吴晓刚 作品数:7 被引量:60 H指数:2 供职机构: 中国农业科学院上海兽医研究所 更多>> 发文基金: 上海市科技兴农重点攻关项目 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
鸭坦布苏病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代致弱研究 自2010年鸭坦布苏病毒病在中国发生以来,该病给我国的养鸭产业造成了巨大的经济损失.目前,仍没有有效的措施预防和控制该病的发生和流行.为了获得鸭坦布苏病毒的弱毒株,我们把鸭坦布苏病毒强毒株FX2010在鸡胚成纤维细胞(C... 李国新 吴晓刚 颜丕熙 闫丽萍 滕巧泱 童光志 李泽君 高旭元 肖亚莉 刘绍琼 彭珊 李雪松 石迎 张月娥 余磊鸭坦布苏病毒感染性克隆弱毒疫苗株及其制备方法和应用 本发明公开了一种鸭坦布苏病毒感染性克隆弱毒疫苗株,该弱毒疫苗株是亲本毒鸭坦布苏病毒弱毒疫苗株FX2010‑180P的克隆毒株,其具有SEQ ID NO.1所示的全基因序列,该感染性克隆弱毒疫苗株是通过反向遗传操作方法制得... 李泽君 吴晓刚 李国新文献传递 应用套式PCR快速检测鸭坦布苏病毒 鸭坦布苏病毒是新发现的一种引起鸭产蛋下降、生长迟缓和死亡的黄病毒。目前,没有可靠的快速诊断方法用于该病毒的检测。本研究根据鸭坦布苏病毒E基因序列,设计了两对重叠引物P1、P2和P3、P4,建立了检测鸭坦布苏病毒的套式PC... 颜丕熙 李国新 吴晓刚 闫丽萍 滕巧泱 李泽君关键词:黄病毒 敏感性 流行病学调查 坦布苏病毒MM1775株反向遗传操作系统的建立 2015年 本研究将坦布苏病毒MM1775株全基因组分3段克隆,获得3个重组质粒,利用融合PCR方法扩增得到5'端含有T 7启动子的病毒全长c DNA,经体外转录得到感染性的RNA,将RNA转染DF-1细胞,48 h后出现细胞病变。当细胞病变达到90%,将细胞上清接种DF-1细胞,72 h后进行间接免疫荧光(indirect immunofulorescence,IFA)和RT-PCR鉴定,结果表明拯救病毒成功。序列测定结果显示,拯救毒的全基因组序列与亲本毒完全一致,表明MM1775反向遗传操作系统构建成功,为进一步研究坦布苏病毒致病性等相关分子机制奠定了基础。 闫大为 吴晓刚 李雪松 石迎 冯琳琳 崔宏锐 李国新 李泽君应用套式RT-PCR快速检测鸭坦布苏病毒 被引量:53 2011年 鸭坦布苏病毒是新发现的一种可引起鸭产蛋下降、生长迟缓和死亡的黄病毒。目前尚无可靠的快速诊断方法用于该病毒的检测。本研究根据鸭坦布苏病毒E基因序列,设计了2对重叠引物P1、P2和P3、P4,建立了检测鸭坦布苏病毒的套式RT-PCR方法,该套式RT-PCR比一般PCR敏感性高10倍。采用该方法对安徽省、河北省、山东省、浙江省、上海市等地发病鸭场的63份样品进行了检测,阳性检出率为48/63(76.2%),而病毒分离率仅为13/63(20.6%)。由此表明,与其他方法相比较,本试验所建立的套式RT-PCR方法具有快速、敏感、特异优点,可用于鸭坦布苏病毒的流行病学调查及病毒的检测。 颜丕熙 李国新 吴晓刚 闫丽萍 滕巧泱 李泽君关键词:套式RT-PCR 鸭坦布苏病毒感染性克隆弱毒疫苗株及其制备方法和应用 本发明公开了一种鸭坦布苏病毒感染性克隆弱毒疫苗株,该弱毒疫苗株是亲本毒鸭坦布苏病毒弱毒疫苗株FX2010-180P的克隆毒株,其具有SEQ?ID?NO.1所示的全基因序列,该感染性克隆弱毒疫苗株是通过反向遗传操作方法制得... 李泽君 吴晓刚 李国新鸭坦布苏病毒病活疫苗(FX2010-180P株)毒种保存期的研究 被引量:10 2014年 鸭坦布苏病毒病是新发的一种以蛋鸭产蛋下降为主要特征的传染病,目前仍没有疫苗可预防和控制该病。将鸭坦布苏病毒强毒(FX2010株)在鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fi broblasts,CEFs)上连续传代培养180代,获得1株致弱毒株(FX2010-180P株),利用该弱毒株研制了鸭坦布苏病毒病活疫苗。本研究为了测定鸭坦布苏病毒病活疫苗(FX2010-180P株)毒种的保存期,将-80℃条件下保存了16个月的原始种子批和基础种子批各取3支,进行纯净性检验、鉴别检验以及病毒滴度测定。结果表明,各批次毒种在保存16个月后,病毒纯净无污染,病毒滴度没有明显下降。把基础种子在CEFs上增殖后,低剂量接种鸭子,检验毒种的免疫原性。结果显示,用毒种增殖的病毒免疫原性良好,101.5和102.5 TCID50的剂量可以为接种鸭提供90%和100%的保护。 吴晓刚 高旭元 余磊 李雪松 闫丽萍 滕巧泱 李国新 李泽君关键词:毒种 保存期