华峰
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：复旦大学附属中山医院呼吸科更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 髓样分化蛋白2在脂多糖所致大鼠急性肺损伤中的作用
- 2010年
- 目的研究髓样分化蛋白2(MD-2)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的表达及其作用。方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为LPS组和对照组,通过支气管肺泡灌洗分离肺泡巨噬细胞,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法分别检测MD-2 mRNA和蛋白的表达,ELISA方法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。将MD-2 siRNA转染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383,以终浓度1μg/mL的LPS刺激细胞,采用RT-PCR和Western blot方法分别测定细胞MD-2mRNA和蛋白的表达,ELISA方法测定细胞培养上清液TNF-α水平。结果 LPS组大鼠肺泡巨噬细胞和肺组织标本中MD-2 mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.01),血清TNF-α水平明显升高(P<0.01)。在LPS刺激下,NR8383细胞MD-2 mRNA和蛋白的表达显著增加(P<0.01),细胞培养上清液中TNF-α水平升高(P<0.01)。经MD-2 siRNA处理后,NR8383细胞在LPS刺激下MD-2mRNA和蛋白的表达未见明显增加(P>0.05),细胞培养上清液中TNF-α水平未见明显升高(P>0.05)。结论 MD-2在LPS所致ALI大鼠肺组织中表达显著上调,沉默肺泡巨噬细胞MD-2基因可抑制LPS刺激引起的细胞因子分泌增加,提示MD-2在LPS所致大鼠ALI中起重要作用。
- 任卫英华峰金建军曾海英朱蕾
- 关键词：急性肺损伤脂多糖肺泡巨噬细胞
- 脂多糖对大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达及炎性因子分泌的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨脂多糖刺激大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞Toll样受体4（TLR4）、髓样分化蛋白-2（MD-2）mRNA表达和炎性因子分泌的影响,以及MD-2小干扰RNA（MD-2 siRNA）对脂多糖刺激下NR8383细胞炎性因子分泌的作用.方法 体外培养NR8383细胞,以不同浓度脂多糖（0.01～10 mg/L）刺激2 h,以1 mg/L脂多糖刺激2～24 h.运用脂质体Lipofectamine 2000将MD-2siRNA转染至细胞.半定量RT-PCR方法检测细胞TLR4和MD-2 mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-1β的含量.统计学处理采用单因素方差分析、独立样本t检验和Pearson相关分析.结果 对照组NR8383细胞TLR4和MD-2mRNA的相对表达量分别为0.52±0.05和0.44±0.09,0.01 mg/L浓度脂多糖刺激前后表达量无明显改变,0.1 mg/L浓度时表达增加,随脂多糖浓度的升高表达量进一步增加,10 mg/L刺激后相对表达量分别为0.72±0.06和0.65±0.10（F=17.26、6.04,P〈0.01）;TNF-αIL-6和IL-1β含量具有类似改变趋势,对照组分别为（25.8±3.4）ng/L、（62.4±4.7）ng/L和（31.6±1.7）ng/L;在10 mg/L脂多糖刺激下分别增加至（58.9±5.3）ng/L、（96.5±3.9）ng/L和（55.4±5.4）ng/L（F=29.55、54.47、31.45,P〈0.01）.在1 mr/L脂多糖刺激下,TLR4和MD-2 mRNA的表达量在2 h后明显增加,6 h达高峰,8 h开始回落,至24 h时仍高于基础值（F=5.28、4.11,P〈0.01）;TNF-α、IL-6和IL-1β含量具有类似变化（F=10.64、11.23、17.58,P〈0.01）,其中TNF-α和IL-1β含量在6 h达高峰,持续至8 h,IL-6含量在8 h达高峰,持续至12 h.TLR4和MD-2 mRNA表达呈正相关（r=0.513,P〈0.01）.MD-2 siRNA对NR8383细胞MD-2基因的干扰效率为67%,在脂多糖刺激下干扰组细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平未见明显升高.结论 高浓度脂多糖可较长时间上调大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞TLR4和MD-2基因的表达,并促进TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌.MD-2 siRNA可
- 任卫英朱蕾华峰金建军蔡映云
- 关键词：TOLL样受体4肺泡髓样分化蛋白-2
