徐晓刚
- 作品数：73 被引量：502H指数：13
- 供职机构：复旦大学附属华山医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金卫生部部属(管)医院临床学科重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程农业科学一般工业技术更多>>
- 一种快速同步检测肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变的新方法被引量：7
- 2010年
- 目的 建立基于CycleavePCR技术的肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株快速检测方法.方法 收集102株分离自2005-2008年上海市交通大学附属儿童医院住院患儿的肺炎支原体及136份2009年11-12月上海市交通大学附属儿童医院呼吸道感染的住院患儿经鼻采集鼻咽部痰标本,根据肺炎支原体无突变敏感株与突变耐药株23S rRNA基因2063/2064位的碱基差异及上下游保守序列分别设计新型特异性探针（Cycling探针）及引物,建立肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株检测方法,以含有被检测靶序列的重组质粒为阳性对照,以常见呼吸道病原菌DNA为阴性对照,评价其敏感度及特异度.采用自建方法检测所有标本,并与常规PCR及测序结果比较.结果 该方法可准确检出并鉴别大环内酯类敏感及耐药突变株阳性对照,102株临床分离株中83株对大环内酯类耐药,测序表明82株发生23S rRNA基因A2063G突变,1株A2064G突变,与CycleavePCR检测结果相符,136份痰标本检测结果也与常规PCR扩增及测序结果相符.所有阴性对照样品均未出现假阳性.与常规PCR及测序方法相比,CycleavePCR法的敏感度和特异度均达100%.该方法的检测下限为10拷贝/PCR反应,扩增检测可在1.5 h内完成.结论 建立了一种基于CycleavePCR技术的肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株快速检测方法,可同步提供病原菌及其耐药性信息,为肺炎支原体感染诊断及临床合理选用抗菌药物提供参考.
- 徐晓刚刘杨张泓叶信予李万华朱德妹王明贵
- 关键词：大环内酯类突变聚合酶链反应
- 一种快速同步检测肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变的新方法
- 徐晓刚刘杨张泓叶信予李万华朱德妹王明
- 肺炎链球菌临床分离株PBP2b基因序列分析及其应用探索
- 2007年
- 目的通过分析肺炎链球菌PBP2b基因转肽酶编码区的序列差异,建立可区分对青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)与青霉素不敏感肺炎链球菌(PNSSP)的分子生物学方法。方法检测青霉素对肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC),对菌株PBP2b转肽酶编码区进行PCR扩增和序列分析,根据序列差异设计相应引物和探针,并采用PCR-反向杂交方法区分PSSP与PNSSP。结果43株肺炎链球菌(42株临床分离株及1株标准株)中8株为PSSP,30株为青霉素中介株(PISP),5株为青霉素耐药株(PRSP)。经PBP2b基因限制性片段长度多态性分析(RFLP)及测序分析,PSSP与PNSSP (PISP+PRSP)存在谱型及序列差异。根据序列差异建立的检测方法可正确区分PSSP与PNSSP。结论肺炎链球菌PSSP和PNSSP菌株的PBP2b基因转肽酶编码区之间存在可供鉴别的序列差异,据此可建立快速、特异的分子生物学方法,有望为该菌耐药基因的快速诊断提供客观依据。
- 徐晓刚林东防张婴元杨帆朱德妹汪复
- 关键词：链球菌肺炎基因扩增聚合酶链反应
- 用于抗万古霉素耐药菌的药物组合物
- 本发明公开了一种用于抗万古霉素耐药菌的药物组合物，所述药物组合物为含有2,3,4‑三羟基二苯甲酮或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体，其化学结构如式(I)所示：<Image file="DDA000164222966...
- 徐晓刚姚小军
- 文献传递
- 基于单晶氟化钙材料的细胞培养装置及其应用
- 本发明涉及基于单晶氟化钙材料的细胞培养装置及其应用，基于单晶氟化钙材料的细胞培养装置包括用于细胞培养的细胞培养皿和匹配细胞培养皿的细胞爬片，所述细胞培养皿的底部为单晶氟化钙材质，所述细胞爬片为单晶氟化钙材质。与现有技术相...
- 衣晓飞徐晓刚王明贵
- 一种介导万古霉素耐药的基因及其用途
- 本发明属生物医学技术领域，涉及一种介导万古霉素耐药的基因及其用途。本发明所述的耐药的基因具有SEQ ID.1的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID.2的氨基酸序列。所获得的该基因序列为新的万古霉素耐药肠球菌的耐药决定...
- 徐晓刚王明贵林东昉胡付品吴湜叶信予郭燕刘杨朱德妹张婴元
- 文献传递
- 一种介导受体菌对喹诺酮类抗菌药物敏感性下降的质粒
- 本发明属微生物学领域，涉及一种可介导受体菌对喹诺酮类抗菌药物敏感性下降的质粒，该质粒携带的可介导革兰阴性杆菌对喹诺酮类的耐药基因，及该基因的制备方法和用途。本发明从喹诺酮类药物耐药性产生的机制着手，寻找可介导细菌耐药的新...
- 王明贵王明华徐晓刚张婴元
- 文献传递
- 肠球菌万古霉素高水平耐药基因vanA、vanB、vanD和vanM快速分型检测被引量：11
- 2017年
- 目的 建立基于多重PCR技术的肠球菌万古霉素高水平耐药基因vanA、vanB、vanD和vanM的快速分型检测方法。方法 通过分析可介导肠球菌万古霉素高度耐药的D-丙氨酸∶D-乳酸（D-Ala∶D-Lac）连接酶基因序列差异，设计可同时检测肠球菌万古霉素高水平耐药基因vanA、vanB、vanD和vanM的多重PCR分型检测方法，以含vanA、vanB、vanD和vanM基因的重组质粒为阳性对照，以临床常见病原菌DNA为阴性对照，评价其敏感度及特异度。采用新建方法检测50株万古霉素耐药临床分离株，50株万古霉素耐药肠球菌（VRE）临床株于2006年1月至2014年12月分离自上海地区9家医院，并与常规PCR及测序方法比较。结果 vanA、vanB、vanD和vanM基因核苷酸序列一致率为60.8%～71.3%，根据序列差异建立的分型方法可对不同基因型阳性对照样品进行准确分型。所有阴性对照样品均未出现假阳性。检测50株临床分离VRE，18株为vanA型，32株为vanM型，与常规PCR及测序方法比较，敏感度及特异性度均为100.0%。检测下限2×10拷贝/PCR反应，检测可在3.5 h内完成。结论 建立了一种基于多重PCR技术的VRE万古霉素高水平耐药基因快速分型方法，可用于VRE菌株的分子流行病学研究及检测。
- 林东昉陈春辉周迎徐晓刚
- 关键词：肠球菌属基因
- 耐碳青霉烯类抗生素不动杆菌的β内酰胺酶研究被引量：15
- 2007年
- 目的了解不动杆菌属细菌对碳青霉烯类药物的耐药机制,耐药菌株的基因同源性和传播机制。方法采用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛选耐亚胺培南不动杆菌碳青霉烯酶,等电聚焦电泳(IEF)测定产β内酰胺酶等电点,blaTEM,blaSHV,blaCTX-M-Ga-Gc,blaPER-1,blaOXA-23,blaMBL等,引物的PCR进行β内酰胺酶的基因分型,并对PCR产物进行测序;Southern印迹进行苯唑西林酶OXA-23的基因定位脉冲场电泳(PFGE)研究耐亚胺培南不动杆菌同源性。结果6株耐碳青霉烯类不动杆菌均产OXA-23型酶,其中5株同时产PER-1型ESBLs。6株菌blaOXA-23均定位于染色体。3株琼氏不动杆菌属于同一PFGE分型,3株鲍曼不动杆菌分别属于2种PFGE分型。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是导致不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要原因,同时存在blaOXA-23的克隆传播。
- 骆俊沈继录徐晓刚胡付品朱德妹汪复
- 关键词：不动杆菌属
- 16S rRNA甲基化酶在氨基糖苷类抗生素耐药革兰阴性菌中的分布被引量：5
- 2010年
- 目的了解6种编码16SrRNA甲基化酶的基因在氨基糖苷类抗生素耐药革兰阴性菌中的流行情况。方法收集本院2007年10—12月分离的211株阿米卡星和庆大霉素耐药革兰阴性菌,采用PCR检测其中6种甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA)的分布。对16SrRNA甲基化酶基因阳性的菌株,用ERIC-PCR进行同源性分析。结果 211株阿米卡星和庆大霉素耐药革兰阴性菌中,91.5%(193/211)被检出16SrRNA甲基化酶基因,其中133株含armA(133/211,63.0%),60株含rmtB(60/211,28.4%)。阿米卡星MIC≥512mg/L、庆大霉素MIC≥128mg/L的104株肠杆菌科细菌中,甲基化酶基因检出达100%,且armA和rmtB的检出相仿(分别为49与55株)。阿米卡星MIC≥512mg/L、庆大霉素MIC≥128mg/L的94株铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中,甲基化酶检出94.7%(89株),以armA(84株)为主。未检测到rmtA,rmtC,rmtD和npmA基因。ERIC-PCR结果显示该类基因并非单克隆传播。结论几乎所有临床分离的阿米卡星MIC>512mg/L的革兰阴性菌中都能检出armA或rmtB基因。
- 周颖杰余慧郭庆兰徐晓刚叶信予吴湜郭燕王明贵
- 关键词：氨基糖苷类耐药革兰阴性菌
