郝华
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- RNA干扰沉默Sp1基因抑制大肠癌SW620细胞的恶性增生
- 2009年
- 目的采用RNA干扰技术沉默大肠癌SW620细胞转录因子特化蛋白1（Sp1）的表达，观察其对细胞增生的影响。方法构建靶向人Sp1基因的干扰载体（pGenesil-1-Sp1），脂质体介导转染SW620细胞，荧光倒置显微镜下观察转染效率，应用实时荧光定量PCR和Western blotting检测其对Sp1 mRNA及蛋白质水平的影响，MTT法检测SW620细胞增生活性的改变。结果成功构建针对Sp1的干扰载体，转染后能够有效抑制大肠癌SW620细胞中Sp1 mRNA和蛋白的表达，且在转染48h抑制作用最强，其对Sp1 mRNA和蛋白质抑制率分别为68．47％和73．82％，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。MTT实验显示，下调Sp1表达可显著抑制大肠癌SW620细胞的体外增生能力。结论Sp1基因沉默能够抑制人大肠癌SW620细胞的增生，为以Sp1为靶点的大肠癌基因治疗提供新的思路和手段。
- 赵志兰李美宁张悦红杜叶平郝华程牛亮
- 关键词：肠肿瘤RNA干扰SW620细胞
- 靶向Pin1基因的shRNA干扰质粒的构建及其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用被引量：2
- 2009年
- 目的构建靶向Pin1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰真核表达质粒,并检测其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用。方法设计合成特异性针对人Pin1基因的寡核苷酸序列,退火后与pGenesil-1载体连接,构建靶向Pin1基因的shRNA真核表达质粒pGenesil-1-Pin1(+),利用脂质体转染大肠癌SW620细胞,以质粒pGenesil-1-Pin(-)转染细胞和未转染细胞为对照。利用荧光显微镜观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白,估算转染效率;应用实时荧光定量PCR和Western blot检测其对SW620细胞Pin1基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果所构建的特异Pin1shRNA真核表达质粒经酶切及测序证明构建正确,转染SW620细胞的转染效率为64%。shRNA对SW620细胞Pin1基因mRNA的抑制率在转染后72h最高,为70.2%,蛋白抑制率为60%。结论已成功构建了靶向Pin1基因的shRNA干扰真核表达质粒,可抑制SW620细胞Pin1基因mRNA的转录及蛋白的表达。
- 郝华李美宁赵志兰杜叶平秦立元程牛亮
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA大肠癌
- AP-2α对大肠癌SW620细胞增生的影响及其作用机制被引量：1
- 2009年
- 目的研究转录因子激活蛋白-2d（AP-2α）对大肠癌细胞株SW620增生能力的影响及可能的作用机制。方法构建pcDNA3．1（＋）-AP-2α重组质粒，采用脂质体介导质粒转染人SW620细胞，利用MTT法检测其对SW620细胞增生能力的影响；荧光定量PCR方法和Western印迹法检测转染前后各组细胞中雌激素受体-β（ER-β）表达水平的变化。结果转染AP-2α后SW620细胞内AP-2α mRNA含量及蛋白表达水平显著升高。MTT结果提示，转染AP-2α基因后SW620细胞增生速度受到抑制。转染AP-2α基因后ER-β mRNA和蛋白表达增加，且在转染48h增加最为明显，ER—β mRNA和蛋白质分别增加了94．47％和54．67％，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AP-2α可抑制SW620细胞的增生，其抑制机制很可能与增强ER-β的表达有关。
- 杜叶平李美宁张悦红赵志兰郝华程牛亮
- 关键词：肠肿瘤SW620细胞转染雌激素受体Β
