陈华新
- 作品数:52 被引量:34H指数:3
- 供职机构:中国科学院海洋研究所更多>>
- 发文基金:国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家海洋公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域:生物学轻工技术与工程医药卫生农业科学更多>>
- 一种别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法
- 本发明属于生物技术中色素蛋白质材料领域,具体涉及一种新型荧光蛋白质的制备方法。具体为1)将别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因或其同源基因和藻胆素生物合成酶基因(Hox1和pcyA)克隆于同一表达载体中,得到脱辅基蛋白和色素合成酶...
- 张伟杰关翔宇秦松陈华新杨雨刘少芳
- 文献传递
- 一种高荧光强度的重组藻胆蛋白串联体的制备方法
- 本发明属于生物技术中荧光蛋白质领域,具体的说是一种高荧光强度的重组藻胆蛋白串联体的制备方法。将链霉亲和素基因与别藻蓝蛋白α亚基基因,通过linker序列连接起来。在此基础上,再通过linker序列实现一个或多个别藻蓝蛋白...
- 陈华新姜鹏武静李富超
- 文献传递
- 链霉亲和素-藻胆蛋白的融合表达及其在液相芯片检测中应用
- 2021年
- [目的]重组表达制备链霉亲和素-藻胆蛋白融合蛋白,并应用于致病性弧菌液相芯片的检测体系中。[方法]在大肠杆菌中构建链霉亲和素-藻胆蛋白融合蛋白的生物合成途径,通过发酵和亲和层析纯化,制备融合蛋白;设计副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌等四种致病性弧菌特异性检测引物和核苷酸探针,以融合蛋白为荧光标志物,建立四种致病性弧菌多重检测体系,对检测性能进行评价。[结果]重组制备出链霉亲和素-藻胆蛋白融合蛋白,其最大吸收峰为550 nm,最大荧光发射峰为561 nm;建立的多重检测体系能够特异性的检测出副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌,检测灵敏度达到100 cfu/mL,变异系数在2.90%~7.46%之间。[结论]重组制备的链霉亲和素-藻胆蛋白融合蛋白可替代天然藻红蛋白,应用于液相芯片检测体系中。
- 陈华新姜鹏姜鹏
- 关键词:致病性弧菌液相芯片藻胆蛋白荧光
- 嗜热蓝藻(Synechococcus elongatus BP-1)别藻蓝蛋白耐热机制的初步研究
- 别藻蓝蛋白是藻胆蛋白中的一种,除了作为光合作用捕光天线吸收和高效传递光能外,它也是细胞内的贮存蛋白。别藻蓝蛋白具有优良的荧光特性,在免疫组化、荧光免疫分析等领域已实现了应用。在大肠杆菌中,通过构建嗜热蓝藻别藻蓝蛋白的生物...
- 陈华新姜鹏周孙林唐东山
- 关键词:热稳定性定点突变
- 文献传递
- 重组别藻蓝蛋白(holo-apcB)的抗氧化活性研究被引量:2
- 2014年
- 本研究利用代谢工程技术原理在重组大肠杆菌表达合成了嗜热聚球藻(Thermosynechococcus elongatus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-apcB),并利用亲和层析的方法对holo-apcB进行了分离纯化。SDS-PAGE电泳胶图显示,holo-apcB分子量与18.4 ku的蛋白条带相近,与理论分子量吻合。光谱学分析结果显示,其最大吸收峰为615 nm,最大荧光发射峰为640 nm,与天然别藻蓝蛋白β亚基具有相同的分子量和光谱学性质。在55℃条件下,holo-apcB的半衰期高达31.9 h。以嗜热聚球藻天然别藻蓝蛋白(APC)及脱辅基别藻蓝蛋白β亚基(apo-apcB)为参照,分析了holo-apcB的抗氧化活性。结果显示,holo-apcB具有最强的抗氧化能力,其清除羟自由基和氢过氧自由基半数抑制浓度(IC50)分别为224.9μg/mL和20.6μg/mL,显著低于apo-apcB和天然APC的IC50,这表明holo-apcB中的藻蓝胆素也参与了抗氧化过程。
- 周孙林陈华新姜鹏李富超唐东山
- 关键词:别藻蓝蛋白抗氧化活性自由基
- 藻胆蛋白在大肠杆菌中的重组表达及其光谱学性质与抗氧化活性研究被引量:1
- 2017年
- 在大肠杆菌中进行了藻胆蛋白的重组表达,对重组藻胆蛋白进行了分离纯化,测定了重组藻胆蛋白的光谱学性质和抗氧化活性。结果表明,以IPTG为诱导物时,当菌液OD_(600)为0.95时,加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG和5.0 mmol/L的5-氨基酮戊酸(ALA),在18℃条件下诱导24 h重组蛋白可获得较好表达效果,表达量达149.5 mg/L;以乳糖为诱导物时,当菌液OD_(600)为1.2时,加入终浓度为1.0 g/L的乳糖和5 mmol/L的ALA,在18℃条件下诱导26 h重组蛋白可获得较好表达效果,表达量达102.9 mg/L。重组藻胆蛋白最大吸收峰位于550 nm,最大荧光发射峰位于562 nm,相对于IPTG诱导表达的重组藻胆蛋白,经乳糖诱导表达重组藻胆蛋白,其550 nm处具有较强的光吸收,562 nm处具有较高荧光强度,同时也具有较高的羟基自由基和超氧阴离子的清除能力。
- 朱晓文陈华新齐宏涛姜鹏李富超李荣贵
- 关键词:藻胆蛋白乳糖IPTG抗氧化活性
- 产重组别藻蓝蛋白类荧光蛋白的重组大肠杆菌发酵条件的优化被引量:4
- 2009年
- 对重组别藻蓝蛋白类荧光蛋白基因工程菌在装有150 mL液体培养基的250 mL摇瓶中的发酵条件进行优化。对起始pH值、接种量、诱导起始时间、诱导温度和时长以及IPTG浓度对重组荧光蛋白表达量进行了分析。结果表明,在装有150 mL液体培养基的250 mL摇瓶中,在起始pH值为7.5,6%接种量,培养温度为37℃,培养时长为3~5 h,诱导温度为22℃,IPTG浓度为0.2 mmol/L,诱导时长为7~8 h的条件下发酵重组别藻蓝蛋白类荧光蛋白,其表达量最高。
- 张伟杰杨雨关翔宇葛宝胜陈华新李富超秦松
- 关键词:发酵
- 一种稳定表达功能基因的亚心型扁藻的应用
- 本发明涉及生物基因工程技术领域,具体的说是一种稳定表达功能基因的亚心型扁藻的应用,即构建稳定表达瑞替普酶(rPA)的亚心型扁藻用于生产溶栓药瑞替普酶。采用本发明的稳定表达系统,可实现外源基因在亚心型扁藻中的稳定表达,对其...
- 崔玉琳姜鹏陈华新李富超陈英杰秦松
- 文献传递
- 一种以浒苔为原料生产沼气的方法
- 本发明涉及能源领域,具体说是一种以浒苔为原料生产沼气的方法。包括以下步骤:(1)用水对浒苔进行漂洗;(2)对步骤(1)所得的浒苔进行粉碎处理至粒径为0.5~2mm;(3)将步骤(2)所得的浒苔投入到发酵装置中,加入接种物...
- 冯大伟秦松李富超姜鹏陈华新杨庆利
- 文献传递
- 基因工程大肠杆菌生产重组别藻蓝蛋白(holo-SA-apcA)发酵条件优化被引量:2
- 2016年
- 利用Design-Expert 8.0软件,对大肠杆菌产重组别藻蓝蛋白(holo-SA-apc A)的发酵条件进行优化。首先运用Plackett-Burman两水平设计,对影响重组蛋白表达量的8个因素进行评价,选择有显著影响的3个因素,即p H值、诱导温度、接种量。在此基础上,再用最陡爬坡实验快速逼近以上3个因素的最大响应区域,最后经过Box-Behnken设计和响应面分析,通过求解回归方程得到最优条件为:p H 8.0、诱导温度18℃、接种量4%。在此条件下重复发酵实验3次,重组蛋白表达量达52.3 mg/L,与预测值基本一致。
- 杨玉莹陈华新徐云峰姜鹏赵瑾陈亮
- 关键词:别藻蓝蛋白大肠杆菌PLACKETT-BURMAN设计