鲁丹丹
- 作品数：20 被引量：48H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生理学生物学化学工程更多>>
- 反义寡核苷酸药物流感泰得对大鼠的亚急性毒性作用
- 目的从毒性病理学角度研究抗流感病毒反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASON)药物流感泰得(Flutide,FT)对Wistar大鼠的亚急性毒性作用。方法 48只Wistar大鼠,雌雄各...
- 郭明刚鲁丹丹郎书慧刘超刘宝峰沈连忠
- 关键词：WISTAR大鼠毒性作用
- 文献传递
- 流感泰得小分子化合物修饰前后细胞摄取的比较被引量：1
- 2010年
- 目的在反义寡核苷酸流感泰得(Flutide,FT)上偶联神经氨酸酶抑制剂奥司他韦,以期通过特定小分子化合物的修饰提高细胞对流感泰得的摄取,进而提高其抗流感的作用。方法采用3′荧光标记控孔玻璃珠(3′FAMCPG)合成全硫代修饰的流感泰得,并对其5′端进行巯基修饰,与结构改造后的奥司他韦分子进行连接得到流感泰得与奥司他韦偶联物(FTO);修饰前后的反义药物直接转染流感病毒感染的人肺癌上皮A549细胞,通过荧光显微镜观察及流式细胞技术检测FTO与FT的胞内荧光强度来进行反义药物偶联小分子化合物前后胞内摄取量的比较;采用CCK8细胞增殖检测技术进行FT与FTO体外抗流感病毒活性评价。结果得到一种新的寡核苷酸偶联物FTO;荧光显微镜观察结果显示,细胞给予FTO后荧光强度强于FT;流式细胞检测结果表明,修饰后的FTO胞内平均荧光值明显高于修饰前的FT,其中给药12h时,病毒感染细胞+FTO(BFTO)组的平均荧光值比病毒感染细胞+FT(BFT)组增加了(102.3±56.0)%,正常细胞+FTO(ZFTO)组的平均荧光值比正常细胞+FT(ZFT)组增加了(89.4±44.7)%;给药24h后BFTO组的平均荧光值比BFT组增加了(115.2±28.4)%,ZFTO组的平均荧光值比ZFT组增加了(102.9±12.1)%,(P<0.05);体外抗流感病毒活性评价显示,FTO与FT的IC50值分别为(1.57±0.08)μmol/L与(4.44±0.11)μmol/L。结论流感泰得采用奥司他韦修饰后有助于提高其在细胞内的摄取量以及抗流感病毒活性。
- 杨兰兰鲁丹丹张玉林吴小桃李树赵海豹王升启
- 关键词：反义寡核苷酸奥司他韦细胞摄取正黏病毒科抗流感病毒活性
- H1N1型流感病毒血凝素抑制肽的筛选研究被引量：7
- 2013年
- 目的以流感病毒血凝素(HA)为作用靶点,筛选新型抗流感多肽药物。方法通过噬菌体展示技术,从随机十二肽库中筛选HA结合肽,并对筛选获得的多肽进行细胞及鸡胚水平的抗H1N1活性验证。结果筛选获得了9条HA结合肽,其中H6具有显著的抗病毒活性,其抑制A/FM1/1/47(H1N1)、A/PR/8/34(H1N1)两株流感病毒致细胞病变的IC50值分别为37.3和48.5μmol/L,抑制两株病毒在鸡胚内复制的IC50值分别为26.7和33.4μmol/L。结论 H6有显著的抗H1N1活性,具有开发成新型抗流感病毒药物的潜力。
- 汪崇文丁晓然杨静邓新秀高婵冯指泉鲁丹丹王升启
- 关键词：流感病毒噬菌体展示
- 离子对反相液相色谱法分析硫代寡核苷酸药物流感泰得的有关物质被引量：5
- 2011年
- 建立了离子对反相液相色谱(IP-RPLC)分析流感泰得(Flutide)有关物质的方法,并将其与其它两种常用方法(离子交换色谱(IEC)和毛细管凝胶电泳(CGE)法)的分析结果进行比较。合成了Flutide及其单核苷酸缩短序列5'n-1、3'n-1和单氧代序列5'(P=O)1,将它们作为已知杂质,在IP-RPLC上进行分离条件的优化,使用的分析柱为XTerra MS C18柱(250 mm×4.6 mm,3.5μm);流动相A为142 mmol/L HFIP-36 mmol/L TEA-10%甲醇(V/V),流动相B为甲醇;梯度洗脱;流速为0.5 mL/min;柱温为50℃;检测波长为260 nm。结果表明,在该条件下,Flutide能同时与这几种杂质进行分离,其中与缩短序列5'n-1和3'n-1可实现基线分离,而与5'(P=O)1之间的分离度也能达到0.94。所建立的IP-RPLC方法已成功应用于Flutide粗品和纯品中各类杂质的分析和鉴定。
- 王颖鲁丹丹张玉林高婵李树王升启
- 关键词：硫代反义寡核苷酸
- Sanger测序法确证硫代修饰反义脱氧寡核苷酸的序列被引量：2
- 2004年
- 目的 :建立一种简便、可靠的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸序列确证方法 ,为反义药物的质量控制及新药研究与开发奠定基础。方法 :选择含有待测反义脱氧寡核苷酸序列在内的一段靶基因为模板 ,以待测序的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸作为下游引物 ,同时在其上游设计一条引物 ,进行PCR扩增 ,使待测序的反义序列以修饰形式掺入到PCR扩增产物中 ;以上述掺入反义序列的PCR扩增产物为模板 ,利用Sanger双脱氧链终止测序法对其进行自动序列分析。结果 :该方法可对不同长度硫代修饰的反义序列进行测定 ,并且可有效地检测出合成过程中产生的突变和缺失序列 ,与质谱法相比 ,仪器和试剂更普及 ,方法易于掌握且测序成本低 ,用样量少。结论 :该方法可用于硫代修饰反义脱氧寡核苷酸药物的序列确证。
- 陈苏红鲁丹丹张嵬王升启
- 关键词：反义寡核苷酸
- 4'-C-(2-甲氧乙氧基)修饰的2'β-F-/2'α-F-2'-脱氧尿苷的合成及其修饰的反义核酸性质评价
- 2016年
- 核酸的化学修饰是反义寡核苷酸分子成药的关键技术,本文以相应的2'-氟阿拉伯糖尿苷(2'-F-ara U)及2'-氟尿苷(2'-F-r U)为起点,通过在糖基的4'-位引入2-甲氧乙氧基(MOE),合成了新的单体2'-F-4'-C-MOE-ara U及其差向异构体2'-F-4'-C-MOE-r U,并将它们转化为相应的亚磷酰胺,用于所需DNA序列的合成。它们对于ds DNA和DNA-RNA双螺旋的热稳定性的影响显示,与2'-F-4'-C-MOE-r U及2'-F-ara U修饰的寡核苷酸相比,2'-F-4'-C-MOE-ara U修饰,特别是在5'-嘧啶-嘌呤-3'(5'-pyrimidine-purine-3')步序上形成C-H…F-C假氢键时,可显著增强寡核苷酸对互补RNA的亲和力,并能够保持对互补DNA的亲和力。同时,2'-F-4'-C-MOE-ara U修饰后的寡核苷酸对完全配对的RNA/DNA单链均具有良好的结合特异性;而2'-F-4'-C-MOE-r U仅对互补RNA具有较好的杂交能力。不过,3'-末端2'-F-4'-C-MOE-ara U修饰的寡核苷酸对核酸酶水解的稳定性却低于2'-F-4'-C-MOE-r U修饰。这些结果表明了在2'-F-ANA单元上进一步引入4'-位修饰的可行性,以及2'-F取代单体对于双螺旋结构的稳定性具有显著影响,为进一步的核酸化学修饰和反义核酸药物的开发提供了新的技术支持。
- 马薇王靖鲁丹丹杨静秦炳杰何小羊王升启
- 关键词：氟化学修饰反义核酸
- 离子交换色谱法测定反义寡核苷酸药物CT102的含量被引量：3
- 2013年
- 目的建立反义寡核苷酸药物CT102的离子交换色谱含量测定方法。方法对不完全硫代序列杂质5'(P=O)、3'(P=O)与CT102全长序列的分离情况进行了考察,采用DNA Pac PA-100阴离子交换柱(4 mm×250 mm);流动相A为1mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)二钠/25 mmol/L三羟基氨基甲烷(Tris),5%乙腈(V/V);流动相B为1 mmol/LEDTA二钠/25mmol/L Tris/1.5 mol/L溴化钠,5%乙腈(V/V);洗脱梯度为0～15 min,40%B～100%B;柱温50℃;流速为1 ml/min;检测波长260 nm。结果合成过程中产生的主要杂质不完全硫代序列(P=O)能够实现与CT102全长序列的分离,CT102在75～1200μg/ml范围内呈良好的线性关系,r2=0.9999,仪器精密度良好,日内精密度RSD为0.64%,日间精密度RSD值为1.19%,检测限为5μg/ml,最低定量限为15μg/ml。结论该方法准确可靠,体系稳定,经济简便,不完全硫代杂质与主峰分离良好,可用于CT102原料药的含量测定,也为规模化制备和终产品的质量控制提供可靠保障。
- 冯指泉鲁丹丹高婵邓新秀汪崇文王升启
- 关键词：硫代反义寡核苷酸离子交换色谱
- 5-乙巯基四氮唑质量标准研究
- 2013年
- 目的:对寡核苷酸固相合成所用活性基团保护剂5-乙巯基四氮唑进行质量(纯度)控制。方法:薄层色谱法和反相离子对高效液相色谱法。在硅胶GF254薄层板上,建立二氯甲烷-甲醇-丙酮-三乙胺(6∶1∶1∶0.2)薄层分离体系;在Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱上,以甲醇-乙腈-水(含0.06%硫酸,0.5%硫酸钠和0.02%庚烷磺酸钠)(16∶16∶68)为流动相,建立液相色谱分离体系,检测波长224nm。结果:水分控制在0.5%以下,纯度控制在大于等于98%,才能保证活化和缩合反应完全。结论:所建立的方法准确,限度合理,能保证合成用5-乙巯基四氮唑的纯度。
- 仲婕李保山鲁丹丹朱德领张金钟马金平金艳
- 关键词：纯度
- 反义寡核苷酸药物流感泰得对大鼠的亚急性毒性观察
- 2017年
- 目的:通过研究抗流感病毒反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASON)药物流感泰得(Flutide,FT)对Wistar大鼠的亚急性毒性作用,为FT临床试验研究提供重要的动物实验数据。方法:48只Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为4组,分别为溶媒对照组、FT 10.0,30.0,100.0 mg·kg-1·d-1组,尾静脉注射连续给药14 d,停药后恢复14 d,给药结束和恢复期结束腹腔大静脉取血进行血液学、血清生化检测;剖检各组织脏器进行脏器湿重、病理学、骨髓涂片检查。结果:给药结束,与溶媒对照组比较,FT各剂量组雄性大鼠网织红细胞百分比(%RETIC)、100.0 mg·kg-1·d-1组血小板数量(PLT)降低(P<0.01),血清生化检测发现FT 100.0 mg·kg-1·d-1组雌、雄大鼠尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、肌酸激酶(CK)均升高(P<0.05,P<0.01),且FT 100.0 mg·kg-1·d-1组雄性大鼠血清BUN,CREA水平明显高于雌性大鼠(P<0.01)。另外,FT30.0,100.0 mg·kg-1·d-1组雌雄大鼠肾脏脏器湿重和脏器系数均明显增加(P<0.05,P<0.01),体重下降(P<0.01);恢复期结束,与溶媒对照组比较,FT 100.0 mg·kg-1·d-1组雌性大鼠%RETIC,PLT升高(P<0.05),FT 30.0 mg·kg-1·d-1组雄性大鼠骨髓红系和粒系细胞计数下降(P<0.05),FT 30.0 mg·kg-1·d-1组雌性大鼠肾脏脏器湿重和脏器系数仍明显增加,其余指标除FT 100.0 mg·kg-1·d-1组外均恢复正常。组织病理学检查结果显示,FT各剂量组可致雌、雄大鼠肾脏肾小管不同程度的变性坏死,细胞碎片管型、蛋白管型及嗜碱性小管形成,尤以雄性毒性损伤较重,心脏间质、肝脏门管区、脾脏边缘区见不同程度的组织细胞浸润。结论:FT对Wistar大鼠肾脏、心脏、肝脏和脾脏具有毒性作用,且具有性别差异。
- 郭明刚鲁丹丹刘超沈连忠
- 关键词：WISTAR大鼠
- 抑制核转录因子PPARα的反义寡核苷酸的抗乙型肝炎病毒活性研究被引量：6
- 2011年
- 目的:研究靶向过氧化物酶体增殖活化受体α(PPARα)的寡核苷酸是否具有抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的活性作用。方法:反义寡核苷酸作用于能稳定表达HBV丹氏颗粒的HepG2.2.15细胞,ELISA检测细胞上清中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)的分泌;实时荧光定量PCR考察反义寡核苷酸对HBV DNA复制水平的影响;通过反转录PCR和Western印迹考察反义寡核苷酸作用于细胞后靶基因及靶蛋白的差异表达情况。结果:抑制PPARα表达的反义序列PPARα-2可剂量依赖且特异性地抑制肝癌细胞中HBsAg和HBeAg的表达,且显著降低细胞中PPARαmRNA水平和蛋白水平。结论:通过筛选初步确定了基于PPARα设计的反义寡核苷酸有较好的抗HBV活性,同时也验证确定了PPARα可能成为抗HBV药物的新型作用靶点。
- 吴小桃杨静王学军李丹丹李英鲁丹丹王升启
- 关键词：乙型肝炎病毒反义寡核苷酸
