马精彩
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 供职机构：天津医科大学代谢病医院内分泌研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多拷贝水蛭素基因在毕赤酵母中的分泌型表达
- 天然水蛭素是从医用水蛭的唾液腺分泌的一种小分子活性多肽,是目前己知的自然界中最强的抗凝血因子,可有效防治血栓性疾病。由于天然水蛭素原料有限,产量低,成本高,限制了其临床应用,从而采用基因工程技术开发重组水蛭素,可克服以上...
- 马精彩
- 关键词：毕赤酵母水蛭素多拷贝
- 文献传递
- 多拷贝水蛭素基因在毕赤酵母中的分泌型表达被引量：6
- 2010年
- 目的:通过多拷贝克隆技术实现水蛭素(Hirudin)基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达。方法:利用基因重组技术,从pPIC9-Hirudin中扩增α-facor-Hirudin插入到载体pAO815中,并构建pAO815-(α-Hirudin)n多拷贝重组质粒,转化毕赤酵母GS115后进行诱导表达,并鉴定表达产物活性。结果:PCR证实成功构建了水蛭素多拷贝毕赤酵母表达载体pAO815-(α-Hirudin)n,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实能成功高效分泌重组水蛭素,活性测定表明表达的水蛭素有良好的抗凝血活性。结论:成功构建了分泌型水蛭素多拷贝质粒,筛选出多拷贝稳定整合表达菌株,成功表达出具有抗凝血活性的1600ATU/mL重组水蛭素,为大规模表达纯化水蛭素蛋白及其临床应用奠定了基础。
- 马精彩曹晓娜熊蔚俐李敬华左爱军孙蓓梁东春
- 关键词：毕赤酵母水蛭素质粒凝血酶
- 甲状腺激素受体β1的克隆和表达
- 马精彩蔡泽园胡丽玲孙蓓梁东春郭刚张镜宇
- 重组人促甲状腺激素α亚基在大肠杆菌中的表达
- 2010年
- 目的:构建pGEX-3X/hTSHα大肠杆菌表达系统,制备重组人促甲状腺激素α(TSHα)亚基。方法:Trizol法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,将1μg总RNA逆转录合成cDNA并以之为模板进行PCR扩增hTSHα亚基的完全编码序列。EcoRI和BamHI双酶切将所扩增的hTSHα基因定向克隆入表达载体pGEX-3X,转化感受态大肠杆菌Mach1-T1,IPTG诱导表达融合蛋白GST-rhTSHα。离心收集菌体,超声碎菌后获得包涵体。以梯度浓度降低的尿素溶液洗涤,8mol/L尿素溶液溶解包涵体。包涵体溶解液经透析后复性进行SDS-PAGE鉴定及竞争性ELISA抗原性分析。结果:DNA序列分析证实重组pGEX-3X/hTSHα质粒含有读码框正确的hTSHα基因。PAGE显示重组质粒可表达产生36ku大小的特异蛋白条带。ELISA结果表明,所表达的融合蛋白具有与抗人TSHα抗体相结合的能力。结论:成功构建了重组pGEX-3X/hTSHα表达载体,其产物具有hTSHα抗原性。
- 熊蔚俐孙蓓曹晓娜马精彩张镜宇郭刚
- 关键词：基因表达大肠杆菌
