汤慕瑾 作品数:12 被引量:78 H指数:6 供职机构: 中山大学 更多>> 发文基金: 广东省自然科学基金 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 化学工程 更多>>
利用转座子Tn917构建杀虫Bt工程菌 被引量:15 1999年 利用链球菌(Streptococusfaecalis)的转座子Tn917衍生载体pTV1Ts将苏云金杆菌(Bacilusthuringiensis,Bt)的2个杀虫晶体蛋白(ICPs)基因整合进Bt染色体上,转座频率达59×10-5.将对双翅目昆虫有毒效的ICPs基因cry11A和广谱溶细胞且对蚊子等有毒效的cyt1A基因分别克隆到pTV1Ts上,用高压电激法转入对鳞翅目昆虫有毒效的库斯塔克亚种(Btsubspkurstaki)HD1菌株,分别筛选到在染色体基因组上整合进这2个基因的突变株HT26和HT45,整合基因均能在这2株工程菌中获得表达并形成正常的伴孢晶体.生物测定结果显示,表达的Cry11A和Cyt1A晶体蛋白有很高的杀虫活性,对库蚊三龄幼虫的LC50分别为83ng/mL和64ng/mL,同时Cyt1A晶体蛋白对培养的昆虫细胞有较强的溶解作用. 余健秀 庞义 李建华 余榕捷 汤慕瑾关键词:苏云金杆菌 杀虫剂 苏云金杆菌毒力的生物测定 被引量:10 2000年 本文对苏云金杆菌(Bt)制剂的生物测定标准化及目前采用的生物测定方法作一较详细的介绍。其中对鳞翅目幼虫的生物测定包括混合饲食法、浸叶饲喂法、蜡洞法、液滴法;对双翅目幼虫的生物测定则有世界卫生组织提出的方法和美国国内标准方法;对路翅目幼虫目前还没有一个统一的标准方法。生化和免疫测定法比传统的生物测定方法快速、简便,但亦存在不足。 汤慕瑾 余健秀 刘静宇 庞义关键词:生物测定方法 鳞翅目幼虫 饲喂法 苏云金杆菌(BT) 毒力 免疫测定法 全文增补中 EFFECTS OF HELPER PROTEINS ENCODED BY p19 AND orf1-orf2 GENES ON Cyt1Aa PROTEIN EXPRESSION IN ACRYSTALLIFEROUSSTRAIN OF BACILLUS THURINGIENSIS 2003年 A series of plasmids were constructed to examine the effects of p19 and orf1-orf2 genes from Bacillus thuringiensis on Cyt1Aa synthesis and inclusion formation. The plasmids expressed the cyt1Aa gene along with either p19 or orf1-orf2, or each of them coordinatively with p20 in the acrystalliferous strain of B. thuringiensis subsp. israelensis 4Q7. No effect on the expression of Cyt1Aa protein was found when P19 or Orf1-Orf2 co-expressed with Cyt1Aa. However, when including p20 gene, the constructs with p19 or orf1-orf2 gene produced lower yield of Cyt1Aa proteins than without p19 or orf1-orf2 gene. Electron microscopy observation and bioassay showed that P19 and Orf1-Orf2 have no influence on the crystal size and toxicity of Cyt1Aa protein. It is presumed that P19 and Orf1-Orf2 might have negative effects on Cyt1Aa synthesis in B. thuringiensis. 汤慕瑾 曾少灵 陈建武 师永霞 徐炜 袁美妗 庞义关键词:P19 苏云金杆菌小试生产发酵影响因子的研究 被引量:12 2002年 利用 1 0L全自动发酵罐对苏云金杆菌小试生产的发酵条件进行了研究。结果显示 ,不同的温度、pH值、培养基成分及接种方式对发酵产量和发酵周期均有影响 ;在培养基配方中存在葡萄糖时 ,葡萄糖单独灭菌对提高苏云金杆菌发酵产量是重要的。初步生物测定显示 ,发酵上清中存在一些杀虫增效因子 ,建议配制苏云金杆菌制剂时尽可能加以利用。 余健秀 汤慕瑾 徐建敏 庞义关键词:苏云金杆菌 发酵 微生物杀虫剂 PH值 接种方式 培养基 苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响 被引量:5 2003年 苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C 半端缺少了一段含 4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定 ,报道苏云金杆菌辅助蛋白P2 0帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT310 1构建 3个表达质粒 ,即pT1B、pP1B和pDP1B ,3个质粒都含有cry1Ab基因 ,不同在于pT1B没有p2 0基因 ,pP1B含有p2 0全基因 ,而pDP1B不仅含有p2 0全基因 ,且在p2 0基因前插入cry1A(c)启动子。分别将这 3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中 ,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Westernblot表明cry1Ab基因在这 3株菌中均表达了 130kD的蛋白 ,部分降解为大约 6 0kD的蛋白。蛋白定量分析显示 ,3株菌 130kD蛋白量的比为 1∶1.4∶1 5 ,降解后的 6 0kD蛋白量的比为 1∶1.1∶1.6 ,Cry1Ab蛋白总量的比为 1∶1∶2∶1 6。镜检发现 ,Cry1Ab在 3株菌中都形成典型的菱形晶体 ,其晶体大小为T1B 汤慕瑾 袁美妗 陈建武 师永霞 曾少灵 余健秀 庞义关键词:苏云金杆菌 辅助蛋白 杀虫晶体蛋白 CRYLAB 生物杀虫剂 苏云金芽孢杆菌cyt1 Aa基因在拟步甲亚种菌株中的表达及重组菌株杀虫活性研究 被引量:1 2007年 将含苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,简称Bti)cyt1Aa基因的质粒电激转化至对鞘翅目害虫有专一活性的Bt拟步甲亚种(Bacillus thuringiensis subsp.tenebrionis,简称Btt)菌株中进行表达,获得重组菌株Btt-WF45。对表达产物进行SDS-PAGE分析,显示Cyt1Aa蛋白获得了大量表达。生物测定结果表明,Btt-WF45对鞘翅目小圆叶甲(Plagiodera Redtenbacher)幼虫没有毒力,对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)的毒力比对照菌株4Q7-WF45高0.33倍,对白纹伊蚊(Aedes albopictus)的毒力比4Q7-WF45高0.63倍。由于在重组菌株Btt-WF45中Cry3A蛋白的表达量太低,所以在该结果中未能显示Cyt1Aa蛋白与Cry3A蛋白是否存在协同增效作用。 袁美妗 汤慕瑾 师永霞 王莉 庞义关键词:苏云金杆菌 AA 杀虫活性 利用突变技术研究苏云金杆菌杀虫晶体蛋白的进展 被引量:7 2001年 本文综述了近年来利用突变技术研究苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白(Insecticidalcrystalproteins ,ICP)杀虫作用机制所取得的进展。其中结构域Ⅰ参与不可逆结合及影响离子通道的形成 ;结构域Ⅱ参与与受体的结合 ,包括可逆结合和不可逆结合 ;结构域Ⅲ保持三维结构稳定 ,同时可能参与结合受体的过程 ,插膜以及离子通道调节。 汤慕瑾 余健秀 李建华 庞义关键词:苏云金杆菌 杀虫晶体蛋白 结构域 点突变 苏云金杆菌Cyt类杀虫晶体蛋白及其特征 被引量:9 2002年 本文综述了国内外有关苏云金杆菌Cyt类杀虫晶体蛋白的分类、杀虫特性、作用机理 ;具有分子伴侣功能的 2 0kDa蛋白对cyt基因在大肠杆菌和苏云金杆菌中的表达的影响 ; 刘静宇 余健秀 汤慕瑾 庞义关键词:苏云金杆菌 抗性 苏云金芽胞杆菌辅助蛋白基因的克隆、表达及其功能研究 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生的杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal proteins,ICPs)在细胞生长的稳定期积聚成伴胞晶体,形成伴胞晶体的量达到细胞干重... 汤慕瑾关键词:苏云金杆菌 辅助蛋白 杀虫晶体蛋白 BT 基因 文献传递 苏云金杆菌vip3 A基因的克隆、表达及杀虫活性分析 被引量:16 2002年 用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)菌株S184中克隆了 2 3kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3A S184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP ,转化大肠杆菌M15 ,转化子经 1mmol LIPTG诱导后可表达 89kD大小的Vip3A S184蛋白 ,并得到Westernblot证实。蛋白可溶性试验表明 ,目的蛋白中约有 19%是可溶的 ,用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此 ,可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体 ,用于苏云金杆菌Vip3A蛋白表达的检测。利用IPTG进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾 (Spodopteraexigua)、斜纹夜蛾 (S .litura)和棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)等 3种害虫的初孵幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,Vip3A 陈建武 唐丽霞 汤慕瑾 师永霞 庞义关键词:苏云金杆菌 基因克隆 抗体