牛静
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院植物保护研究所更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 不吸水链霉菌ZBO1 cyp107z基因的克隆及原核表达纯化被引量：1
- 2011年
- 【目的】克隆不吸水链霉菌ZB01中的cyp107z基因,在E.coli中异源表达纯化,测定重组酶蛋白的酶动力学参数,为该基因的进一步研究奠定基础。【方法】根据cyp基因保守区序列设计引物,扩增不吸水链霉菌ZB01基因组中cyp107z基因的部分序列,通过染色体步移技术获取全长基因。利用pET28a表达载体构建该基因原核表达载体并于E.coli中诱导表达,以Ni-NTA亲和层析纯化表达出的重组蛋白。以阿维菌素为底物,构建重组蛋白体外催化体系,通过测定体系中NADPH的消耗,计算重组蛋白催化阿维菌素反应的酶动力学参数。【结果】从不吸水链霉菌ZB01基因组扩增出一条cyp107z基因同源基因,全长1290 bp,编码429个氨基酸残基,命名为cyp107z13,在E.coli中诱导表达了该重组酶蛋白,纯化后的重组酶蛋白催化阿维菌素的Km值为1.4μmol/L,Vmax为0.041μmol/min.mg,kcat为0.033 s-1。【结论】从不吸水链霉菌ZB01中克隆到cyp107z13基因,异源表达的CYP107Z13重组蛋白能够催化以阿维菌素为底物的氧化反应。
- 刘卫德蒋细良冀颖牛静李梅
- 关键词：基因克隆原核表达阿维菌素
- 哈茨木霉几丁质合酶基因ThChsC的克隆及序列分析被引量：4
- 2011年
- 【目的】克隆哈茨木霉几丁质合酶基因全序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】利用多聚酶链式反应(PCR)和染色体步移技术(genome walking)克隆几丁质合酶基因全序列;应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析;通过同源建模,对蛋白质的三维结构进行预测。【结果】从哈茨木霉(Trichoderma harzianum Th-33)中扩增得到几丁质合酶基因ThChsC(GenBank登录号HQ419000),编码区(CDS)长为2 835 bp,由4个外显子和3个内含子组成,开放阅读框(ORF)长2 688 bp,编码895个氨基酸。序列比对和同源性分析显示,该基因与串珠状赤霉(Gibberella moniliformis,ACY08039.1)和禾生刺盘孢菌(Colletotrichum graminicola,AAL23718.1)几丁质合酶基因相似性最高,分别为80%和81%;相应的氨基酸序列同源性均为80%,系统进化分析表明,ThChsC属于III型几丁质合酶亚家族。几丁质合酶ThChsC含有1个Chitin_synth_1结构域,1个Chitin_synth_1N结构域,1个Chitin_synth_2结构域,3个跨膜结构域,不含信号肽,为膜结合蛋白。对预测的三维结构分析表明,ThChsC含有糖基转移酶的保守DHD结构域。【结论】从哈茨木霉Th-33中克隆得到几丁质合酶基因ThChsC,对该基因的深入研究有助于探索哈茨木霉几丁质合成的机制。
- 冀颖李梅田云龙刘卫德牛静蒋细良
- 关键词：哈茨木霉基因克隆
- 哈茨木霉caf类似基因ThCon1的克隆及功能初探被引量：2
- 2013年
- 采用染色体步移方法从产孢量显著减少的哈茨木霉Trichoderma harzianum T-DNA插入突变株1413中克隆出caf(染色体组装蛋白基因)类似基因。序列分析显示该基因全长3418 bp,共有5个外显子,4个内含子,开放阅读框长为2904 bp(GenBank登录号:JN802132),编码967个氨基酸,有两个保守的功能结构域WAC_Acf1_DNA_bd和DDT domain,该氨基酸序列与血红丛赤壳Nectriahaematococca mpVI 77-13-4的核染色质组装蛋白(chromatin assembly protein)有69%相似性,推测该基因编码的蛋白为一个核染色质组装蛋白,命名为ThCon1。构建了ThCon1基因置换载体pDHt/SKThCon1∷hph,采用ATMT方法转入野生型哈茨木霉TH-33菌株,筛选到1株表型发生明显差异的突变株,PCR证实该突变株中ThCon1基因已被置换为潮霉素抗性基因。对突变株进行表型分析,结果显示:与野生菌株相比,突变株生长速率下降,菌落稀薄,产孢量减少。表明ThCon1基因影响哈茨木霉的生长和产孢。
- 牛静李梅范亮波刘卫德冀颖刘增亮蒋细良陈书华
- 关键词：哈茨木霉基因置换
- 生物催化在农药合成中的应用被引量：4
- 2011年
- 对现有农药进行结构修饰及制备光学纯的手性农药是当前农药研究开发的重要内容,其中常涉及很多高选择性反应步骤,采用传统化学方法往往操作复杂、成本高并可能造成环境污染。生物催化具有反应条件温和、高效、高选择性及低污染等优点,成为化学催化的重要补充。近年来,生物催化在农药合成中的应用日益受到关注。介绍了生物催化在农药分子的选择性结构修饰及手性农药去消旋化等方面的研究及应用情况。
- 刘卫德蒋细良范亮波冀颖牛静李梅
- 关键词：生物催化农药结构修饰
