杨威
- 作品数:4 被引量:5H指数:1
- 供职机构:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:农业科学生物学更多>>
- 马传染性贫血驴强毒gp90基因的克隆和序列分析被引量:3
- 2003年
- 以EIAV驴强毒株D_AmRNA为模板 ,利用RT_PCR技术 ,扩增了约 1 .4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序 ,测序结果表明所扩增的 1 3 3 8个核苷酸片段含有完整的gp90基因全序列。核苷酸和氨基酸序列比较分析结果表明 :D_AEIAV与国内分离株辽系强毒L株差异率仅有 1 .8% ,而与国外毒株 (克隆 1 3 69,WENV1 7、WENV1 6、PSPEIAV1 9)核苷酸差异率在 3 5 .5 %~ 3 7.2 %之间 ;D_A株与国内分离株L株氨基酸水平差异率在 2 .9% ,而与国外毒株氨基酸水平上的差异率在 42 .6%~ 46.0 % ;D_AEIAV有 1 9个N_连接糖基化位点 ,L株、WENV1 7和WENV1 6是 1 8个 ,克隆 1 3 69、WENV1 6和WENV1 7亲本毒株PSPEIAV1 9是 1 2个。
- 刘永刚张宝山孔宪刚杨威刘胜旺贾永清
- 关键词:马传染性贫血GP90基因克隆
- 马传贫病毒白细胞弱毒疫苗毒株反转录酶基因克隆及序列分析比较被引量:1
- 2000年
- 本实验从商品化马传贫弱毒疫苗培养物提纯马传贫疫苗毒病毒粒子并抽提病毒RNA后 ,采用RT_PCR方法扩增并首次克隆了马传贫驴强毒反转录酶 (RTase)基因。经核苷酸序列测定得出反转录酶基因全长 1 6 6 8bp ,编码 5 5 6个氨基酸。通过与已发表其它马传贫病毒反转录酶基因序列比较 ,发现在氨基酸和核苷酸水平差异率分别为 1 4 .0 %和 1 6 .6 %。变异氨基酸随机分布于整个基因上 ,无明显规律。在反转录病毒高度保守的酶基因上发现这样大的差异 ,展示出马传贫驴强毒作为马传贫弱毒疫苗亲本毒株的独特分子特性。
- 张宝山刘永刚卢景良孔宪刚刘胜旺杨威马云燕
- 关键词:克隆EIAV
- 马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株及其亲本驴强毒株长末端重复序列(LTR)的启动子活性比较
- 2002年
- 将马传染性贫血病毒驴强毒(donkey adaptedequineinfectiousanemiavirus,D AEIAV)、马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒(donkeyleukocyteattenuatedEIAV,DLAEIAV)及EIAVWyoming株的全长长末端重复序列(LTR)分别克隆到报告基因载体pCAT Basicvector中,获得重组质粒p D A LTR CAT、p DLA LTR CAT及p Wyo LTR CAT。将这3个重组质粒分别体外转染EIAV阴性健康驴的白细胞,比较这三者LTR启动报告基因CAT表达的基础活性和在tat pcDNA3共转染条件下激活活性的差异。结果表明:在驴白细胞中,DLAEIAVLTR启动CAT表达的活性略高于D AEIAVLTR;而与EIAVWyoming株LTR比较,DLAEIAV与D AEIAV二者LTR启动CAT表达的活性都较低。在有共转染重组表达质粒tat pcDNA3条件下,D AEIAV、DLAEIAV及EIAVWyoming株LTR起始CAT表达的活性都得到提高,分别提高了4 8倍、6 0倍和3 2倍。上述结果提示,LTR可能是体现DLAEIAV驴白细胞适应性的因素,不一定是影响其毒力减弱的根本原因。
- 周家喜孔宪刚张宝山刘胜旺刘丽玲孙成群刘相东刘永刚杨威
- 关键词:马传染性贫血病毒长末端重复序列
- 拼接信号序列单碱基变异提高马传染性贫血病毒mRNA拼接效率被引量:1
- 2003年
- 分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D-AEIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLAEIAV)RNA为模板,利用RT-PCR的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子-2及其下游的核苷酸序列。然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2env阅读框架中,构成CAT拼接报告系统。同时在强毒株重组表达质粒的基础上,将其外显子-3上游拼接受体位点的核苷酸序列CAG突变为弱毒株相应位置的核苷酸序列TAG,得到强毒单核苷酸突变株重组表达质粒。用构建的3个重组表达质粒DNA转染驴血白细胞,ELISA检测转染细胞CAT浓度。结果表明:EIAV强毒株重组表达质粒中CAT蛋白表达量最高,EIAV强毒株重组表达质粒次之,EIAV强毒突变株重组表达质粒最低。由于CAT基因被插入于各重组质粒中的EIAV内含子-2里,EIAV外显子-2、3之间的拼接可导致该基因的删除,因而其拼接效率低于EIAVmRNA外显子-2、3之间的拼接效率。实验数据表明,EIAVSA2拼接信号序列单碱基变异提高了SD2-SA2拼接效率;D-AEIAVSA2-SD2拼接效率比DLAEIAV相应位点拼接效率高。
- 刘相冬张宝山王滨有杨威孙成群周家喜王凯波孔宪刚
- 关键词:马传染性贫血病毒REV