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牛白细胞介素-4真核表达载体的构建及免疫佐剂效应研究: 2013年; 应用RT-PCR技术从植物血凝素(PHA)活化的牛外周血淋巴细胞中扩增出牛白细胞介素4(IL-4)特异性目的片段,将其克隆到真核表达载体pVAX1,双酶切及测序鉴定正确后,将构建好的重组质粒pVAX1-IL-4应用脂质体LipofectamineTM2000转染至293T细胞,经RT-PCR检测IL-4可进行转录表达,且MTT检测其具有生物学活性,表明IL-4在转染细胞中可以成功表达。然后将构建好的pVAX1-IL-4作为基因佐剂来研究其对牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVD)核酸疫苗pVAV1-E0的免疫增强作用。经ELISA和MTT检测结果表明,pVAX1-IL-4同pVAV1-E0联合免疫组小鼠的特异性抗体水平、淋巴细胞增殖水平与pVAV1-E0单疫苗免疫组相比差异显著(P<0.05)。证明重组质粒pVAX1-IL-4可作为佐剂与核酸疫苗共同作用来提高后者的免疫原性。; 宫玉玲王克栋孙建华熊浩石明冉多良; 关键词：克隆真核表达白细胞介素-4 293T细胞免疫佐剂

牛病毒性腹泻病毒E0基因原核表达载体的构建及表达被引量：2: 2012年; 采用RT-PCR方法,利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)C24V株接种MDBK细胞,提取病毒RNA,扩增出BVDV-E0基因,将所得片段与pET-28a表达载体连接,转化至BL-21大肠杆菌中,筛选阳性克隆,鉴定后证明pET-28a-E0原核表达载体构建成功。经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定,鉴定结果表明,目的蛋白在大肠杆菌中得以表达。; 王璐郭春娟吴星星宫玉玲季新成冉多良; 关键词：克隆原核表达

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒核酸疫苗的构建及其免疫效果研究被引量：2: 2013年; 为提高牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)核酸疫苗的免疫效力,本实验应用PCR方法扩增BVD病毒(BVDV)E0基因,构建真核表达质粒pVAX1-E0,转染293T细胞,经RT-PCR和western blot分析显示,转染细胞能够瞬时表达E0蛋白。并分别将pVAX1、pVAX1-E0或将pVAX1-E0分别与一种表达细胞因子基因的重组质粒作为佐剂(pVAX1-IL-2、pVAX1-IL-4及pVAX1-IFN-γ)免疫小鼠,采用间接ELISA法检测免疫小鼠BVDV抗体效价,以MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖活性。实验结果表明,与pVAX1-E0相比,接种pVAX1-E0/pVAX1-IL-2小鼠血清E0抗体水平及淋巴细胞增殖水平显著提高(p<0.01),表明细胞因子基因佐剂IL-2能够有效提高BVDV E0核酸疫苗免疫效果,可以刺激小鼠产生良好的免疫应答。; 宫玉玲冉多良季新成刘建华; 关键词：牛病毒性腹泻病毒细胞因子核酸疫苗

猪2型圆环病毒新疆株全基因组的克隆与序列分析: 2012年; 根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)的核苷酸序列,设计了一对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出一株PCV2全基因组,将其克隆到pMD simple18-T载体上,筛选获得了重组质粒pMD18-T-PCV2。对此重组质粒进行序列测定及同源性分析,结果表明,该PCV2新疆株的全基因组大小为1 767bp,与其它PCV2核苷酸序列同源性为95.0%～99.6%,而与PCV1的同源性仅为76.8%～76.9%。; 吴星星郭春娟王璐宫玉玲孙建华冉多良; 关键词：猪2型圆环病毒全基因组

牛病毒性腹泻病毒两种目的基因核酸疫苗免疫效果的比较: 2015年; 为研究和比较牛病毒性腹泻病毒(BVDV)囊膜蛋白E0和E2基因作为核酸疫苗候选基因的免疫效果,本实验构建了真核重组表达质粒p VAX1-E0和p VAX1-E2,并转染至293T细胞中,通过RT-PCR和western blot方法检测目的基因在293T细胞中的转录和表达情况。同时将重组质粒联合基因佐剂p VAX1-IL-2免疫小鼠,ELISA检测其中和抗体,结果表明,p VAX1-E0免疫组能够有效的诱导特异性血清抗体的产生,而p VAX1-E2免疫组效果不明显。MTT检测显示两组均显著促进了特异性淋巴细胞的增殖,并且p VAX1-E2组效果优于p VAX1-E0组。由此表明,p VAX1-E0可以诱导较好的体液免疫,而p VAX1-E2在细胞免疫方面效果较好。; 石明宫玉玲徐全圆李娜刘建华加尔肯冉多良; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2基因真核表达核酸疫苗

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宫玉玲