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炭疽保护性抗原受体结合区的关键氨基酸位点分析: 2005年; 目的分析炭疽毒素保护性抗原(PA)受体结合区与其功能相关的关键氨基酸位点。方法通过定点突变的方法将PA的Asp683分别突变成为一系列带有不同电荷以及不同长度侧链的氨基酸,通过细胞毒性实验分别探询电荷及立体结构对其活性的影响。同时对Asp683的一些邻近氨基酸进行了定点突变的研究。结果细胞毒性实验显示,不同的突变导致了PA活性不同程度的下降,其中Asp683电荷的改变对其活性的影响尤为明显,但当它突变为不带电荷的氨基酸时,PA仍然保留了一定的活性;而当Asp683突变为带正电的Lys后,PA却保留了相对较高的活性。结论Asp683所带的负电荷在PA与其受体的相互作用中起着关键的作用,但PA与其受体之间的相互作用可能还通过一些其他方式进行。; 葛猛徐俊杰于少洋董大勇李冠霖赵剑付玲陈薇; 关键词：定点突变细胞毒性实验

重组炭疽保护性抗原的表达、纯化与生物活性分析被引量：18: 2004年; 构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,纯度可达 95 %以上。体外细胞毒性试验显示rPA具有较好的生物学活性。用rPA免疫家兔产生的抗血清在体外可抑制炭疽致死毒素的活性 ,表明rPA可诱导机体产生保护性免疫。; 徐俊杰董大勇宋小红葛猛李冠霖付玲庄汉澜陈薇; 关键词：炭疽杆菌炭疽毒素保护性抗原纯化大肠杆菌

混菌发酵中与普通生酮基古龙酸菌产2-酮基-L-古龙酸相关功能蛋白的研究被引量：4: 2012年; 目的:在混菌发酵中,筛选与小菌产2-酮基-L-古龙酸(2-KGA)相关的功能蛋白,并分析蛋白表达量的变化与产2-KGA的关系,寻找影响菌体代谢效率的关键性因素。方法:利用蛋白质组学技术,依据小菌产酸曲线,筛选与小菌产2-KGA有一定相关性的蛋白质,并利用生物信息学数据库,分析其改变与小菌代谢的关联。结果:获得了分辨率和重复性均良好的凝胶蛋白图谱,筛选出与小菌生产2-KGA密切相关的8个蛋白。结论:小菌产2-KGA强度与小菌体内抗氧化蛋白表达水平及糖代谢、能量代谢系统密切相关,推测有活性细胞色素C的含量可能为小菌产2-KGA的限制性因素。; 麻浩李野张磊张海宏蔺新峰周凯易绍琼李冠霖陈薇张怡轩; 关键词：混菌发酵 2-酮基-L-古龙酸蛋白质组细胞色素C 超氧化物歧化酶

炭疽致死毒素对小鼠巨噬细胞杀伤机制的研究: 炭疽致死毒素能够杀伤特定来源的近交系小鼠的巨噬细胞。已知炭疽致死因子(LF)能够特异性酶切MAPKKs的N端造成MAPK信号通路的紊乱并促使细胞内炎性体的生成。目前尚不清楚LF如何使敏感的小鼠巨噬细胞发生快速裂解。目前...; 李冠霖; 关键词：CASPASE NF-ΚB 蛋白质组学; 文献传递

炭疽杆菌芽孢外壁胶原样蛋白(BclA)的多态性分析被引量：1: 2006年; 炭疽杆菌芽孢外壁胶原样蛋白(Bc lA)是芽孢外壁发状菌丝的主要结构成分,也是芽孢的主要免疫原。从国内分离的3株炭疽杆菌中克隆出Bc lA基因并进行了序列分析,结果发现有2株(A16R和40048)的Bc lA与国外报道菌株长度不同,分别含有388个和322个氨基酸,72个和50个GXX三氨基酸重复序列,5个和3个含21个氨基酸的(GPT)5GDTGTT重复序列(Bc lA重复)。另一株40022的Bc lA与国外报道的53169株完全一致,含有370个氨基酸,66个GXX重复,5个Bc lA重复。对我国炭疽杆菌Bc lA蛋白多态性的分析为进行炭疽杆菌的基因分型以及研究炭疽芽孢的免疫原性和致病机理打下基础。; 李冠霖徐俊杰董大勇宋小红陈薇; 关键词：炭疽杆菌多态性芽孢

重组炭疽水肿因子的表达与生物活性分析被引量：1: 2005年; 炭疽毒素包括3种蛋白因子,即保护性抗原(PA)、致死因子(LF)和水肿因子(EF)。EF是钙调蛋白依耐的腺苷酸环化酶,可使细胞cAMP浓度升高,导致宿主防御能力下降。为深入研究炭疽毒素的作用机理,构建了原核表达质粒,在大肠杆菌中表达出重组EF(rEF)。经鉴定,rEF以可溶形式表达于细菌胞质中。经过金属螯和层析、阳离子交换层析和凝胶层析,每升诱导培养物可获得约5mg重组蛋白。用重组蛋白免疫家兔获得了兔多抗,能够在细胞试验中中和rEF ,体外细胞试验显示rEF具有很好的生物活性,在J774A .1和CHO细胞试验中,能与LF共同竞争和PA的结合位点,相互抑制。上述工作为深入研究炭疽毒素的作用机理。; 董大勇徐俊杰宋小红付玲陈薇李冠霖葛猛; 关键词：炭疽杆菌炭疽毒素

炭疽、鼠疫联合疫苗: 本发明提供一种能同时保护人或动物免受炭疽芽孢杆菌和鼠疫耶尔森氏菌侵害的联合疫苗。该疫苗包括一定形式的炭疽芽孢杆菌PA抗原、鼠疫耶尔森氏菌V抗原和鼠疫耶尔森氏菌F1或这三种抗原的保护性表位。抗原优选以基因工程方法表达的经分...; 陈薇李建民徐俊杰侯利华付玲董大勇李冠霖; 文献传递

LFn-PSCA融合蛋白的表达和生物活性研究: 2006年; 目的研究大肠杆菌中表达的炭疽毒素致死因子氨基端与前列腺干细胞抗原(PSCA)融合蛋白的生物活性。方法分别扩增炭疽毒素致死因子LF(lethal factor)N端254个氨基酸(LFn)的基因片段和PSCA氨基酸29～100的基因片段,将两片段先后克隆进分泌型载体pAS22中,构建成表达质粒pAS-LFn-PSCA,在大肠杆菌中表达,并对融合蛋白进行纯化和活性检测。结果实现了融合蛋白LFn-PSCA的分泌型表达。纯化后纯度可达90％以上。体外试验显示LFn-PSCA对小鼠巨噬细胞无毒性,并保留了LFn与保护性抗原结合的活性。结论在大肠杆菌中实现了LFn-PSCA的分泌型表达,为继续进行以炭疽毒素为载体增强机体免疫应答的研究打下基础。; 于少洋易绍琼徐俊杰葛猛付玲于长明李冠霖陈薇; 关键词：前列腺干细胞抗原融合蛋白

针对炭疽保护性抗原不同结构域的中和性单克隆抗体的筛选和鉴定被引量：4: 2005年; 炭疽保护性抗原(PA)是炭疽毒素的重要组分,同时也是现有炭疽疫苗的主要有效成分,在炭疽杆菌的致病与免疫中发挥关键作用。以重组PA为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,结合炭疽毒素敏感细胞的毒性中和试验,大量筛选抗PA单克隆抗体,获得了9株炭疽毒素中和性单抗。进一步分析表明这些单抗以IgG1亚类为主,分别识别PA3个结构域的4个不同中和表位区。针对结构域2的4株单抗识别同一表位区,其中3株单抗的中和活性强于抗PA多抗;针对结构域4的4株单抗识别两个不同表位区;另有1株单抗识别位于结构域3的表位。实验结果提示PA具有多个中和表位,分别位于其不同结构域,其中结构域2、4包含主要中和表位。实验中获得的针对不同表位的中和性单抗为深入研究PA的免疫保护机理提供了工具,也为研制针对炭疽毒素的被动免疫制剂和治疗药物打下基础。; 徐俊杰张军刘树玲吕天敬陈薇李冠霖葛猛郭强; 关键词：炭疽杆菌炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体中和表位

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李冠霖