邹有土
- 作品数:7 被引量:33H指数:4
- 供职机构:福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金福建省自然科学基金福建省科技计划项目更多>>
- 相关领域:生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 脂肪酶催化合成生物柴油的瓶颈问题及其对策被引量:13
- 2008年
- 生物柴油,一种新型的清洁能源燃料,具有可再生、可生物降解、环境友好等优良的品性,可部分或全部替代石化柴油。碱催化法、脂肪酶催化法及超临界法是合成生物柴油的主要工艺,其中脂肪酶催化法是一种节能型、环保型工艺,在节能和环保方面,有着碱催化法无可比拟的优越性,具有良好的工业应用前景。但目前在实现产业化的进程中仍存在如酶成本高、稳定性较差、甲醇对酶的失活效应及反应时间长等瓶颈问题。通过固定化技术和全细胞催化剂的采用、甲醇流加方式的改进、溶剂工程的改善及酰基受体和耐醇酶的开发等技术手段,结合固定床生物反应器,较好地解决了这些瓶颈问题,从而推进了酶催化法合成生物柴油的工业化进程。主要对酶法合成生物柴油工艺存在的主要问题及相应对策研究进展进行概括介绍,并对其工业化发展前景进行讨论。
- 吴义真邹有土林琳
- 关键词:生物柴油脂肪酶酶催化法
- 随机突变对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的改善被引量:4
- 2009年
- 利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相结合的方法对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行定向进化,构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-mutantx,电转化引入毕赤酵母GS115中,进行异源表达。高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株。15%的SDS-PAGE表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。基因测序结果表明,突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸,后者是氢键的供体,能形成具有稳定空间结构的氢键,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合。
- 胡长浩邹有土刘燕雅冯蔚宗林琳
- 关键词:扩展青霉脂肪酶随机突变最适作用温度
- K55R与ep8叠加突变对扩展青霉碱性脂肪酶热稳定性的改善
- 利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机诱变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化毕赤酵母GS115进行表达。结果表明:该叠加突变体在...
- 蔡少丽王彩梅邹有土黄平林琳
- 关键词:扩展青霉碱性脂肪酶叠加突变热稳定性
- 文献传递
- 高通量脂肪酶稳定性测定法-ANS法的建立被引量:2
- 2011年
- 根据蛋白质变性后结构变化的特点和荧光探针8-苯胺基-1-萘磺酸(8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS)的特性,建立了一种快捷而准确的脂肪酶热稳定性(Tm)测定的新方法——ANS脂肪酶稳定性测定法,即将脂肪酶在25℃-65℃的不同温度下保温30 min后,加入到ANS反应体系(0.2 mg/mL酶蛋白,0.05 mmol/L ANS,20 mmol/L Tris-HCl(pH 7.2),100-500 mmol/L NaCl)中。在激发波长378 nm,发射波长465 nm下测定荧光值。通过GraphPad Prism软件分析得出脂肪酶的Tm。利用该方法测定了野生型扩展青霉脂肪酶及其突变体的Tm值,结果与传统的NaOH滴定和平板透明圈法的测定结果相似。同时,利用该方法可在96孔板上快速完成数十个样品的Tm测定,从而成为一种快速、可靠、可用于高通量的酶稳定性的测定方法。
- 冯蔚宗林俊涵菜少丽邹有土陈国仁黄平林雅静王冰冰林琳
- 关键词:脂肪酶热稳定性
- K202A突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响被引量:7
- 2007年
- 利用易错PCR定向进化扩展青霉脂肪酶(PEL),获得了一株热稳定性有所提高的随机突变体(ep8),ep8包含有一个氨基酸的改变。为进一步提高其热稳定性,利用重叠延伸PCR法,以ep8基因为模板,将第202位赖氨酸突变为丙氨酸(K202A),构建表达质粒pAO815-ep8-K202A。并将其引入毕赤酵母GS115构建叠加突变体(PEL-ep8-K202A)。同时以野生型lip07为模板构建单点突变体:PEL-lip07-K202A。15%SDS-PAGE结果分析表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。表达产物热稳定性分析结果表明:野生型(PEL)的Tm值为39.03℃,而以野生型为模板进行定点突变得到的单点突变酶(PEL-lip07-K202A),其Tm却降低了2℃,为37.08℃。叠加突变酶(PEL-ep8-K202A)的Tm为41.66℃,比野生型酶提高2.63℃,比随机突变体ep8生产的酶(PEL-ep8)的Tm提高了1.21℃。
- 邹有土吴义真施文芳林琳
- 关键词:扩展青霉脂肪酶
- 扩展青霉脂肪酶的异源表达及分子突变
- 扩展青霉脂肪酶(PEL)是一类特殊的酯键水解酶,可在油水界面催化甘油三酯生成脂肪酸和甘油,在工业上起着重要的作用。本研究将扩展青霉脂肪酶基因(1ip07)导入巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)中,以甘油醛-3...
- 邹有土
- 关键词:PEL异源表达
- 文献传递
- 定点突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善被引量:8
- 2013年
- 利用重叠延伸PCR方法对扩展青霉脂肪酶基因进行体外定点突变,构建了K115R与随机突变体ep8双突变的重组质粒pAO815-ep8-K115R.将该质粒电转化到毕赤酵母GS115中进行异源表达,获得双突变体脂肪酶PEL-ep8-K115R-GS.与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变体脂肪酶PEL-ep8-GS进行比较,发现双突变体脂肪酶PEL-ep8-K115R-GS在40℃温浴30 min后残余酶活为89%,比野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变体脂肪酶PEL-ep8-GS分别提高54%和27%;双突变体脂肪酶PEL-ep8-K115R-GS的Tm值为42.2℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高3.5℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高2.0℃.研究结果表明对扩展青霉脂肪酶的分子改造能提高其热稳定性.
- 蔡少丽邹有土黄建忠林琳
- 关键词:扩展青霉脂肪酶定点突变毕赤酵母热稳定性