易敏
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌EIS基因抑制人肺腺癌A549细胞自噬被引量：1
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌EIS基因表达质粒,探讨其对人肺腺癌A549细胞自噬的影响。方法采用PCR技术扩增EIS基因片段并插入空载质粒pcDNA3.1-3flag中,双酶切、测序鉴定克隆质粒的正确性;将重组质粒与对照空载质粒分别与自噬体荧光表达质粒GFP-LC3共转染细胞并以自噬诱导剂雷帕霉素处理,荧光显微镜下观察自噬荧光并计数,Western blot检测EIS蛋白及自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平。结果成功构建EIS基因重组表达质粒PcDNA3.1-EIS-3flag,该质粒共转染细胞组自噬荧光小点较对照组明显减少(P<0.05),重组质粒表达42 ku看到蛋白并可抑制自噬蛋白表达水平。结论结核分枝杆菌EIS基因可抑制A549细胞自噬的形成,其抑制作用与结核分枝杆菌持留性相关。
- 易敏周向东李升锦陈维贤
- 关键词：结核分枝杆菌自噬
- 小毛莨内酯对重组耻垢分枝杆菌eis基因表达的影响被引量：3
- 2013年
- 目的研究小毛莨内酯(Ternatolide,Tern)对重组耻垢分枝杆菌生长增殖及其eis基因表达的影响。方法将5×105MS-eis-PMV261接种于LB培养基培养并加入200 mg/L的Tern作为实验组,MS-eis-PMV261单独培养作为对照,不同时间点测量取菌液波长为600 nm的A值,根据所测A值绘制增殖曲线;提取菌液DNA以RT-PCR方法检测Tern对eis基因表达的影响;免疫印迹法SDS-PAGE及Western Blot检测Tern对EIS蛋白表达的影响。结果 Tern对两组重组耻垢分枝杆菌增殖差异无统计学意义(P>0.05);Tern可抑制eis基因的表达(P<0.05);SDS-PAGE及Western Blot检测发现Tern可显著降低EIS蛋白的表达(P<0.05)。结论 Tern对重组耻垢分枝杆菌的增殖无影响,但可抑制结核分枝杆菌eis基因及其表达的蛋白。该结果对研究持留性结核分枝杆菌的药物治疗提供了实验依据。
- 王开金易敏李升锦
- 关键词：耻垢分枝杆菌
- 结核分枝杆菌eis基因表达对人THP-1细胞细胞因子分泌的影响被引量：3
- 2015年
- 目的研究结核分枝杆菌eis基因表达对人单核巨噬细胞Thp-1细胞的影响,筛选出差异性表达细胞因子,探讨结核分枝杆菌eis基因在单核巨噬细胞致持留的免疫机制。方法 eis基因重组耻垢分枝杆菌MS-pmv261-eis及对照组细菌MSpmv261感染经PMA诱导分化的人单核巨噬细胞Thp-1细胞;细胞信号传导通路抑制剂用于分析作用机制;ELISA方法检测细胞上清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、INF-γ表达水平;筛选差异性表达的细胞因子,RT-PCR进一步确定该细胞因子的基因表达。结果结核分枝杆菌eis基因可引起IL-10表达增加(P<0.05),而对细胞因子IL-4、IL-6、IL-12、INF-γ的表达无显著影响(P>0.05),RT-PCR结果也进一步确证了IL-10基因的高表达。2-AP和U0126能明显抑制MS-pmv261-eis(MS-eis)感染引起的IL-10的释放(P<0.05)。结论结核分枝杆菌eis基因可上调Thp-1细胞IL-10在蛋白水平和基因水平的表达,可能通过MEK1/2或PKR信号通路刺激IL-10的释放来增强机体的免疫功能,其作用可能与结核分枝杆菌持留性有关。
- 朱坤生易敏周向东李升锦
- 关键词：结核分枝杆菌单核巨噬细胞白介素-10
- 灵芝提取物对耻垢分枝杆菌GlmU基因表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究灵芝水提取物、灵芝三萜对耻垢分枝杆菌(M.S-155)增殖曲线、GlmU基因表达、细胞壁结构的影响。方法将6×107 M.S-155接种用含有500μg/mL灵芝水提取物、灵芝三萜的LB培养基培养耻垢分枝杆菌作为实验组,6×107 M.S-155单独培养作为对照,取不同时间A600值绘制耻垢分枝杆菌增殖曲线,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白免疫印迹(Western blotting)检测GlmU蛋白表达情况,透射电子显微镜(TEM)观察细胞壁的形态变化。结果增殖曲线说明灵芝水提取物、灵芝三萜对耻垢分枝杆菌生长明显抑制,对应A600值组间有差异(P<0.05),而同等剂量的灵芝三萜抑菌能力更强;SDS-PAGE及Western blotting检测到相对分子质量51.5×103蛋白处蛋白实验组明显变暗(P<0.05);用TEM观察其对耻垢分枝杆菌细胞壁结构的影响,实验组M.S-155经灵芝三萜处理后的耻垢分枝杆菌的细胞壁明显膨胀、变形。结论灵芝水提取物、灵芝三萜对M.S-155有明显的抑制作用,而其作用位点很可能就是抑制了GlmU基因的体外表达,灵芝提取物不但能够抑制M.S-155增殖而且能够影响细胞壁功能,为进一步研究灵芝应用价值奠定了基础。
- 王开金胡少婷易敏李升锦
- 关键词：灵芝耻垢分枝杆菌
- 丙型肝炎病毒核心蛋白抑制shRNA介导的RNA干扰作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究丙型肝炎病毒编码的蛋白对RNA干扰的抑制作用,筛选出有作用的RNA干扰抑制因子。方法构建丙型肝炎病毒不同蛋白质的真核表达质粒,加入萤火虫荧光素酶基因的RNA干扰体系,共转染HeLa细胞,检测萤火虫荧光素酶活性以观察RNA干扰效果的变化,筛选出有作用的RNA干扰抑制因子。在针对内源性GFP的RNA干扰体系中进一步确证该种抑制作用。利用共转染方法观察该蛋白抑制RNA干扰的剂量效应关系、在不同细胞系中的作用以及对siRNA介导的RNA干扰是否有相同的拮抗作用。结果加入核心蛋白后,萤火虫荧光素酶活性恢复到80%,与空白对照比较有显著性差异(P<0.05)。在绿色荧光蛋白RNA干扰体系中,核心蛋白使绿色荧光蛋白的表达强度明显增加。该种对抗RNA干扰的作用在HepG2、HEK293和HeLa细胞中均存在,且呈剂量依赖关系。在siRNA介导的RNA干扰体系中,加入核心蛋白后萤火虫荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。结论核心蛋白能够对抗shRNA介导的RNA干扰作用,但不能对抗siRNA介导的RNA干扰作用,这种作用具有普遍性。核心蛋白对抗RNA干扰的作用可能有利于提高丙型肝炎病毒在宿主细胞内的生存能力并导致持续感染,亦可能在丙型肝炎病毒致病机制中发挥重要作用。
- 易敏黄文娟宋彩虹陆水英李升锦陈维贤
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白RNA干扰
