陈波
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的特征及功能被引量：3
- 2005年
- 目的:观察人骨髓间充质干细胞体外培养定向分化为肝细胞样细胞的过程及其特征。方法:实验于2003-12/2004-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。人骨髓取自髂后上嵴骨髓穿刺的健康供者,来源于中山大学附属第二医院儿科患儿健康家属。全骨髓贴壁筛选法分离出骨髓间充质干细胞,体外扩增后以流式细胞仪鉴定其表面标志。取扩增5代的骨髓间充质干细胞,分为2组,分化组于加入20μg/L肝细胞生长因子和10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基中诱导分化,空白对照组则不加任何细胞因子。2周后,行细胞形态学观察,并检测成热肝细胞的糖原合成和尿素分泌功能(免疫细胞化学法检测甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18,19表达,反转录-聚合酶链式反应检测甲胎蛋白、白蛋白基因mRNA转录水平,高碘酸-Schiff染色检测糖原及紫外分光光度法测定尿素氮合量)。结果:①流式细胞仪显示第5代骨髓间充质干细胞高表达表面抗原白细胞分化抗原29,不表达白细胞分化抗原34,11b。②分化组骨髓间充质干细胞至第14天,部分细胞分化为多角形的肝细胞样细胞。③免疫细胞化学法检测到细胞特异性表达甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18,19,反转录-聚合酶链式反应显示有甲胎蛋白和白蛋白mRNA转录。④高碘酸-Schiff糖原染色可见胞浆内存在红色颗粒,呈阳性反应,培养液内尿素氮含量亦明显升高。⑤空白对照组骨髓间充质干细胞则未见上述各项变化。结论:在低血清培养体系中,采用成纤维细胞生长因子4和肝细胞生长因子联合诱导,证明人骨髓间充质干细胞在体外能定向分化为肝细胞样细胞,诱导后的骨髓间充质干细胞上有了成熟肝细胞的糖原合成和分泌尿素的特征性功能,表明骨髓间充质干细胞可作为肝细胞移植和人工肝的新型种子细胞。
- 汤志华闵军陈积圣霍景山胡孝渠殷香保陈波
- 关键词：骨髓细胞干细胞肝细胞细胞分化
- bcl-xL基因微粒对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用被引量：1
- 2006年
- 目的评价包载抗凋亡基因bcl-xL的纳米微粒对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用。方法从人肝脏组织获取bcl-xLcDNA(基因全长710 bp),连接至真核表达载体pTargeTTM上;用超声双乳化蒸发法制备纳米微粒;大鼠心肌细胞分为未转染组、脂质体转染组和纳米转染组共3组, 每组8孔;缺氧培养(5％CO2+95％N2)48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学染色法半定量检测bcl-xL mRNA及蛋白表达,末端DNA转移酶dUTP缺口末端标记法 (TUNNEL)法检测细胞凋亡指数。结果制备的纳米微粒大小为200-260 nm,基因包封率为 89．26％;与未转染组比较,纳米转染组和脂质体转染组bcl-xL mRNA和蛋白表达水平均升高(P< 0．01);与另两组比较,纳米转染组心肌细胞凋亡指数(14．063±3．396)％显著下降(P<0．05)。结论成功制备包载bcl-xL基因的纳米微粒,外源性bcl-xL能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,纳米微粒具有低细胞毒性特点,是一种较理想的基因载体。
- 廖洪映熊利华殷香保谷力加褚忠华陈波蒙容森
- 关键词：基因纳米基因载体心肌细胞
- bcl-xL纳米微粒的制备及其对大鼠心肌细胞的高效转染被引量：2
- 2006年
- 目的：制备包载含人类抗凋亡基因bcl—xL的纳米微粒，评价其转染大鼠心肌细胞的能力．方法：用超声双乳化蒸发法制备包载bcl—xL的纳米微粒，扫描电镜观察纳米的形态和大小，DNase I消化酶试验检测其抗核酸酶能力；转染体外培养的大鼠心肌细胞后RT—PCR和Western—blot法检测基因表达．结果：制备的纳米微粒直径约200～260nm，包封完好，性能稳定并对基因有缓释作用；转染1wk后bcl-xL表达高于对照组（P〈0．05）．结论：成功制备包载真核表达质粒的纳米微粒，并能够高效转染大鼠心肌细胞．纳米微粒是心肌细胞转染较理想的基因载体之一．
- 廖洪映熊利华谷力加殷香保肖颂华蒙容森陈波
- 关键词：纳米微粒心肌细胞学心肌细胞
- 纳米血管生成素-2小干扰RNA质粒制备及功能研究被引量：3
- 2005年
- 【目的】制备血管生成素-2小干扰RNA(Ang-2siRNA)质粒纳米微粒,并观察其基因转染能力和基因沉默效果。【方法】应用分子克隆的方法构建Ang-2siRNA质粒,将其与聚乳酸、O-羧甲基壳聚糖用水/油/水(W/O/W)双乳化溶剂蒸发法制备纳米微球,扫描电镜观察其形态和粒径。然后转染原代人脐带静脉内皮细胞, 观察纳米Ang-2siRNA微粒干扰Ang-2基因表达的效果及其细胞保护功能。【结果】扫描电镜观察到Ang- 2siRNA纳米微球呈球形和椭球形,粒径150—200 nm,大小分布均匀,包封完整,分散性良好。有较强转基因能力,良好的RNA干扰效果和血管内皮细胞保护功能。【结论】成功制备纳米Ang-2siRNA微粒。并证实其载基因能力和RNA干扰效果,对血管内皮细胞损伤因素有良好保护作用,为进一步研究心肌梗死的血管修复机制奠定了坚实的基础。
- 陈波熊利华华平廖洪映殷香保汤志华蒙荣森邓伟
- 关键词：ANG-2SIRNA纳米微粒基因载体
- 人类抗凋亡基因bcl-xL的克隆及其在大鼠心肌细胞内的高效表达被引量：1
- 2005年
- 【目的】克隆人类抗凋亡基因 bcl-xL cDNA,构建两种不同的真核表达载体,评价大鼠心肌细胞表达外源性bcl-xL 的效果,并比较不同转染方法对 bcl-xL 表达的影响。【方法]】RT-PCR 法从人肝脏组织获取 bcl-xL cDNA,连接至pTargeT^(TM)载体,并亚克隆至真核表达载体 pEGFP-C1上;细菌内同源重组构建重组腺病毒质粒,腺病毒纯化试剂盒获取高滴度的重组腺病毒;脂质体和腺病毒介导分别转染体外培养的大鼠心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR 和免疫细胞化学染色法检测 bcl-xL mRNA 和 bcl-xL 蛋白的表达。【结果】获取的 bcl-xL cDNA 测序正确,成功克隆真核表达质粒 pEGFP-bcl-xL;病毒颗粒滴度高达5.3×10^(12)pfu/L;脂质体和腺病毒转染心肌细胞效率分别为40.3%和95.4%,转染后bcl-xL mRNA 和 bel-xL 蛋白的表达均增加,但两种方法之间差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】成功获取人类 bcl-xL基因并制备真核表达质粒和重组腺病毒,心肌细胞能高效表达外源性 bcl-xL,并以腺病毒介导更为理想。为 bcl-xL 基因治疗缺血性心脏病提供实验基础。
- 廖洪映张惠忠陈波华平殷香保蒙荣森刘启才熊利华
- 关键词：克隆基因疗法
- 重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响
- 2005年
- 【目的】探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用。【方法】体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法分析bcl-xL蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;荧光显微镜下观察心肌细胞表达绿色荧光蛋白,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态变化。【结果】转染rAd-bcl-xL/s的心肌细胞表达bcl-xL蛋白阳性单位(PU)(17.84±3.42)明显高于正常对照组(11.02±2.56)与rAd-bcl-xL/as转染组(8.53±2.25)(P<0.01);缺氧诱导后心肌细胞凋亡指数为(45.67±8.47)%,而转染rAd-bcl-xL/s后的细胞凋亡指数减少至(9.42±2.48)%,有显著性差异(P<0.01),未见典型的凋亡小体。【结论】腺病毒介导的bcl-xL基因能高效转染心肌细胞,并表达目的基因;外源性bcl-xL基因对体外培养的心肌细胞具有抗凋亡作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,促进损伤心肌的恢复。
- 廖洪映熊利华陈波张惠忠华平殷香保祝曙光傅玉如
- 关键词：BCL-XL基因HOECHST33342免疫细胞化学染色法细胞凋亡指数显微镜下观察抗凋亡基因
- 转染抗凋亡bcl-xL基因抗大鼠急性缺血心肌细胞凋亡被引量：4
- 2005年
- 目的:探讨抗凋亡基因bcl-xL治疗大鼠急性心肌梗死的可行性。方法:实验于2004-02/2005-02在中山大学第二附属医院医学实验中心完成。建立大鼠急性心肌梗死模型,大鼠随机分为实验组和对照组各10只,实验组用腺病毒介导的方法将bcl-xL基因导入急性缺血大鼠的心肌,对照组仅用生理盐水代替;用免疫组化法半定量分析显示大鼠心肌抗凋亡基因bcl-xL蛋白表达水平,采用缺口末端标记技术和流式细胞仪评估大鼠心肌细胞是否发生凋亡及凋亡的程度。结果:16只大鼠进入结果分析。①4周后取心脏梗死区标本免疫组化检测bcl-xL蛋白表达,发现对照组心肌只有少数着色,而实验组的心肌组织大多数呈深棕色。半定量分析显示,实验组的心肌组织内bcl-xL蛋白表达阳性单位值明显高于对照组(19.66±4.62,8.89±2.16,t=-5.98,P<0.01)。②两组心肌组织中均检测到缺口末端标记技术阳性染色的凋亡细胞。③显微镜下计数,对照组心肌细胞凋亡指数明显高于实验组犤(18.19±4.15)%,(7.25±2.09)%,t=6.65,P<0.01犦。④流式细胞仪检测结果为实验组心肌缺血后转染bcl-xL基因细胞凋亡率为(6.79±1.98)%,而对照组的细胞凋亡率为(20.15±6.04)%,实验组出现明显低于对照组的凋亡峰。结论:转染bcl-xL基因后在心肌组织内有高效的bcl-xL蛋白表达,心肌细胞凋亡指数明显减少,流式细胞仪检测到的细胞凋亡峰明显降低,而未转染bcl-xL基因的心肌细胞因缺血缺氧出现大量的凋亡细胞,细胞凋亡峰显著增高,表明心肌细胞通过转染bcl-xL基因,虽然没有完全阻断细胞凋亡,但大大提高了抗凋亡能力。同时心肌细胞的抗缺血、缺氧和抗损伤能力明显增强,提示转染bcl-xL基因通过其抗凋亡作用能明显提高心肌细胞在缺氧条件下的生存能力。
- 廖洪映熊利华张惠忠华平陈波祝曙光
- 关键词：基因疗法细胞凋亡
