们在小鼠成肌细胞C2C12中的活性。其次,转入含有MEF2结合位点的启动子片段和MEF2C表达载体,可以显著增强启动子活性2～6倍,高表达另一亚型MEF2A则启动子活性没有明显改变。最后,转入MEF2C表达载体,用实时定量PCR和Western blotting方法检测Mstn的转录和蛋白水平的变化,结果发现mRNA升高了2～4倍;在肌管细胞中,蛋白翻译水平也有显著升高。这些结果显示,MEF2C可以通过激活Mstn参与猪肌肉生长和发育阶段的调节。研究为Mstn基因的转录调控提供了有效的作用靶点和效应分子,为进一步探讨Mstn的功能调控提供了一种新的思路。
- 李佳邓捷张军林成德王华岩
- 关键词：转录调控启动子活性C2C12细胞
- 通过形成类胚体诱导人羊水多能干细胞向心肌细胞分化被引量：11
- 2008年
- 由人羊水中分离羊水多能性干细胞，通过形成类胚体诱导其向心肌细胞分化。取人羊水标本进行体外培养，分离得到人羊水干细胞，已连续传代培养至42代，采用免疫细胞化学、RT-PCR和流式细胞仪技术对羊水干细胞的生物学特性进行检测。取10-15代羊水干细胞，悬浮培养使其形成类胚体，进而向心肌细胞诱导分化。培养的羊水干细胞呈成纤维样，表达部分胚胎干细胞特异标志基因，悬浮培养可形成类胚体。类胚体碱性磷酸酶（AP）检测呈阳性，表达三胚层特异标志基因fgf5、ζ-globin和α-fetoprotein。羊水干细胞形成类胚体后进行诱导，得到α-actin阳性细胞，表达心肌细胞特异标志基因Tbx5、Nkx2．5、GATA4和α—MHC。试验结果表明，从人羊水标本中可分离得到具有胚胎干细胞特性的细胞，经初步检测确定为羊水干细胞，并能通过形成类胚体诱导其向心肌细胞分化。
- 王晗陈帅程祥窦忠英王华岩
- 关键词：心肌细胞诱导分化
- 牛天然抗性相关巨噬细胞蛋白1(NRAMP1)的分子克隆及表达载体的构建
- 布氏杆菌和结核分枝杆菌是对畜牧业发展和人类健康产生影响的胞内菌。本研究的目的是为了通过超表达NRAMPl基因，增强动物对疾病的抵抗力，为获得转基因牛抗病育种奠定基础。
- 程祥邓婕孟书燕王华岩
- 关键词：分子克隆抗病育种
- 文献传递
- 定量分析诱导山羊体细胞重编程过程中端粒酶的表达变化被引量：4
- 2010年
- 动物体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS)是目前干细胞生物学研究的热点。文中重点对山羊体细胞重编程过程中端粒酶(TERT)基因的相对表达量进行了检测,探讨了山羊重编程细胞的形成与端粒酶基因表达的关系。从关中奶山羊胎儿皮肤分离得到的胎儿成纤维细胞(GEF),其增殖能力较强,核型正常(60条XY),通过转录因子在体外诱导得到山羊重编程细胞。利用Real-timeRT-PCR方法首先对关中奶山羊胎儿各种组织的TERT表达进行了检测,结果表明睾丸组织中TERT的表达显著高于上皮组织(P<0.01),在山羊胎儿的其他组织中TERT也有不同程度的表达。对原代重编程细胞和4株不完全重编程细胞株的TERT表达检测结果发现,碱性磷酸酶(AP)阳性的重编程细胞端粒酶表达量要显著高于AP阴性的重编程细胞(P<0.01)。这一结果揭示,激活端粒酶活性并使其保持较高的表达水平对体细胞的重编程至关重要。
- 张淑金孟书燕雷蕾程祥王华岩
- 关键词：端粒酶细胞重编程关中奶山羊
- METTL3对猪干细胞多能基因表达的调控作用被引量：4
- 2018年
- m^6A是真核生物m RNA中重要的转录后修饰,METTL3作为m^6A甲基转移酶复合物中的重要组分,在细胞重编程、胚胎干细胞和诱导多能干细胞的干性维持、胚胎发育等过程中发挥重要作用。为了揭示猪METTL3的表达模式,对不同物种METTL3蛋白序列进行了比对,用RT-PCR检测了METTL3基因在不同猪组织和细胞中的表达情况,并确认了METTL3的细胞核定位。为了研究METTL3对猪干细胞多能基因表达的调控作用,克隆了猪METTL3编码区序列,设计了METTL3干扰片段,并构建了相应的过表达和沉默载体。发现干扰METTL3的表达后,猪多能干细胞出现类似na?ve状态的细胞克隆,NANOG、OCT4和LIN28A表达水平显著升高。在猪多能干细胞培养基中添加m^6A甲基化抑制剂环亮氨酸培养细胞48 h后,试验结果与干扰METTL3表达的结果一致。本研究为优化猪多能干细胞的培养体系提供了新的方向和依据。
- 马子玉任亚辉凌敏王华岩
