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猪DNA免疫调节分子新技术研究: 高荣王泽洲李江凌吕学斌武梅李瑛孟民杰李惠刘锐曾凯章欢沈翼吴凯源付满良席隆一陶凤杨毅陈茜谢曌赵钟钟王颖玉徐志刚程驰; 1、课题来源与背景：该项目是在国家自然科学基金“白细胞介素2和6的基因改组研究”，四川省重点科技攻关项目“新型动物抗病融合基因的研究和应用”，“多功能新型高效抗动物感染DNA分子制剂的研制”、四川省科技厅“新型抗感染免疫...; 关键词：; 关键词：养猪动物养殖

新型猪白细胞介素2和6基因表达质粒抗感染制剂的应用技术: 本发明改组了白细胞介素－2基因，构建了改组猪白细胞介素2基因真核表达质粒VRIL2S，构建了猪白细胞介素6基因与CpG寡聚核苷酸重组真核质粒VRIL6C，以分子量为150000、脱乙酰度95％以上的壳聚糖制备了壳聚糖纳米...; 高荣武梅王泽州李江凌吕学斌谢曌王颖玉赵钟钟陈茜吴凯源; 文献传递

Nav1.5钠离子通道P环E375残基侧链负电荷决定通道的电导与稳态失活被引量：1: 2011年; 钠离子通道结构域中的P环在通道的门控和离子选择性中起着重要作用。本文采用基因定点突变、电生理、定量PCR和Western bloting等实验技术,将钠离子通道Nav1.5结构域I中P环375位高度保守的负电性谷氨酸残基(E375),分别突变为电中性的丙氨酸(A)、正电性的赖氨酸(K)和负电性的天冬氨酸(D),记录不同钠通道突变体在HEK293细胞中表达后的全细胞电流,并对其动力学性质进行了分析。结果显示,E375A和E375K突变体的全细胞钠电流显著减小,稳态激活曲线和稳态失活曲线发生改变;而E375D突变体的电流和稳态失活曲线则恢复至接近野生型的状态。上述结果表明,E375残基侧链所带负电荷对钠离子通道的电导和稳态失活过程起决定作用。; 胡振盛郭佳陈文庄重赵钟钟张朝; 关键词：钠离子通道基因定点突变

Snapin蛋白与心肌L型钙离子通道Cav1.3的相互作用被引量：1: 2009年; [目的]研究Snapin蛋白与心肌L型钙离子通道Cav1.3的相互作用。[方法]利用免疫共沉淀实验确定Snapin蛋白与Cav1.3在体外表达系统和心房组织存在相互作用。[结果]在过表达Snapin和Cav1.3的HEK293细胞及内源性表达二者的心房肌组织中,Snapin蛋白与Cav1.3钙离子通道存在相互作用。; 袁秀杰钱辉刘金旭张沙沙石洁赵钟钟张朝; 关键词：HEK293细胞心房

抗胚胎小鼠心肌α1D钙离子通道抗体的制备及鉴定被引量：1: 2009年; 目的制备针对胚胎小鼠心肌L型钙通道Cav1.3编码的α1D亚基胞内末端的多克隆抗体。方法通过基因重组从小鼠胚胎心脏中获得2种原核表达质粒pGEX-4T-α1DN/α1DC,在大肠杆菌中经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽S转移酶(GST)融合蛋白,纯化得到α1D基因N端和C端产物GST-α1DN/α1DC,用此抗原经弗式佐剂、弗式不完全佐剂乳化后免疫新西兰家兔,收集的免疫血清经protein G Agarose亲和纯化后获得IgG型抗α1D蛋白的多克隆抗体。对这2种抗体采用Westernblot法进行特异性检测,ELISA法测定进行效价分析。结果成功构建α1D胞内片段的原核表达载体,表达纯化了GST融合蛋白GST-α1DC/α1DN,制备2种IgG型多克隆抗体,经ELISA检验证实二者效价均较高,滴度在1:256000时仍有信号,其中GST-α1DN的效价更高。用Westernblot法检测发现,2种抗体都均在相对分子质量240000处得到单一的蛋白印迹条带,特异性良好,能识别小鼠心肌细胞中α1D蛋白。结论用重组融合蛋白GST-α1D作为抗原制备出了具有高效价、强特异性的α1D抗体,为探讨α1D蛋白在小鼠胚胎心脏发育过程中分布的时空特征及研究胚胎发育过程中的钙离子相关信号调控活动奠定了基础。; 翟溯澜张沙沙赵钟钟钱辉张朝; 关键词：胚胎心脏多克隆抗体小鼠

人Snapin基因片段的原核表达及多克隆抗体的制备: 2010年; 目的制备兔抗人Snapin的多克隆抗体,检测其特异性以及Snapin蛋白在心脏组织中的分布。方法构建pGEX-4T-1-Snapin N/C质粒,通过原核表达和纯化分别获得带有snapin基因N端(1-54Aa)和C端(60-136Aa)表达产物(融合蛋白GST-Snapin N/C),通过多点皮下注射免疫新西兰家兔,多次免疫后获得血清,用Protein G Agrose亲和纯化血清,获得IgG型高效价抗Snapin多克隆抗体。结果经过ELISA检测发现二种抗体效价高,滴度在1:256000时仍有较强信号。用Western blotting以及免疫组织化学检测发现二种抗体的特异性良好,能特异性识别小鼠心脏组织Snapin蛋白,其中尤以抗Snapin C抗体为佳。结论成功制备出高效价、强特异性的抗Snapin N/C抗体,为进一步研究Snapin蛋白在心脏中的作用提供了条件。; 张沙沙陈中赵钟钟孙晓莉袁秀杰张朝; 关键词：多克隆抗体心脏

新型融合抗菌肽基因重组真核质粒的构建及抗菌活性研究: 抗菌肽(antibacterical peptides，ABP)是指存在于生物体内具有抵抗外界微生物侵害，消除体内突变细胞的一类由生物细胞特定基因编码产生的小分子多肽，又称为微生物肽(antimicrobial pept...; 赵钟钟; 关键词：重组质粒基因转染真核表达抗菌活性; 文献传递

改组猪IL-2基因与CpG序列对猪伪狂犬病灭活疫苗免疫应答的影响被引量：5: 2008年; 将改组的猪白细胞介素-2基因(VRIL2S)与重组CpG(VR1C)质粒经离子交联法制备的壳聚糖纳米颗粒(CNP)包裹后(CNP-VRIL2S-VR1C),肌肉注射给已接种猪伪狂犬病灭活疫苗的免疫猪,接种后第7、14、28、42和56d采集静脉血检测猪的免疫应答变化,并测定血清免疫球蛋白和白细胞介素含量。结果显示,接种组猪血清中IL-2、IL-6、IL-4以及特异性抗体和免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量显著高于空质粒疫苗对照组,同时外周血液的淋巴细胞和单核细胞数量也较对照组显著增加(P<0.05)。结果表明,CNP-VRIL2S-VR1C能持久显著提高猪对伪狂犬病灭活疫苗的体液免疫和细胞免疫水平,具有被研制为高效安全的分子免疫增强剂的潜力。; 苏丹李栋程驰章欢杨霄赵钟钟陈茜陈建林章华兵万小平蔡林李江凌高荣

猪白细胞介素4,6融合基因和CpG基序对猪蓝耳病疫苗免疫的强化效应被引量：7: 2008年; 为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、6和8周采取实验猪静脉血,用Sandwich ELISA检测血清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量,同时检测外周血液免疫细胞数量的变化。结果发现实验猪接种CNP-(VRIL-46+VR1C)后1～8周内,其血清中IL-2、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量较对照组均显著增多(P<0.05),淋巴细胞和单核细胞数量也明显升高(P<0.05)。这些表明接种CNP-(VRIL-46+VR1C)的实验猪的特异体液和细胞免疫水平均显著多于对照组,提示PIL-46基因和CpG基序组合能显著增强猪的特异体液和细胞免疫机能,明显提高其免疫防御力,具有研制为高效安全的分子免疫增强剂的应用前景。; 陈建林杨肖章欢李栋程驰赵钟钟陈茜章华兵黄杰陈文龙高荣; 关键词：CPG基序蓝耳病免疫

盐酸昌欣沙星抑制开放状态的HERG钾通道被引量：1: 2010年; 探讨一种新型氟喹诺酮类抗菌剂盐酸昌欣沙星(chinfloxacin hydrochloride,CFX)对HERG(human ether-à-go-go-related gene)钾离子通道动力学的影响。利用全细胞膜片钳技术,在HEK293细胞中记录异源表达的HERG钾电流,观察CFX对通道的抑制作用,分析其对通道激活、失活和去激活等动力学过程的影响。结果表明,CFX作用于HERG钾离子通道的开放状态,以浓度依赖的方式抑制HERG钾电流,半有效抑制浓度(IC50)为(162.1±14.2)μmol.L?1,是其改造前体盐酸莫西沙星的2倍,但CFX不改变通道动力学特性。由于改变细胞外液K+浓度,CFX对HERG钾电流抑制作用增强。; 张香梅朱中华孙晓莉郭佳赵钟钟张朝; 关键词：氟喹诺酮

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赵钟钟

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