徐凤青
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：浙江理工大学生命科学学院新元医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人Oct4与细胞穿膜肽融合蛋白的表达
- 2010年
- 目的通过原核表达获得人Oct4(hOct4)与细胞穿膜肽融合蛋白,优化其表达方法并观察其穿膜效果。方法通过基因工程手段构建了pET原核表达载体,利用BL21(DE3)和Rosetta2(DE3)蛋白表达菌表达蛋白。Ni亲和纯化方法纯化蛋白,蛋白质印迹分析检测融合蛋白组成。将融合蛋白用罗丹明染色后加入人正常皮肤成纤维细胞株BJ观察其穿膜进入细胞情况。结果构建了pET21a(+)-hOct4-11R-His和pET21a(+)-EGFP-11R-His表达载体,转入大肠杆菌中后诱导获得了hOct4-11R-His和EGFP-11R-His融合蛋白,经蛋白质印迹分析检测表明融合蛋白正确。经BJ细胞测试,观察到融合蛋白进入细胞中。结论成功获得了hOct4-11R-His和EGFP-11R-His融合蛋白,且融合蛋白能够高效进入BJ细胞并聚集于细胞核周围。
- 周承亮徐凤青王春红刘韬彭新荣钱其军
- 关键词：重组融合蛋白质类
- 应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒
- 2011年
- 目的建立应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的技术体系,并初步检测所制备病毒的感染活力。方法采用杆状病毒生产系统包装rAAV8-EGFP,经高效液相色谱法提取并纯化病毒,实时荧光定量PCR测定病毒滴度,通过观察绿色荧光蛋白的表达强度来检测rAAV8-EGFP对HEK-293细胞的感染活力。结果实时荧光定量PCR显示成功制备高滴度rAAV8-EGFP,滴度可达1.5×1012vg/ml,100ml摇瓶共得到1.5×1013vg rAAV8-EGFP病毒颗粒;感染后的HEK-293细胞具有较强的绿色荧光蛋白表达。结论应用杆状病毒系统成功制备高滴度、高活力的重组腺相关病毒,为后续研究奠定了基础。
- 范丽徐增辉金华君徐凤青丁娜严淋钱其军
- 关键词：杆状病毒系统腺相关病毒昆虫细胞
- 新型Ad//AAV嵌合病毒携带全长抗体基因对肿瘤治疗作用的研究
- 实验证明肿瘤的基因靶向治疗可以提高治疗效果。研究人员利用基因治疗的方法,用病毒做为载体将全长抗体基因导入细胞,随着基因的表达,细胞自身产生的抗体就可以杀死肿瘤细胞。在2004年,我们实验室最早构建了携带全长抗体基因的腺病...
- 徐凤青
- 关键词：基因治疗
- 文献传递
- 诱导多潜能干细胞(iPSCs)的研究与应用进展被引量：4
- 2011年
- 诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是体细胞在外源因子作用下,经直接细胞核程序重整而重新获得多潜能的干细胞.iPSCs在疾病的模型建立与机理研究、细胞治疗、药物的发现与评价等方面有着巨大的潜在应用价值.在过去几年中,科学家们致力于改进体细胞重编程技术并取得许多突破.然而,为实现其在临床上的应用,必须克服体细胞重编程效率低和iPSCs成瘤风险两大挑战,而且重编程机制有待进一步阐明.结合iPSCs最新研究成果,评述了有关领域国内外研究进展,重点讨论当前存在问题,并展望未来研究方向.
- 付玉华周秀梅徐凤青钱其军
- 关键词：体细胞重编程疾病模型细胞治疗小分子
