贾向东
- 作品数:5 被引量:18H指数:2
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- 植物GSTZ基因的表达特性及酶定向进化研究
- 谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(GSTZ)是一种重要的多功能酶,与细胞生化代谢、环境净化等密切相关。
将拟南芥、甘蓝型油菜品系陕2B与垦C1的GSTZ基因插入到载体pYES2和pPIC9的多克隆位点,分别转入酿酒...
- 贾向东
- 关键词:谷胱甘肽S-转移酶定向进化多功能酶遗传学生物学
- 文献传递
- 几种定向进化技术的比较及文库构建策略被引量:15
- 2003年
- 蛋白质定向进化在蛋白质工程中取得了令人瞩目的成就 ,其核心技术———随机突变库构建技术已成为近年来体外定向进化研究的热点。在概述定向进化基本原理基础上 ,对几种随机突变技术进行了介绍、分类和比较 。
- 贾向东陈德富陈喜文郭少影
- 关键词:定向进化碱基错配DNA重组蛋白质
- 植物GSTZ基因在毕赤酵母中的高效分泌表达
- 2008年
- 谷胱甘肽 S-转移酶 Zeta 类(GSTZ)是一种重要的多功能酶,与细胞生化代谢、环境净化等密切相关.将拟南芥、甘蓝型油菜"陕2B"和"垦C1"的 GSTZ 基因重组到表达载体 pPIC9,电转化到毕赤酵母株 GS115中,得到了分泌表达 GSTZ 酶的毕赤酵母工程菌株.甲醇诱导表达显示,最佳诱导时间在48~60 h,DCA-DC 比活力为83.21~115.31 U/mg,GSTZ 分泌量为25.71~42.90 U/mL.研究结果表明,植物 GSTZ 基因在毕赤酵母中的表达是高效的,为大规模发酵生产 GSTZ 奠定了基础.
- 王维兰李梅陈喜文黄晓燕贾向东陈德富
- 关键词:分泌表达毕赤酵母
- 拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类进化酶的获得及其特性分析被引量:1
- 2008年
- 拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(AtGSTZ)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶.应用易错PCR和多轮DNA洗牌技术构建了AtGSTZ随机突变文库,再利用pH指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选,获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子.其中,NN23含25个氨基酸突变,比活力提高120%,NN20含24个氨基酸突变,比活力提高102%,EC1含2个氨基酸突变,比活力提高47%,其他6个为单点突变,比活力分别提高9%~60%.酶学分析显示,所有进化酶对底物二氯乙酸的催化效率和对谷胱甘肽的亲和力以及个别进化酶的复性能力都得到不同程度的提高,但热稳定性均没有明显改善.同时,对一系列与AtGSTZ空间折叠及催化活性相关位点进行了讨论.
- 陶苏丹陈喜文刘佳贾向东陈德富
- 关键词:热稳定性
- 谷胱甘肽S-转移酶Zeta类基因在酿酒酵母中的表达被引量:2
- 2006年
- 谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(GSTZ)是一种重要的多功能酶,与细胞生化代谢、环境净化等密切相关。将拟南芥、甘蓝型油菜品系陕2B与垦C1的GSTZ基因克隆到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYES2的多克隆位点,筛选到重组子后,提取重组质粒并将其转入酿酒酵母营养缺陷型菌株INVSc1细胞中,经SC-U培养基选择得到重组酵母Y2At、Y2BnB和Y2BnC。重组酵母在含棉子糖和半乳糖的诱导培养基中,表达出了具有二氯乙酸脱氯活力的谷胱甘肽S-转移酶Zeta类,且主要以可溶状态存在于酵母细胞中。不同碳源比较发现,使用半乳糖为唯一碳源时,与棉子糖和半乳糖共同使用相比,酵母生长虽受到轻微影响,但表达的GSTZ比活力几乎不受任何影响。0~96h诱导时间的优化实验表明,36h诱导下呈现最高比活力。同时也对不同GSTZ的Km值进行了比较。
- 贾向东陈喜文陈德富陈洁
- 关键词:酿酒酵母