韩克军
- 作品数：10 被引量：25H指数：3
- 供职机构：北京大学基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 生物信息学在新基因HCA520研究中的作用被引量：2
- 2004年
- 利用生物信息学对新基因HCA5 2 0的基因和蛋白序列进行分析 ,探讨生物信息学在新基因研究中的作用。以人类基因组数据库为基础 ,利用电子PCR和SAGE对HCA5 2 0进行染色体定位和组织表达分布分析 ;BLAST程序进行HCA5 2 0的基因结构分析和相似序列搜索 ;ORFfinder和GeneRunner3.0 5程序对HCA5 2 0编码蛋白进行序列预测和功能分析。RT PCR检测HCA5 2 0的组织表达谱。通过以上分析得出HCA5 2 0的全长cDNA为 2 396bp ,定位于染色体 16 p12 .2 ,其最长的开放读码框架为 5 91bp ,编码 196个氨基酸。编码氨基酸含有典型的EF hand保守序列 ,与CHP具有很高的同源性 ,为一胞内蛋白。在多种组织中有表达。提示HCA5 2 0可能是新的钙离子结合蛋白家族成员 ,可能通过调节Na+ /H+ 交换子的活性影响细胞的生物学功能。
- 杨美香曲迅韩克军冯进波陈慰峰
- 关键词：生物信息学
- 肝细胞癌相关抗原编码基因HCA520与钙离子的结合分析被引量：2
- 2004年
- 目的 :分析肝细胞癌相关抗原编码基因HCA52 0与钙离子的关系。方法 :通过PCR获得目的基因 ,构建至原核表达载体pGEX 4T 3中。在大肠杆菌中诱导表达后 ,用亲和层析法进行纯化。Westernblot对所获蛋白进行鉴定 ,Dotblot分析GST HCA52 0融合蛋白与钙离子的关系。结果 :琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定表明 ,重组原核表达载体pGEX 4T 3中 ,HCA52 0基因的插入方向及序列完全正确。Westernblot分析显示 ,纯化的蛋白均含有GST部分 ,是所需的目的蛋白。HCA52 0融合蛋白能够以剂量依赖的方式与钙离子结合。结论 :HCA52 0基因原核表达的蛋白能够与钙离子结合 。
- 杨美香韩克军曲迅马道新陈慰峰
- 关键词：原核表达载体
- 肿瘤相关抗原HCA520真核表达载体的构建及细胞内表达的定位分析被引量：2
- 2004年
- 应用PCR技术获得肿瘤相关抗原HCA520编码基因,构建至pGEM-T Easy载体,测序正确后,亚克隆至pEGFP-N1载体,1％的琼脂糖电泳得到两条带,与预期结果相同;鉴定正确的基因一过性转染至CHO细胞,共聚焦显微镜观察HCA520基因编码蛋白主要位于胞浆靠近胞膜处,为HCA520功能的进一步研究打下了基础。
- 杨美香曲迅韩克军马道新陈慰峰
- 关键词：肿瘤抗原真核表达载体细胞定位
- 白细胞介素-6参与肿瘤相关抗原HCA520对HEK293细胞的促增殖作用被引量：1
- 2005年
- 目的:研究肿瘤相关抗原HCA520对HEK293细胞增殖的影响,获得HCA520生物学功能的初步提示。方法:构建pcDNA3 HCA520 flag真核表达载体转染HEK293细胞并建立稳定转染细胞系,利用MTT实验观察HCA520对HEK293细胞增殖速率的调节。通过RT PCR检测可能参与HCA520对HEK293细胞增殖促进作用的相关分子,并用3 (4, 5 二甲基2 噻唑) 2, 5 二苯基溴化四唑(MTT)实验进一步验证目标分子对HEK293细胞增殖的作用。结果:MTT实验结果显示HCA520显著提高HEK293细胞的增殖速率,HCA520上调白细胞介素6在HEK293细胞中的表达,后者部分参与HCA520对HEK293细胞的促增殖作用。结论:HCA520对HEK293细胞的增殖具有促进作用,并推测可能通过促进细胞恶性增殖在肿瘤发生中发挥作用。
- 钱晓萍李国栋韩克军陈慰峰
- 关键词：HEK293细胞白细胞介素-6肿瘤相关抗原促增殖作用细胞恶性增殖MTT实验
- 人原发性肝细胞癌特异/相关性抗原编码基因的克隆、鉴定和功能分析
- 韩克军
- 关键词：人原发性肝细胞癌肿瘤抗原免疫治疗
- 人肝细胞癌相关肿瘤抗原的分离及鉴定
- 恶性肿瘤是危害人类将康的一大类疾病。传统的手术和放疗等局部治疗方法虽能治愈部分病例,但由于相当部分患者在确诊时已进入中晚期,因此治疗和预后的效果比较差。免疫疗法是肿瘤治疗方法上的突破,而寻找肿瘤抗原正是对肿瘤进行免疫治疗...
- 王宏程韩克军石永玉苏艳荣庞学雯王瑜陈慰峰
- 关键词：肝细胞癌肿瘤抗原SEREXCDNA
- 文献传递
- 应用生物信息学方法分析人HCA56基因被引量：11
- 2005年
- 目的利用生物信息学对新克隆的人ligatin样基因HCA 5 6的基因和蛋白序列进行分析,探讨生物信息学在新基因研究中的作用。方法以人类基因组数据库为基础,利用电子PCR和SAGE数据库对HCA 5 6进行染色体定位和组织表达分布分析;BLAST程序进行HCA 5 6的基因结构分析和相似序列搜索;ORFfinder和GeneRunner3 0 5程序对HCA 5 6编码蛋白进行序列预测和功能分析。结果得出HCA 5 6的全长cDNA为2 0 2 1bp ,定位于染色体1q31 q32 ,其最长的开放读码框架为175 5bp ,编码5 84个氨基酸,编码氨基酸含有一个亮氨酸拉链和一假定的RNA结合保守序列。相似性搜索发现HCA 5 6基因片段与人ligatin基因片段具有很高的相似性(99% )。SAGE结果显示HCA 5 6在多种组织中都有表达。结论生物信息学是进行新基因研究的有效方法;HCA 5 6很可能是ligatin的全长编码基因。
- 杨美香曲迅韩克军冯进波陈慰峰
- 关键词：新基因蛋白序列编码基因SAGE人类基因组
- 人原发性肝细胞癌特异/相关性抗原编码基因的克隆、鉴定及功能分析
- 该文研究目的是克隆人原发性肝细胞癌特异/相关抗原的编码基因，并对克隆的新的抗原编码基因进行鉴定及初步功能分析，为以后的肿瘤免疫治疗或肿瘤的发病机制研究提供依据.研究工作的主要内容包括如下三部分：第一部分是克隆人原发性肝细...
- 韩克军
- 关键词：原发性肝细胞癌肿瘤抗原抗原编码基因
- 肿瘤相关抗原基因HCA520重组蛋白的表达纯化及其肝癌患者血清中相应抗体的分析被引量：8
- 2003年
- HCA5 2 0是用SEREX(serologicalidentificationofrecombinantcDNAexpressingcloning)方法 ,即用肝癌病人血清从肝癌组织cDNA表达文库中筛选得到的肝癌相关性抗原编码基因 .利用RT PCR技术检测了HCA5 2 0mRNA在各种组织中的分布情况 ,构建了GST融合表达载体并且用亲和层析的方法纯化表达的融合蛋白 .最后用Western印迹检测了重组蛋白的免疫反应性 ,用斑点印迹检测了肝癌病人血清中HCA5 2 0的天然抗体的存在情况 .结果表明 ,HCA5 2 0在各种组织中呈丰度差异分布 ,构建好的pGEX 4T 3重组载体经IPTG诱导后高效表达GST HCA5 2 0融合蛋白 ,其分子量约 4 9kD .经GST Agarose亲和层析 ,重组蛋白得到高度纯化 .Western印迹证实 ,纯化蛋白为目的重组蛋白 ,重组蛋白具有与天然蛋白相同或相似的免疫反应性 .斑点印迹分析表明 ,2 0份肝癌病人血清中有 1份HCA5 2 0抗体阳性 ,而 4份正常人均为阴性 .HCA5 2 0的足量提供 ,可用以研究其在致癌中的作用 ,并可以免疫动物制备抗体 .它作为抗原 ,分析其抗体在不同肿瘤病人中的表达情况 。
- 韩克军杨美香王歈李燕陈慰峰
- 关键词：重组融合蛋白免疫反应性
- 新型肝癌相关性抗原HCA519及其变异体HCA90的基因克隆和表达被引量：6
- 2003年
- 通过利用肝癌病人体内血清中所含的对肿瘤抗原产生的特异性抗体筛选肝癌组织cDNA表达文库的方法 (SEREX) ,筛选得到了可以诱导肝癌病人抗体免疫应答的两个新抗原HCA5 19基因(GenBankAF14 6 731)及其变异体HCA90基因 (GenBankAF 2 872 6 5 ) .它们定位于染色体 2 0q11 2 ,HCA5 19含 18个外显子 ,HCA90含 19个外显子 .其中HCA90所特有的外显子序列长 10 8bp ,属Alu重复序列片段 ,插入于HCA5 19外显子 10和 11之间 ,原为HCA5 19内含子序列 .该插入片段位于HCA5 19开放阅读框架之内 ,不改变HCA5 19的读码框 ,使HCA5 19编码的 74 7个氨基酸增长至HCA90的 783个氨基酸 .通过Northern杂交和RT PCR分析发现 ,HCA5 19和HCA90基因分别在 9 9例和 6 9例肝癌组织中高表达 ,RT PCR显示 ,它们在正常肝组织和其它正常组织中有极低水平转录本表达 .而这种低表达转录本在Northern杂交中不能被检测到 .HCA5 19蛋白被首次发现在肿瘤病人中能够诱导机体的抗体免疫应答 ,为一个新的肿瘤相关性抗原分子 .其变异体HCA90抗原基因为首次发现的新基因 .其功能可能与细胞的恶性增殖相关 。
- 王歈韩克军屈伟陈慰峰
- 关键词：肝细胞癌SEREX基因克隆
