吴静
- 作品数：28 被引量：122H指数：7
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- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程文化科学更多>>
- 羧肽酶研究进展被引量：21
- 2012年
- 羧肽酶(Carboxypeptidase)是一类可水解肽链C末端氨基酸残基的蛋白酶,广泛存在于高等植物、动物组织及真菌中,主要分为丝氨酸羧肽酶(EC3.4.16.-)、金属羧肽酶(EC3.4.17.-)和半胱氨酸羧肽酶(EC3.4.18.-)3个亚类。作者综述了羧肽酶的研究进展,主要包括羧肽酶的应用、性质、来源分布、克隆表达及研究意义,并对其研究前景进行了展望。
- 吴静闵柔邬敏辰陈伟
- 关键词：羧肽酶
- 一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法被引量：1
- 2017年
- 为了提高胰岛素前体(PI)的产量,构建了p PIC9K-PI表达载体并电转化至毕赤酵母菌株GS115中,在浓度为4.0 mg/m L的G418抗性平板上筛选到了1株拷贝数为12的菌株CL012。将SNAREs(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子受体蛋白)组分中的SNC2和SNC2-SSO2分别转入菌株CL012中,并在摇瓶和5 L发酵罐水平上检测SNAREs对PI产量的影响。结果表明:摇瓶水平上,甲醇诱导96 h后,菌株CL012的PI产量为1.53 mg/L;表达SNC2和SNC2-SSO2的菌株的PI产量分别为1.89 mg/L和2.21 mg/L,分别比菌株CL012提高了23.53%和44.44%。在5 L发酵罐上进行高密度发酵,甲醇诱导96 h后菌株CL012的PI产量为53 mg/L,是摇瓶水平的34.64倍;表达SNC2和SNC2-SSO2的菌株的PI产量分别达到64 mg/L和78 mg/L,分别比菌株CL012提高了20.75%和47.17%。由此得出结论 SNAREs可以促进胰岛素前体的分泌,从而提高在毕赤酵母中的异源表达。
- 梁晨晨王立罗秋玲吴静
- 关键词：毕赤酵母SNARES异源表达
- 化学腐蚀-冻融循环协同作用对砂岩三轴力学特性的影响
- 2023年
- 为研究季冻区岩土工程中化学腐蚀与冻融循环协同作用对岩土工程的共同作用效果,需要同时考虑水化学腐蚀环境、冻融循环条件和三轴应力状态3种因素的影响。以不同浓度的H_(2)SO_(4)、NaOH或Na_(2)SO_(4)溶液模拟水化学腐蚀环境,以冻融循环条件来模拟气候环境,采用水化学溶液pH值(pH=3、5、7、9、11)和冻融循环次数N(N=10/20/30/40/50次)为主要控制参数,开展化学腐蚀-冻融循环协同作用后砂岩试样的三轴压缩试验。岩样的破坏模式均表现为剪切滑移破坏,应力-应变曲线均可分为压实挤压阶段、弹性增长阶段、屈服阶段和破坏阶段4个发展变化阶段。通过对比不同工况下岩样的物理力学参数,分析化学腐蚀-冻融循环协同下岩样力学特性的劣化规律。研究表明:随着冻融次数的增加,应力-应变曲线中的峰值应力、峰值应变和和模量均减小,岩样的损伤劣化程度增大,屈服阶段的屈服平台和塑性变化特征变弱;强酸性溶液对岩样的损伤劣化最大,峰值应力、峰值应变和模量均明显最小;强碱性溶液对岩样的损伤劣化最小,化学反应析出的沉淀物附着于岩样表面及孔隙、裂隙壁面,抑制了岩样的进一步损伤劣化;围压对岩样三轴力学特性的影响最为显著,随着围压增大,应力-应变曲线中的峰值应力、峰值应变和模量均明显增大,屈服阶段的屈服平台和塑性变化特征变强。研究结果可为寒区岩土工程的建设提供理论依据。
- 吴静吴静汪垲彬肖聪路亚妮
- 关键词：冻融循环化学腐蚀三轴压缩力学特性砂岩
- 米曲霉木聚糖酶N端引入二硫键对其热稳定性的影响被引量：5
- 2013年
- 为提高源自米曲霉Aspergillus oryzae 11家族木聚糖酶(AoXyn11A)的热稳定性,对其相关的氨基酸残基进行定点突变改造。通过对野生型酶AoXyn11A和一种超耐热酶EvXyn11TS的N端氨基酸残基序列进行同源比较,在野生型酶N端引入一个二硫键,获得突变酶AoXyn11AM。野生型酶和突变酶的热稳定性通过同源建模和分子动力学模拟分析评估后,其基因分别在毕赤酵母GS115中进行表达并分析温度对表达产物酶活性的影响。结果表明:突变酶的最适温度由野生型酶的55℃提高至60℃;在50℃和55℃保温30 min,突变酶保留94%和45%保温处理前的酶活性,分别较野生型酶(62.5%和1.4%)有大幅度的提高。突变酶在保留了野生酶其它优良性质的基础上,提高了热稳定性,具有潜在的工业应用价值。
- 陈忠法唐存多汪俊卿吴静邬敏辰
- 关键词：米曲霉木聚糖酶二硫键热稳定性定点突变
- 综合性大学五年制临床医学精英化培养的思考被引量：2
- 2014年
- 江南大学临床医学专业是2012年经教育部批准招生的,根据现代医学教育理念、学校医学办学能力和办学定位,首批招生30名学生。经过国内外调研,确定了"小规模、精英化"的培养定位。根据培养定位和学校的学科优势,制定了人才培养方案,构建了课程体系;同时在实施过程中也发现存在的问题并提出改进措施。
- 邱丽颖鲁可可张海峰范红斌李想吴静李英
- 关键词：五年制临床医学
- 水解蛋黄粉Bonepep对骨代谢的影响被引量：2
- 2013年
- 在小鼠和人体预实验水平上,作者旨在研究源于鸡蛋蛋黄的水解蛋黄粉(Bonepep)对骨质代谢的影响。给SD小鼠喂食10 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)的Bonepep,使小鼠胫骨伸长提高了4.5%和10.3%。SD小鼠在长时间高剂量喂食后,其喂食期间各项生理生化指标与对照组比较未发生显著变化。而摄食Bonepep的小鼠尿样中脱氧吡啶啉(Dpyr)含量与未喂食的对照组降低了84.6%,其大腿端部断面中海绵骨明显减少。女性志愿者连续服用5周水解蛋黄粉后,其尿样中反映骨吸收指标的脱氧吡啶啉(DPD)与、尿中I型胶原交联N末端肽(NTx)水平无显著变化,但反映骨形成指标的骨碱性磷酸酶(BALP)活性则提高了14.6%。上述结果表明,水解蛋黄粉能够有效地抑制破骨分化和促进成骨生长。
- 吴静宋兴安堀江健二金武祚刘立明
- 关键词：骨代谢
- 基于动力学分析提高黑木耳多糖产量的pH控制策略被引量：11
- 2006年
- 为了实现黑木耳（Auricularia auricula）深层发酵生产胞外多糖的高产量和高生产强度的统一，在7L发酵罐中研究不同pH对A．auricula分批发酵生产黑木耳多糖的影响．A．auricula细胞生长的最适pH为5．0，而黑木耳胞外多糖合成的最适pH为5．5．恒定pH有利于合成黑木耳多糖，但降低了黑木耳多糖的生产强度．发酵液中较高的pH不利于葡萄糖的消耗，使得发酵结束时的残余葡萄糖含量随pH的升高而升高．分析不同pH条件下A．auricula发酵生产黑木耳多糖动力学参数，发现较低pH有利于加快底物消耗，而较高的细胞生长速率则出现在pH5．0，pH5．5时细胞则具有较高的胞外多糖合成速率和对葡萄糖的得率．在此基础上提出了A．auricula发酵生产黑木耳多糖的两阶段pH控制策略：0—48h控制发酵液pH5．0，48h后控制pH5．5．实验结果表明，采用两阶段pH控制策略，A．auricula胞外多糖产量比控制pH5．5时提高了8．1％，残留葡萄糖含量降低了15．2％，产生最大胞外多糖的时间缩短至96h，且黑木耳多糖的生产强度比pH5．5时提高了35．1％．
- 吴静章克昌
- 关键词：黑木耳深层发酵PH控制胞外多糖
- 天然N-末端人白细胞介素-29成熟肽在毕赤酵母中表达条件的优化被引量：4
- 2013年
- 目的优化天然N-末端人白细胞介素-29(Human interleukin-29,hIL-29)成熟肽在毕赤酵母中的表达条件,高效表达天然N-末端hIL-29成熟肽。方法采用单因素试验和L(934)正交试验,分析摇瓶发酵条件下甲醇添加量、起始pH值、诱导时间及诱导温度对毕赤酵母工程菌GS115/hIL-29发酵液A450值的影响;用5 L发酵罐初步探索工程菌株的高密度发酵策略。结果影响重组毕赤酵母摇瓶发酵液A450值的因素重要性依次为:诱导温度>起始pH值>甲醇添加量>诱导时间,最佳发酵条件为:起始pH值7.5、甲醇添加量1.5%、26℃诱导60 h,在此条件下,发酵液的A450值达1.72;高密度发酵策略为:pH 7.5,甲醇与溶氧反相偶联,26℃诱导12 h,在此条件下,目的蛋白的表达量明显高于摇瓶水平;高密度发酵12、24 h表达的蛋白与羊抗人IL-29多抗的反应强度明显高于摇瓶发酵表达的蛋白。结论优化了工程菌株GS115/hIL-29摇瓶发酵和发酵罐高密度发酵条件,实现了重组天然N-末端hIL-29成熟肽在毕赤酵母GS115中的高效表达,为其进一步的中试放大工艺奠定了基础。
- 郑海军陆源陈伟蔡鲜徐望邬敏辰吴静
- 关键词：毕赤酵母高密度发酵
- 木聚糖酶EvXyn11^(TS)耐热性与其N端二硫键的相关性分析被引量：8
- 2013年
- 【目的】以糖苷水解酶11家族耐热木聚糖酶EvXyn11TS为研究对象,定点突变其编码基因Syxyn11,揭示EvXyn11TS耐热性与其N端二硫键的相关性。【方法】对不同来源的、与EvXyn11TS一级结构相似度较高的若干11家族木聚糖酶进行多序列同源比对,发现只有耐热的EvXyn11TS在其N端存在一个二硫键(Cys5-Cys32);运用分子动力学模拟预测该N端二硫键存在与否对木聚糖酶热稳定性的影响。以人工合成的Syxyn11为母本,采用PCR技术将其编码Cys5的密码子TGT突变为编码Thr5的ACT,构建去除了N端二硫键的突变酶(EvXyn11M)的编码基因Syxyn11M;分别将Syxyn11和Syxyn11M在毕赤酵母GS115中进行表达,并分析表达产物EvXyn11TS和EvXyn11M的温度和pH特性。【结果】酶学性质研究结果表明:EvXyn11M的最适温度Topt由突变前的85℃降至70℃;EvXyn11TS在90℃的半衰期t1/290为32 min,而EvXyn11M在70℃的半衰期t1/270仅为8.0 min。【结论】运用分子动力学模拟预测了N端二硫键对EvXyn11TS耐热性的重要作用,并通过定点突变验证之,为其它与耐热EvXyn11TS一级结构相似的、11家族常温高比活性木聚糖酶的耐热性改造提供了新的技术策略。
- 闵柔李剑芳高树娟张慧敏吴静邬敏辰
- 关键词：木聚糖酶耐热性分子动力学模拟定点突变
- 真菌壳聚糖酶研究进展被引量：7
- 2012年
- 壳聚糖酶是专一性降解壳聚糖的糖苷水解酶。在对比分析真菌壳聚糖酶和细菌壳聚糖酶的异同的基础上,总结近年来真菌壳聚糖酶在分类、酶学性质、基于分子生物学和生化工程的高产策略的研究进展。通过整理文献发现,来自真核微生物的壳聚糖酶降解产物为壳寡糖与氨基葡萄糖,具有分子质量大、活性较低等特点,针对酶活低这个迫切要解决的问题,讨论了提高产酶的潜在策略。
- 龚香艺吴静邬敏辰
- 关键词：酶学性质
