杨永胜
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
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- 猪α1干扰素基因克隆与原核表达
- 病毒性传染病是困扰我国养猪业发展中最突出的问题,每年由于病毒感染引起的猪死亡和生产效率低下造成了巨大的经济损失。干扰素(interferon,IFN)是由机体细胞产生的一类高活性多功能糖蛋白,具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性及...
- 杨永胜
- 关键词：克隆原核表达
- 文献传递
- 猪α1干扰素基因的克隆与原核表达被引量：6
- 2010年
- 根据猪α1干扰素(pocine interferon-alpha1,poIFN-α1)的全基因序列(EU364896)设计合成1对特异引物,通过RT-PCR从三元杂交仔猪外周血淋巴细胞扩增出poIFN-α1全基因,将该基因克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-T-poIFN-α1,进行测序。以pGEM-T-poIFN-α1为模板,经PCR扩增带有酶切位点的poIFN-α1基因,将其定向克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-6P-poIFNα1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白诱导表达和鉴定,并确定蛋白最佳表达条件。序列分析表明,克隆的poIFN-α1基因全长546bp,编码181个氨基酸,前23个氨基酸组成信号肽,无糖基化位点。SDS-PAGE和Western blotting证实重组表达菌经IPTG诱导后,可表达相对分子质量约46ku的融合蛋白(GST-poIFN-α1)。当以1.0mmol/L的IPTG于37℃下诱导表达9h时,蛋白表达量最高。poIFN-α1基因的克隆与表达为进一步研究其抗病毒活性,开发病毒治疗和疫苗免疫增强用生物制剂奠定了基础。
- 杨永胜陈春花宋勤叶左玉柱
- 关键词：干扰素克隆原核表达
