谌伟
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- VEGF上调不同类型细胞Survivin的表达被引量：5
- 2009年
- 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对结肠癌细胞(LOVO、HCT116)、人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)Survivin表达的影响和存在的差异。方法VEGF刺激体外培养的LOVO、HCT116、HUVECs并检测细胞周期和凋亡的变化,用RT-PCR测定mRNA表达,Western blot测定蛋白表达,用免疫细胞化学测定Survivin蛋白表达和部位。结果VEGF可促进肿瘤细胞增殖,在结肠癌细胞中Survivin表达水平较高,在VEGF诱导后表达上调(P<0.05),主要分布在细胞质;在HUVECs中,Survivin表达不明显,VEGF诱导后表达明显上调(P<0.05),在细胞质和细胞核中均有较高表达。结论VEGF上调3种细胞SurvivinmRNA和蛋白表达,但在肿瘤和非肿瘤细胞Survivin上调的程度和分布存在差异。
- 王学虎傅仲学谌伟吴星烨
- 关键词：血管内皮细胞生长因子SURVIVIN结肠癌
- 缺氧诱导因子-1抵抗缺氧诱导的肿瘤细胞凋亡被引量：5
- 2010年
- 目的 通过对结肠癌SW480细胞中缺氧诱导因子-1（HIF-1）的有效干扰,观察沉默HIF-1后对肿瘤细胞缺氧环境下凋亡的影响.方法 以三气培养箱诱导缺氧环境,pGenesil-11 质粒为载体转染SW480细胞沉默HIF-1.透射电镜观测肿瘤细胞的形态学变化;荧光染料Hoechst 33258、DNA Ladder检测细胞凋亡.结果 与第3天（0.19±0.02）、第15天（0.20±0.03）比较,第7天（0.16±0.02）时RNA干扰效果最好（P〈0.05）.RNA阳性干扰组结肠癌SW480细胞：电镜下可见凋亡小体形成等形态学变化;细胞凋亡荧光检测,染色呈强蓝色荧光,并可见核碎裂;DNA Ladder检测出现细胞凋亡时典型的梯状条带.结论 HIF-1具有对抗缺氧诱导的肿瘤细胞凋亡的作用.
- 吴星烨傅仲学王学虎谌伟
- 关键词：结肠癌RNA干扰脱噬作用
- 外源性VEGF对结肠癌细胞SW480蛋白质变化的影响
- 2010年
- 利用RT-PCR发现结肠癌细胞存在血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)的表达,随后采用外源性VEGF对结肠癌细胞SW480进行体外刺激,流式细胞仪检测到结肠癌细胞刺激后快速进入分裂期,同时提取VEGF作用前后的结肠癌细胞总蛋白,蛋白质组学研究,发现存在明显的蛋白质变化,其中鉴定出10个差异蛋白质.提示外源性VEGF可以促进结肠癌细胞增殖并对肿瘤细胞蛋白质组产生明显的影响.
- 王学虎傅仲学赵渝谌伟吴星烨
- 关键词：蛋白质组双向凝胶电泳结肠癌
- Survivin基因的shRNA干扰对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响被引量：6
- 2010年
- 目的:以携带shRNA片段的腺病毒为载体,对结肠癌细胞SW480中Survivin基因的表达进行干扰,研究其对肿瘤细胞中Survivin基因沉默效果及对细胞周期、凋亡和增殖的影响。方法:将构建好的携带Survivin-shRNA片段腺病毒,体外转染结肠癌细胞株SW480。以EGFP为报告基因,采用流式细胞计数测定不同感染复数(MOI)下的转染效率,选取适当病毒浓度进行下一步实验。通过RT-PCR和Western blot检测基因沉默后结肠癌细胞内Survivin mRNA和蛋白的表达水平;在Annexin V—FITC和PI染色后通过流式细胞术检测并分析Survivin基因沉默后细胞周期和凋亡的变化;同时采用噻唑蓝(MTT)法、克隆增殖实验对细胞不同时期增殖活性进行观察,明确对细胞增殖的抑制时效性。结果:腺病毒转染后MOI值在0～50时,剂量与转染效率成正比,确定最佳MOI值为50并进行后续实验;shRNA干扰后细胞内Survivin mRNA和蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示基因沉默后细胞凋亡率升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。同时基因沉默后,细胞周期也有明显变化,表现为G_1/S期细胞增多和G_2/M期细胞减少,与对照细胞组相比差异有统计学意义(P<0.05)。MTT和单克隆平板实验均显示Survivin基因的沉默,对细胞的增殖和生长均具有明显抑制作用(P<0.05)。结论:采用腺病毒对结肠癌进行靶向Survivin基因的shRNA干扰,能有效降低目的基因的表达。其介导的Survivin基因的沉默,可以有效的诱导结肠癌细胞凋亡,同时Survivin基因可以通过抑制细胞G_1/S期转化来阻止细胞分裂,抑制细胞生长。
- 王学虎傅仲学赵渝谌伟吴星烨王春毅
- 关键词：SURVIVINRNA干扰结肠癌
