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冯莹颖: 作品数：12 被引量：62H指数：5; 供职机构：华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金湖北省杰出青年人才基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

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单核细胞增生李斯特菌毒力基因inlB/actA双缺失突变株的构建被引量：4: 2010年; 单核细胞增生李斯特菌inlB和actA毒力基因的编码产物InlB和ActA是与其致病性相关的重要毒力因子,与该菌在细胞间扩散、传播有着直接的关系,其中肌动蛋白聚集因子ActA是细菌由细胞浆扩散至相邻细胞所必须的因子,而内化素InlB在对肝细胞的侵袭过程中起着重要作用。本研究中利用同源重组技术在inlB缺失菌株基础上成功构建了毒力基因inlB和actA双缺失的突变株,获得减毒突变株,为构建预防人类和动物疾病的疫苗载体奠定了基础。; 王莉冯飞飞张强冯莹颖邓灵福张晓莉罗勤; 关键词：单核细胞增生李斯特菌同源重组

单增李斯特菌不同PCR快速检测方法比较被引量：19: 2008年; 目的比较3种PCR快速检测方法在检测单核细胞增生李斯特菌时的特异性和灵敏度方面的差异。方法针对单核细胞增生李斯特菌的毒力基因iap和prfA基因,分别设计引物,进行单个PCR、多重PCR、套式PCR等3种方法检测。结果3种PCR方法均具有较强的特异性;套式PCR的灵敏度为102cfu/ml,高于单个PCR(103cfu/ml)和多重PCR(104cfu/ml)。结论多重PCR在特异性检测方面具有优势,而在灵敏度方面,套式PCR要明显优于单个及多重PCR方法。; 李盛丰赵姣钟名华夏国亮邓灵福张筱丽冯莹颖罗勤; 关键词：单核细胞增生李斯特菌多重PCR 套式PCR 特异性

Triton X-100在单菌落PCR技术中的优化作用被引量：5: 2009年; 在利用单菌落PCR法直接筛选含有外源基因的重组质粒以及发生同源重组的重组子时,通过0.1%TritonX-100处理模板对PCR技术进行优化。以大肠杆菌DH5α、单核细胞增生李斯特菌的重组克隆为例,单菌落经Triton X-100处理后再进行PCR,琼脂糖凝胶电泳图谱的条带更清晰、杂带减少;克隆鉴定的阳性率明显提高,且在15μL的PCR反应混合液体系中的扩增效果更明显。对单核细胞增生李斯特菌的检测方法可以推广适用于多种革兰氏阳性菌。; 张晓莉冯莹颖张强罗勤蒋苹钱悦; 关键词：TRITONX-100 重组克隆

GFP用于单核细胞增生李斯特菌PrfA调控毒力基因actA转录表达的研究被引量：1: 2009年; PrfA是单核细胞增生李斯特菌(LM)中迄今为止发现的惟一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子。为了研究PrfA转录调控毒力基因表达的分子机制,将无启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因与毒力基因actA的启动子融合,连接到穿梭载体pLSV16质粒上,构建成表达融合载体pLSV16-PactA-gfp,然后将其电转化入LM野生株P14、PrfA高表达突变株P14a和prfA基因等位缺失突变株A42中表达。利用荧光显微镜和荧光酶标仪检测上述3株细菌中绿色荧光蛋白的不同表达强度,从而评价actA基因依赖于PrfA的转录活性强弱。结果显示,绿色荧光蛋白在P14a中发出的荧光强度最高,P14次之,A42最弱,两两比较均有显著差异(P<0.01),表明毒力基因actA的转录水平高低与PrfA的活性成正相关,其转录表达依赖于PrfA的调控;该试验同时也显示GFP能方便、有效地用于研究PrfA调控LM不同毒力基因的转录表达水平。; 冯莹颖张晓莉张强罗勤蒋苹钱悦冯爱平; 关键词：单核细胞增生李斯特菌转录调控

一步法定点突变技术快速构建bsh基因突变启动子被引量：4: 2009年; 目的:建立一种高效便捷的定点突变方法,为基因表达调控以及蛋白质结构和功能的研究提供技术支撑。方法:以构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)中编码胆碱水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的bsh基因突变启动子为例,采用一对完全互补并带有突变位点的引物扩增携带bsh基因启动子的重组质粒DNA全序列,通过DpnⅠ消化PCR产物中剩余的甲基化的模板DNA,酶切后的PCR产物直接转化大肠杆菌,从而获得含有突变启动子的重组质粒。结果:通过一步法定点突变技术成功构建了bsh基因的三种突变启动子。结论:该方法简单高效,只要把握好对引物设计,高保真的DNA聚合酶、模板DNA的浓度以及PCR扩增程序的选择,突变成功率可以达到100%。; 冯莹颖张强周青春罗勤张晓莉秦龙娟; 关键词：单核细胞增生李斯特菌

调控蛋白PrfA的单个氨基酸突变对单核细胞增生李斯特菌毒力基因转录水平的影响被引量：5: 2008年; PrfA是单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)中迄今为止发现的唯一一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子.为了深入研究PrfA结构和功能的关系,模拟一株自然界分离得到的PrfA组成型突变株P14A(血清型4b),将标准野生株EGDe(血清型1/2a)的PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸(简称PrfA*),分别构建野生型PrfA和突变型PrfA*表达融合载体,提取并纯化相应蛋白用于体外转录,直接检测依赖于PrfA的毒力基因plcA,hly和actA启动子的转录活性;同时,将携带prfA和prfA*的载体分别电转化入prfA基因缺失菌株中,应用实时RT-PCR检测plcA,hly和actA体内转录水平.实验结果显示:突变型PrfA*蛋白明显增强了plcA,hly和actA启动子的体外转录活性;依赖于PrfA的毒力基因在携带突变型PrfA*蛋白的菌株中的体内转录水平远远高于携带野生型PrfA蛋白的菌株,说明PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸后增强了PrfA蛋白与其靶基因的结合能力,从而提高其表达水平.; 罗勤周青春冯莹颖张晓莉; 关键词：单核细胞增生李斯特菌体外转录

Sigma B因子活性的调节及其在几种革兰氏阳性食源性致病菌中的作用被引量：10: 2008年; SigmaB(σB)是许多革兰氏阳性菌对环境胁迫产生应答反应的主要调控因子。不仅在芽孢形成中具有重要作用,而且σB也直接或间接地调控包括蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)在内的一些革兰氏阳性食源性致病菌毒力及毒力相关基因的表达。本文结合作者在国内外的相关工作,综述了σB活性的调节方式及其在上述革兰氏阳性食源性致病菌中相关作用的最新研究进展,为深入研究革兰氏阳性食源性致病菌的致病机理、预防和治疗细菌感染提供新的思路和理论依据。; 冯莹颖张晓莉罗勤周青春; 关键词：SIGMA B因子毒力

InlA和InlB介导单核细胞增生李斯特菌入侵宿主细胞分子机制的研究进展被引量：6: 2009年; 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种革兰氏阳性食源性致病菌。在造成宿主食源性感染的过程中,单核细胞增生李斯特菌能凭借其独特的表面蛋白入侵宿主的非吞噬细胞。内化素蛋白家族(Internalins)是介导单核细胞增生李斯特菌入侵宿主非吞噬细胞的主要因子。本文根据国内外一些最新的研究成果,结合作者近几年的工作,综述了在侵染宿主的过程中,单核细胞增生李斯特菌主要的内化素蛋白InlA和InlB介导细菌入侵宿主细胞的分子机制,以期为阐明食源性致病菌致病机理、预防和治疗食源性疾病提供理论基础。; 冯莹颖张强黄兰红秦龙娟罗勤; 关键词：单核细胞增生李斯特菌分子机制

Sigma B在单核细胞增生李斯特菌耐受环境压力胁迫中的作用被引量：5: 2009年; Sigma B(σB)因子在单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的压力应答和毒力调控中起着重要的作用。研究发现单核细胞增生李斯特菌的致病力与耐受环境条件的胁迫息息相关。在压力存在的情况下能启动一些基因的表达,以增强细菌对环境的耐受性,这些基因包括与耐受渗透压、酸碱性环境、氧化、极端温度和宿主体内胆碱等环境压力相关的基因。本文综述了σB因子在上述几种环境压力胁迫中的作用,为深入了解该菌的生理特征、探讨食品的最佳生产和保藏条件、防止细菌的感染等方面提供新的理论依据。; 张强冯莹颖周青春罗勤张晓莉秦龙娟; 关键词：单核细胞增生李斯特菌 SIGMA B因子

调控蛋白PrfA单个氨基酸突变对单核细胞增生李斯特菌毒力基因转录水平的影响: PrfA是单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)中迄今为止发现的唯一一个调节绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子,其氨基酸序列与大肠杆菌cAMP受体; 罗勤周青春冯莹颖张晓丽; 文献传递

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