韩锋
- 作品数：6 被引量：9H指数：3
- 供职机构：沈阳药科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生经济管理化学工程更多>>
- ist基因的DNA改组以及AHBA合酶基因的系统发生分析
- 必特螺旋霉素(4'酰化螺旋霉素)是含4'-异戊酰基转移酶基因(4'-isovaleryltransferase gene,ist)的螺旋霉素产生菌的产物,即以4'-OH螺旋霉素为底物在异戊酰基转移酶催化下,在4'位加入异...
- 韩锋
- 关键词：必特螺旋霉素DNA改组系统进化分析
- 文献传递
- Streptomyces sp. 4353中3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)合酶基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的克隆Streptomyces sp.4353中的3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)合酶基因,并将其在大肠埃希菌中表达。方法参与AHBA生物合成的5个基因,即氨基奎尼酸脱水酶基因、氨基奎尼酸/莽草酸脱氢酶基因、AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因通常连锁,形成一个AHBA生物合成基因簇。本文通过分析、比较已知AHBA生物合成基因簇的基因组织结构特点和序列保守性,设计引物,以Streptomyces sp.4353的总DNA为模板,在已知737bp AHBA合酶基因部分序列的基础上,通过PCR扩增其上、下游DNA序列,克隆至pMDl8-T载体上,测序、拼接并进行生物信息学分析。以pET24a(+)为表达载体,对克隆得到的AHBA合酶基因在大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL中进行表达和SDS-PAGE检测。结果从Streptomyces sp.4353中得到了一段2872bp大小的DNA片段(NCBI GenBank接受号EU734184),其中含有AHBA生物合成基因簇中的AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因(部分);AHBA合酶基因在大肠埃希菌中得到了成功表达,在SDS-PAGE上可见到清晰的、与预计大小(42.7ku)一致的蛋白表达特异条带。结论Streptomyces sp.4353中的AHBA合酶基因的克隆以及在大肠埃希菌中的表达为进一步研究该基因的功能奠定了基础。本研究克隆得到的2872bp DNA片段还有可能用于AHBA的杂合/异源生物合成,以及安莎类抗生素的组合生物合成。
- 武临专刘爱明马春燕韩锋张会图高群杰王以光
- 关键词：基因克隆与表达
- AHBA合酶基因的筛选与放线菌素D产生菌的发现被引量：3
- 2009年
- 根据3,5-AHBA合酶基因序列的保守性所设计的简并引物,通过PCR的方法,从20株未知产物放线菌菌株中,获得两个AHBA合酶基因阳性菌株(S.violaceusniger 4353和Streptomyces rochei 4088)。同源性分析显示,克隆到的3,5-AHBA合酶与已知的3,5-AHBA合酶蛋白序列有一定的同源性(86%～87%)。对其中一株阳性菌株4353(S.violaceusniger 4353)的发酵活性产物进行了化学分离纯化和TLC、HPLC-UV、MS、~1H-NMR和^(13)C-NMR等分析结构鉴定,表明其发酵产生的一个活性成分为放线菌素D。基因单交换阻断实验结果证明,4353菌株所产生的放线菌素D确实与3,5-AHBA合酶基因相关。本文对获得这一结果的可能原因进行了讨论。
- 张会图刘爱明武临专孙桂芝韩锋高群杰张玉琴王以光
- 关键词：基因阻断放线菌素D
- 我国药品政府定价对制药企业的影响及建议
- 近年来，由于我国对药品价格的管制政策越来越多，这些政策对我国制药企业的影响也越来越深入。当今，药品价格问题不仅是消费者关心的话题，更是影响制药企业发展的重要因素。
本文是对我国药品政府定价对制药企业影响的研究。...
- 韩锋
- 关键词：药品管理政府定价
- 文献传递
- 具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的分子筛选(英文)被引量：3
- 2008年
- 目的建立一种高通量筛选具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的分子筛选方法。原理3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)是安莎类抗生素生物合成的前体。在通过氨基莽草酸途径生物合成AHBA的过程中,AHBA合酶是催化5-氨基-3-脱氢-5-脱氧莽草酸形成AHBA的一个特异性关键酶。AHBA合酶基因的存在可以作为放线菌菌株具有合成安莎类抗生素能力的一个必要而非充分的条件。AHBA合酶基因高度保守,通过PCR方法可以建立一种针对AHBA合酶基因存在与否的、具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌菌株高通量筛选方法。方法根据已知AHBA合酶序列的相似性,设计了针对AHBA合酶基因中高度保守的一段755bp片段大小的PCR筛选寡核苷酸引物,用于从土壤中分离的未知放线菌高通量筛选。结论从1900株土壤分离的未知放线菌中筛选获得33株AHBA合酶基因阳性菌株,即具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌菌株。
- 武临专张会图韩锋高群杰孙桂芝王以光
- 关键词：聚合酶链反应放线菌
- 利用3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)合酶基因保守序列发现潜在的生物合成基因簇
- 本研究应用3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)基因保守序列在克隆苯醌类安莎霉素-格尔德霉素(geldanamycin)生物合成基因时，从该产生菌(Streptormyces hygroscopicus 17997)中，发...
- 王以光高群杰韩锋杜煜尚广东
- 关键词：基因保守序列生物合成基因簇
- 文献传递
