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人表皮生长因子基因在家蚕细胞和幼虫中表达及生物活性的研究: 人表皮生长因子(hEGF),一种由53个氨基酸残基组成的单链多肽,具有广阔的应用前景。本研究采用家蚕杆状病毒表达系统来高效表达hEGF。通过构建了重组质粒pBacPAK- hEGF,将该重组质粒与线性化病毒Bm-BacP...; 吕正兵张文平于威陈健聂作明张文伶张晓燕张耀洲; 关键词：人表皮生长因子生物活性杆状病毒表达系统; 文献传递

家蚕富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白基因BmSPARC的表达及亚细胞定位被引量：1: 2009年; 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)是一种小分子酸性糖蛋白,在有机体内广泛分布,通过与胞外基质蛋白相互作用而表现出多种生物活性。从家蚕蛹cDNA文库中获得SPARC基因(BmSPARC)的cDNA序列,GenBank登录号为FJ602783。利用生物信息学方法对此序列进行分析表明,BmSPARC的cDNA序列全长1 626 bp,含有1个954 bp的开放阅读框(ORF),编码317个氨基酸残基;同源性比较显示该基因编码蛋白的氨基酸序列在无脊椎动物中具有较高的保守性。将BmSPARC片段在大肠杆菌BL21中表达并纯化后,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,通过亚细胞定位研究发现该基因表达蛋白主要存在于细胞质中。利用实时荧光定量PCR的方法,对BmSPARC在家蚕不同发育时期、不同组织中的mRNA转录水平进行比较,并采用Western blotting方法对BmSPARC蛋白的表达进行分析,结果表明:BmSPARC在家蚕卵期和5龄幼虫丝腺组织中无表达,而在5龄幼虫、蛹、蛾发育时期及5龄幼虫的头部、脂肪体、中肠、马氏管、卵巢、表皮和气门等7个组织中均有不同程度的表达,其中在蛾期和5龄幼虫卵巢中的表达量较高。研究结果为进一步探讨BmSPARC在家蚕生长发育过程中的生物学功能打下了基础。; 朱玉娟吕正兵陈琴聂作明王丹陈健刘立丽郑青亮陈剑清沈红丹盛清全滟平徐杰张文平吴祥甫张耀洲; 关键词：家蚕亚细胞定位实时荧光定量PCR

家蚕一种富含半胱氨酸蛋白基因BmCRP的原核表达与定位研究: 2009年; 从家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列,经生物信息学分析显示该cDNA序列全长1 011 bp,包括5′-UTR 200 bp和3-′UTR 136 bp,编码224个氨基酸,其编码蛋白质的N-端富含半胱氨酸,将该基因命名为BmCRP(基因登录号:DN985186.1)。该基因编码蛋白主要有α螺旋、β-折叠、无规则卷曲3种二级结构,具有cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点等5种功能位点。构建重组表达载体pET-28 a(+)-BmCRP并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得融合蛋白,用纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体与BmCRP有较好的特异性。W estern b lotting检测结果:BmCRP蛋白在家蚕卵、幼虫、蛹、蛾4个发育时期均有表达,蛹期表达量最高;在5龄幼虫的表皮、头部、卵巢、睾丸、马氏管中均有表达。荧光定量RT-PCR检测结果:BmCRPmRNA在家蚕卵、幼虫、蛹、蛾的整个生命周期中,其转录水平呈增加趋势;在5龄幼虫不同组织中的转录水平从高到低依次为表皮、头部、生殖腺、中肠、马氏管、气管、丝腺和脂肪体。细胞定位实验结果显示BmCRP蛋白在Bm5细胞的细胞核和细胞质中均存在,细胞核中的荧光信号比细胞质中的信号强。研究结果有助于进一步探明家蚕BmCRP蛋白的结构和功能。; 陈世慧张文平盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘丽丽沈红丹舒建洪陈剑清吴祥甫张耀洲; 关键词：家蚕基因组结构细胞定位实时荧光定量PCR

2种家蚕蛋白酶抑制剂的重组表达及产物对胰岛素口服吸收的影响: 2017年; 口服胰岛素(INS)治疗糖尿病存在因胃肠道的蛋白酶而发生药物降解的问题。从家蚕蛹中分离了Bm Kazal、Bm CP82种蛋白酶抑制剂,设计其编码基因引物序列克隆2个目的基因,构建重组表达载体p ET28a-Bm Kazal和p ET32a-Bm CP8在大肠埃希菌(Escherichia coli)中表达并纯化了重组Bm Kazal和Bm CP8蛋白。将这2种蛋白酶抑制剂与INS混匀制成INS口服悬液给小鼠灌胃,研究其对INS口服吸收的影响。试验结果表明:按1.5 IU/kg剂量皮下注射INS的对照组小鼠,血药达峰浓度C_(max)为(7.56±1.40)m IU/L,达峰时间T_(max)为1 h;口服0.5μg/μL Bm CP8+15 IU/kg INS组、0.5μg/μL Bm Kazal+15 IU/kg INS组、0.5μg/μL Bm CP8+0.5μg/μL Bm Kazal+15 IU/kg INS组小鼠的血药达峰浓度C_(max)分别为(6.07±0.51)、(7.12±0.89)、(9.20±2.00)m IU/L,达峰时间T_(max)均为3 h;而按15 IU/kg剂量单纯口服INS对照组小鼠的血药浓度一直维持在4.32 m IU/L左右。以上结果说明Bm CP8、Bm Kazal能够协同INS经小鼠胃肠道口服吸收入血液,而且二者联合使用效果更好,使小鼠体内对INS的口服生物利用度由1.51%提高至4.17%,有促进小鼠对胰岛素口服吸收的作用。; 赵梦茹王丹夏良存李司李司; 关键词：胰岛素口服吸收小鼠

昆虫胸腺素超家族蛋白研究进展: 2016年; 胸腺素作为一种超家族蛋白在免疫调节、机体发育等生理活动中发挥重要作用,广泛分布于脊椎动物和无脊椎动物中,在进化过程中高度保守。对于脊椎动物胸腺素功能的研究比较清楚,已经被开发成药物应用于临床,治疗免疫缺陷性疾病、肝炎以及某些癌症。但对于无脊椎动物特别是对于家蚕等昆虫的胸腺素研究较少。在NCBI数据库中可以找到仅20种包含THY保守结构域的相关蛋白,这些蛋白分别存在于家蚕、果蝇等物种。该文就昆虫胸腺素超家族蛋白近20年来的研究进展进行了综述,包括昆虫胸腺素超家族蛋白的同源性、进化分析以及不同昆虫胸腺素的功能和特征。; 张晨吴业卿方强王永娣张文平; 关键词：昆虫胸腺素同源性进化分析

家蚕孤雌生殖相关蛋白PGL的鉴定与生物信息学分析: 2010年; 应用二维凝胶电泳(2DE)技术分离有性生殖蚕卵与孤雌生殖蚕卵的差异蛋白,通过基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOFMS)分析获得大量小肽的序列特征。与已构建的家蚕cDNA文库及蛋白质数据库进行比对,确定一个在家蚕孤雌生殖过程中表达量显著上调的差异蛋白为磷脂酰肌醇蛋白聚糖(phosphatidylinositol glycan,PGL)。为了探讨PGL蛋白在家蚕孤雌生殖发生中的作用,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增目的基因5′端片段,获得PGL蛋白基因的全长cDNA,生物信息学分析显示该基因cDNA全长1038bp,编码345个氨基酸,其编码蛋白理论分子质量为39.516kD,等电点为5.845,包含1个保守的GPI8结构域,信号肽概率为0.997,可能为分泌型蛋白,预测蛋白功能域包含酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化、N糖基化、蛋白激酶C磷酸化等多个功能位点。依据PGL蛋白的理化性质、结构功能推测其有可能在不同程度上通过细胞信号转导途径参与了家蚕孤雌生殖发生过程并发挥重要作用。; 张文平吕正兵龙晓辉聂作明夏佳音张耀洲; 关键词：差异表达蛋白二维凝胶电泳基因克隆生物信息学分析

家蚕有性生殖和孤雌生殖差异蛋白磷脂酰肌醇蛋白聚糖基因的克隆和序列分析: 应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的差异，得到一些差异蛋白点，并对这些差异蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析，获得了相关差异蛋白的序列特征。...; 张文平吴祥甫张耀洲吕正兵聂作明龙晓辉夏佳音陈健徐杰盛清王丹; 关键词：孤雌生殖双向凝胶电泳差异蛋白

家蚕胸腺素对蚕体抗核型多角体病毒感染能力的影响被引量：4: 2018年; 胸腺素（THY）在动物进化过程中高度保守,并在许多生命活动中发挥重要作用。将家蚕核型多角体病毒（Bm NPV）感染家蚕5龄幼虫后,分别提取蚕体及不同组织的RNA和蛋白质,检测Bm THY基因的转录及蛋白质表达的变化,并探究利用重组胸腺素r Bm THY增强家蚕抗病毒能力的可行性。qRT-PCR检测结果表明,感染Bm NPV后的家蚕5龄幼虫,其血淋巴、脂肪体、丝腺和气管中的Bm THY基因mRNA转录水平不同程度上调,而马氏管、中肠和头部组织中Bm THY基因mRNA转录水平则呈下调趋势;Western blotting检测家蚕5龄幼虫感染Bm NPV后72 h,蚕体内Bm THY蛋白的表达水平下降42.3%。家蚕5龄幼虫接种Bm NPV后,分别添食质量浓度为340μg/m L（高剂量）、34μg/m L（中剂量）和3.4μg/m L（低剂量）的r Bm THY溶液,调查3组幼虫的发病率为43.8%、54.0%和57.6%,而对照组幼虫分发病率为62.2%。研究结果初步证明Bm NPV感染可降低蚕体及部分组织中Bm THY的基因转录与蛋白质表达水平,高剂量r Bm THY添食处理可以在一定程度上提高家蚕抗Bm NPV病毒感染的能力。; 周鑫鑫王永娣廖金旭方强方强张文平; 关键词：家蚕核型多角体病毒胸腺素蛋白质表达

生物信息学课程教学模式探索: 2014年; 生物信息学是现代生物制药技术人员需掌握的新兴技术,该技术能科学有效地去管理、处理与分析海量的序列数据与实验数据,并不断挖掘出各种可能的生物学关系,在医药开发过程中起着重要的作用。因此,生物信息学课程对处于后基因组时代的现代生物制药技术人才培养显得越来越重要。由于该门技术涉及诸多学科的交叉内容,迫切需要进行该门课程的教学模式探索,故对该课程的最佳教学模式进行了探索。; 聂作明盛清吕正兵姚玉华王丹张文平; 关键词：生物信息学教学模式

导师制+学团制:生物科学人才培养模式探讨被引量：4: 2014年; 结合浙江理工大学生命科学学院生物技术、生物制药专业及省级实验教学示范中心建设的情况,以教学改革为试点和动力,构建"导师制+学团制"的人才培养系统工程,发挥学生工作管理者、导师、学生的作用,有效实施并科学评价"导师制+学团制",以达到建立一套全新的生物科学人才培养模式之目的,培养理论知识扎实、实验动手能力强、综合素质高的优质人才。; 张文平陆秋萍李司金甲王丹吕正兵盛清; 关键词：导师制生物科学教育改革

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张文平

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