李国庆
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
- 供职机构：兰州大学第二医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 5-氮胞苷诱导脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化的毒理遗传学研究被引量：3
- 2009年
- 目的:观察5-氮胞苷(5-aza)对成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌细胞方向诱导分化的毒理遗传学影响.方法:自成人脂肪组织中分离培养ADMSCs,用5-aza对ADMSCs进行诱导,设立不同诱导浓度的I,II,III,(5,10,20μmol/L)组及对照组IV,光镜下观察细胞的生长情况及形态学变化,免疫细胞化学方法检测心肌特异性肌钙蛋白I(cT-nI),RT-PCR方法检测cTnI基因的表达,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,并对各诱导组常规核型分析.结果:诱导后4wk I,II,III组ADMSCs呈现类似心肌细胞的形态学特征.I,II,III组免疫组化结果见cTnI阳性表达,RT-PCR条带见cTnI基因表达.各组染色体结构及数目均未见异常.结论:5-aza作为诱导剂对ADMSCs遗传性无不良影响.
- 张卫泽李国庆陈永清马凌秦勉韩娟萍
- 关键词：脂肪间充质干细胞细胞遗传
- 人脂肪间充质干细胞的分离培养及其遗传稳定性被引量：11
- 2009年
- 背景:研究发现脂肪间充质干细胞核型具有不稳定性,且干细胞移植后长期安全评价等问题尚未从根本上得到解决。目的:观察体外分离培养的人脂肪间充质干细胞传代培养的遗传稳定性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/11在解放军兰州军区兰州总医院骨科研究中心完成。材料:成人腹部大网膜脂肪组织来源于单纯性阑尾炎患者,由解放军兰州军区兰州总医院普通外科提供。方法:胶原酶消化法体外分离培养人脂肪间充质干细胞,加入含体积分数为10%胎牛血清的HG-DMEM培养基吹打细胞沉淀,过滤后于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度条件下培养,待细胞生长至70%～80%融合时消化传代。分别取第3,25,30代脂肪间充质干细胞进行相关指标检测。主要观察指标:脂肪间充质干细胞表面标志表达、细胞增殖、核型分析、超微结构电镜观察、恶性肿瘤特异性生长因子的表达。结果:第3代脂肪间充质干细胞CD13,CD44,CD59均呈阳性表达,而造血干细胞表面标志CD34及成纤维细胞表面标志HLA-DR均呈阴性表达;染色体的形态、结构和数目均未见异常,呈二倍体结构;镜下可见完整的高尔基复合体,数量较多的粗面内质网,部分糖元颗粒分布在胞浆中。第25代脂肪间充质干细胞分裂增殖作用强于第3代脂肪间充质干细胞;多条染色体出现断裂畸变,并且染色体数目出现异常,呈亚二倍体或超二倍体核型;核仁增大,异染色质及线粒体数量增多,内质网数量少,细胞较为幼稚。第3,25,30代脂肪间充质干细胞恶性肿瘤特异性生长因子的表达吸光度值无明显差异(P>0.05)。结论:分离获得的人脂肪间充质干细胞长期体外培养具有遗传不稳定性,有向肿瘤细胞突变的倾向。
- 张卫泽李国庆陈永清马凌韩娟萍
- 关键词：脂肪间充质干细胞核型肿瘤细胞
- 5-氮胞苷对脂肪间充质干细胞向心肌样细胞诱导分化的影响被引量：6
- 2009年
- 目的:观察5-氮胞苷(5-aza)对脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌样细胞诱导分化的影响。方法:对第3代细胞以10μmol/L 5-aza诱导作用24 h后,用含体积分数5%胎牛血清的完全培养基继续培养,镜下观察细胞形态学变化。RT-PCR检测NKX2.5、GATA4及cTnI基因mRNA表达,免疫组化法检测cTnI蛋白表达。结果:5-aza作用7 d后ADMSCs形态及排列开始发生变化,RT-PCR产物条带见NKX2.5、GATA4基因的表达。4周后见极个别细胞出现细微搏动,免疫细胞化学显示cTnI阳性,RT-PCR产物条带见cTnI基因表达。结论:5-aza可以诱导ADMSCs向自发搏动的心肌样细胞分化。
- 李国庆张卫泽马凌陈永清秦勉韩娟萍张耀辉
- 关键词：干细胞5-氮胞苷分化心肌样细胞
- 成人脂肪间充质干细胞遗传稳定性及5-氮胞苷对成人脂肪间充质干细胞毒理遗传学影响的实验研究
- 目的:1、探索脂肪间充质干细胞/(ADMSCs/)的分离、体外培养,观察ADMSCs长期传代培养的遗传稳定性。2、以5-氮胞苷/(5-aza/)作为诱导剂,观察5-aza对ADMSCs向心肌样细胞诱导分化的作用。3、观察...
- 李国庆
- 关键词：脂肪间充质干细胞核型5-氮胞苷心肌样细胞细胞遗传
- 文献传递
- 培养基血清浓度对5-氮胞苷诱导脂肪间充质干细胞向心肌样细胞诱导分化的影响
- 2009年
- 目的观察脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌样细胞诱导分化的适宜培养基血清浓度。方法采用Ⅰ型胶原酶消化法自成人脂肪组织分离ADMSCs进行培养。对第3代细胞以10μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)诱导作用24h,用含10%、5%胎牛血清的完全培养基继续培养,镜下观察细胞形态学变化,采用免疫细胞化学染色鉴定心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI),计算心肌细胞转化率,采用RT-PCR方法检测NKX2.5、GATA4及cTnI基因表达。结果5-aza诱导ADMSCs后7 d细胞形态及排列开始发生变化,4周后可见极个别细胞出现细微搏动,10%、5%胎牛血清培养下心肌样细胞转化率分别为31.5%±4.2%、32.8%±5.0%,P=0.72;RT-PCR产物条带见NKX2.5、GATA4及cTnI基因表达。结论ADMSCs在5-aza诱导后于低浓度血清培养基中培养效果更好。
- 李国庆张卫泽马凌陈永清秦勉韩娟萍张耀辉
- 关键词：干细胞5-氮胞苷心肌样细胞血清浓度
- 成人脂肪间充质干细胞冻存的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的探寻成人脂肪间充质干细胞冻存和复苏的条件,观察冻存前后脂肪间充质干细胞的形态学特征以及向心肌细胞诱导分化的潜能。方法自成人脂肪组织分离培养脂肪间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面分子。将脂肪间充质干细胞于液氮中低温冻存,经3个月后复苏,倒置相差显微镜及透射电子显微镜下观察细胞形态。5-氮杂胞苷进行诱导,免疫荧光技术检测心肌特异性肌钙蛋白-Ⅰ。比较冻存前后脂肪间充质干细胞的形态学特征及诱导转化率。结果脂肪间充质干细胞较幼稚,冻存前后光镜下的形态及电镜下的超微结构无明显差别,脂肪间充质干细胞呈CD29阳性表达,HLA-DR阴性表达。冻存前后脂肪间充质干细胞经5-氮杂胞苷诱导后第28天均可表达心肌特异性肌钙蛋白-Ⅰ,诱导转化率无差异。结论脂肪间充质干细胞可耐受低温冻存,复苏后细胞的形态学特征以及诱导分化潜能无明显变化。
- 张卫泽樊艳陈永清马凌秦勉哈小琴李国庆
- 关键词：干细胞脂肪组织冻存形态学分化潜能
