史兆兴
- 作品数：31 被引量：157H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学交通运输工程更多>>
- Red重组系统及在微生物基因敲除中的应用被引量：27
- 2003年
- 在完成了对各种微生物基因组的测序以后,功能基因学的研究变得尤为重要。研究基因功能最直接的方法便是将待研究的基因失活。最初构建基因突变体是采用大肠杆菌的RecA系统,但是RecA重组系统操作复杂,重组效率低。最近建立了Red重组系统,该系统由3个蛋白组成:α蛋白(即λ核酸外切酶),β蛋白,Gam蛋白。应用Red系统进行基因敲除,可以直接利用线性打靶DNA,两侧同源臂长度在35～60bp即可发生同源重组,且重组效率高。
- 胡堃史兆兴赛道建黄留玉
- 关键词：RED重组系统基因敲除微生物
- 一种简单高效的结合转移克隆方法
- 2004年
- 为了建立一种将整合在染色体上的重组自杀质粒重新环化成环形质粒的技术方法 ,以体内表达技术筛选到的痢疾杆菌融合菌株为出发点 ,借助辅助质粒pMT999或pRK2 0 1 3进行了结合转移实验 ,成功地建立了一种结合转移克隆方法 ,并且具有较高的克隆效率。
- 史兆兴王恒樑胡堃冯尔玲姚潇苏国富黄留玉
- 关键词：克隆
- 致病菌体内诱导基因的功能分析——体内表达技术的应用被引量：2
- 2001年
- 病原菌体内诱导的基因在致病过程中起重要作用 ,体内表达技术是一类很有前景的研究体内诱导基因的技术。本文介绍了体内表达技术的基本原理、类型以及在致病菌体内诱导基因方面的研究进展和应用前景。
- 史兆兴王恒苏国富
- 关键词：致病菌毒力
- 用酵母双杂交系统筛选与痢疾杆菌侵袭素IpaC相互作用的蛋白被引量：5
- 2004年
- 利用酵母双杂交技术筛选与IpaC相互作用的真核细胞蛋白。首先将IpaC全长基因克隆到诱饵蛋白载体pGBKT7中 ,以构建的pGBKT IpaC为靶蛋白质粒 ,筛选人HeLa细胞cDNA文库。在 2× 10 6个克隆中得到 2 2个阳性克隆。其中 2个阳性克隆编码人胶原酶蛋白片段。并且进一步证明与胶原酶片段相互作用的IpaC结构域在 6 2aa～ 170aa之间。提示IpaC可能在胶原酶参与的生物学过程中发挥作用。
- 阎晓宇姚潇王恒樑冯尔玲史兆兴苏国富游松黄留玉
- 关键词：痢疾杆菌酵母双杂交系统IPAC胶原酶
- 志贺菌与宿主细胞之间相互作用的研究进展被引量：4
- 2003年
- 志贺菌的致病过程实际上是志贺菌与宿主细胞之间相互作用的结果。本文从细胞微生物学的角度综述了志贺菌与巨噬细胞、肠上皮细胞和多形核白细胞之间的相互作用 ,较具体地阐述了志贺菌的致病机制。
- 史兆兴王恒樑冯尔玲黄留玉苏国富
- 关键词：志贺菌宿主细胞相互作用巨噬细胞肠上皮细胞致病机制
- 炭疽芽孢在巨噬细胞RAW264.7内的萌发过程被引量：1
- 2005年
- 目的:确定炭疽杆菌A16R芽孢在巨噬细胞系RAW264.7 内萌发的过程. 方法:用炭疽杆菌A16R芽孢以MOI 20:1感染RAW264.7,分别于吞噬后1、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8 h取细胞爬片进行复红美蓝染色,显微镜观察. 结果:吞噬后2-2.5 h,细胞内的芽孢开始萌发并形成繁殖体;吞噬后3.5-4 h,繁殖体开始二分裂;吞噬后5-5.5 h, 繁殖体进入指数增长阶段;吞噬后7-8 h,大量的繁殖体充斥于细胞内、外,细胞开始崩解. 结论:首次采用复红美蓝染色确定了A16R炭疽芽孢在巨噬细胞RAW264.7内的萌发过程.
- 李霆王恒樑史兆兴冯尔玲刘润艳黄留玉
- 关键词：炭疽芽孢萌发美蓝染色巨噬细胞系繁殖体微镜观察
- 表达CtxB的非抗生素标记载体的构建
- 2001年
- 目的构建用于表达CtxB的非抗生素基因作为选择标记的载体。方法用PCR从质粒pMT999中,扩增获得2.9kb的汞抗性基因与pBR322的复制起始区ori相连得到重组质粒pBRH02。然后将含有β-内酰胺酶启动子的CtxB基因插入pBRH02中,构建表达质粒pBRC09。结果pBRC09经转化大肠杆菌、痢疾杆菌,用GM1-ELISA均检测到CtxB在上述菌株中的有效表达。结论利用汞抗性基因和pBR322的复制起始区,成功地构建成以非抗生素为选择标记的表达CtxB的重组质粒。
- 王恒樑冯尔玲刘梅廖翔史兆兴姚潇黄留玉苏国富
- 关键词：霍乱毒素
- 痢疾菌体内诱导基因表达文库的构建被引量：1
- 2001年
- 目的构建筛选痢疾菌福氏2a体内诱导基因的融合基因表达文库。方法以自杀载体pGP704为骨架,用氯霉素乙酰转移酶基因作为报告基因,构建了用于筛选体内诱导基因的载体pGP-cat。把痢疾菌福氏2a基因组DNA的随机酶切片段0.6-1kb亚克隆到pGPcat载体报告基因上游的BglⅡ位点,构建了融合基因文库。结果与痢疾菌福氏2a2457T结合转移后,获得融合基因表达文库。以氯霉素为选择标记,经过体外初步筛选,得到3.2%的具有氯霉素抗性的菌株。结论构建的融合基因表达文库适用于筛选福氏2a痢疾菌的体内诱导基因。
- 史兆兴王恒樑冯尔玲姚潇廖翔黄留玉苏国富黄翠芬
- HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列的电子延伸及验证
- 2007年
- 目的:研究痢疾杆菌福氏2a入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因.方法:采用增毒的痢疾杆菌福氏2a 2457T侵袭HeLa细胞,检查HeLa细胞中细菌的数量并用RT-PCR方法从HeLa细胞中提取总RNA,制备探针.采用含有约3000个代表新基因的芯片进行芯片杂交,分析杂交结果.将所获得的新的156条EST序列为种子序列用cDNA微阵列实验,以人类EST数据库为基础库,应用siClone软件进行EST拼接、校对并尽可能延长获得大片段或全长cDNA.选取基因组未注释的编码区序列作为新基因进行RT-PCR实验验证.结果:共鉴定到≥3倍或≤0.33的差异表达的代表新基因的EST序列45条,其中25个延伸序列鉴定为与重要的肠道功能相关的已知基因,并有3个在痢疾杆菌侵袭期间高表达的存在显著差异的新EST序列,他们分别名为:NPCCKH12、ADBCSB02和HTBAMG05,这3个基因是新的人基因或假基因.结论:鉴定出了在HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列,为进一步研究痢疾杆菌与寄主相互作用奠定了基础.
- 黄留玉史兆兴袁静胡福泉
- 关键词：反转录聚合酶链反应
- 简并PCR及其应用被引量：29
- 2004年
- 简并PCR技术是根据同源蛋白的氨基酸序列扩增到同源基因的核苷酸序列,具有独特的优点。成功进行简并PCR的关键是设计好两组引物库和对反应条件进行优化。由于简并PCR自身的特点,在新基因的克隆、基因表达检测、病毒检测和基因组研究中有其广泛而独特的应用。
- 史兆兴王恒樑苏国富黄留玉
- 关键词：简并PCR同源蛋白氨基酸序列同源基因核苷酸序列
