龙志高
- 作品数：98 被引量：463H指数：11
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术文化科学更多>>
- 直接消化法分离单克隆贴壁细胞被引量：1
- 2002年
- 目的 :建立一种高效的贴壁细胞单克隆分离法。方法 :将细胞悬液稀释成 4个密度梯度后接种于分隔开的血纤维蛋白膜层的皿上生长 ,克隆形成后吸 0 .2 5 %的胰酶消化 ,用移液器头直接挑取。结果 :永生细胞系和正常二倍体细胞在 10·cm- 2 ,5·cm- 2 两种接种密度时可分离到较多的单克隆 ,分离的单克隆永生细胞培养 1个月左右 ,细胞总数可达 10 6 个 ;但分离的正常二倍体细胞需培养 1个半月左右 ,细胞总数才达 10 6 个。结论 :细胞接种于被分隔成不同区域的血纤维蛋白膜层的皿上 ,采用直接消化法可有效获得单细胞克隆 ,接种密度以 10·cm- 2 ,5·cm- 2
- 赵迪诚龙志高郑多戴和平夏昆
- 关键词：贴壁细胞细胞培养
- 细胞遗传学产前诊断技术与规范被引量：5
- 2015年
- 通过对羊水、脐血或绒毛进行细胞培养,对其进行特殊的制片与染色体显带,在光学显微镜下进行染色体数目和结构的分析检测,观察其是否存在数目或结构的异常,是细胞遗传学在产前诊断中的主要技术手段。文章主要介绍细胞遗传学在产前诊断中的应用与规范。
- 龙志高邢恩鸿王玉琢
- 关键词：细胞遗传学产前诊断染色体
- 利用核糖体基因区打靶载体靶向表达改造型人凝血因子Ⅷ被引量：4
- 2005年
- 构建了携带改造型hFⅧ(hFⅧ-BDDAK39)的核糖体基因区靶向表达载体pHrneo-BDDAK39,并将其转入人纤维肉瘤细胞(HT1080),检测其定点整合的能力及hFⅧ-BDDAK39的表达情况.结果显示,pHrneo-BDDAK39能够成功地将hFⅧ-BDDAK39靶入到HT1080细胞的核糖体基因区,定点整合效率达到2.0×10^(-5),并且靶入的hFⅧ-BDDAK39能有效表达,表达量为(32±5)ng·10~6细胞^-1·24h^(-1).这为利用此靶向表达载体进行血友病A的基因治疗提供了重要的实验依据.
- 刘雄昊刘慕君佘华文路薛志刚梁德生蔡芳潘乾龙志高邬玲阡戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：靶向表达核糖体基因改造型打靶载体纤维肉瘤
- 电压门控快钾通道蛋白Kv4.3的抗体制备及检测
- 2005年
- Kv4(voltagegatedK+channel4)是在哺乳动物心脏和脑组织中广泛表达的一类钾离子通道蛋白.它主要介导心肌细胞和神经细胞中的A-型(快速失活型)K+电流,是构成中枢神经系统和心肌细胞中的快速失活外向型电流的基础.Kv4.3是电压门控钾离子通道3种α亚基之一.通道中含有许多具有调节作用的辅助亚基,它们通过与Kv4.3互作实现对通道的调节.本研究根据人类氨基酸序列以MAPs法制备抗Kv4.3抗体.MAP由4条相同的17肽段连接成锥形结构分子.以MAP或MAP与佐剂免疫新西兰白兔,抽提了免疫前血清和免疫后血清,并对抗体的滴度进行评价.MAPs在白兔体内诱导出了效价比为1:1000的抗Kv4.3特异性抗体.
- 邓小云刘宇蔡芳潘乾龙志高夏昆夏家辉张灼华
- 关键词：MAPSWESTERNBLOTTING免疫沉淀
- 未培养羊水荧光原位杂交快速检测60例胎儿常见染色体数目异常被引量：7
- 2008年
- 目的应用细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome，BAC）克隆自行制备荧光探针，对胎儿常见染色体数目异常（13，18，21，X，Y）行快速产前诊断。方法利用中国医学遗传学国家重点实验室BAC库中相应染色体特异位点克隆，自行制备荧光探针。经外周血淋巴细胞染色体杂交验证后，用于胎儿未培养羊水的快速荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）检测，已检测60例羊水标本。结果所有探针特异性均为100％，杂交成功率为97．86％；FISH结果与常规核型分析一致，检出21三体2例，18三体1例。有两例涉及其它染色体的结构异常未能检出。结论自制探针用于未培养羊水快速FISH，使用标本量少、快速、简便，可有效检出上述5种染色体的数目异常，但本法不能检出其他染色体的数目异常和结构异常，其应用仍有一定局限性。
- 王昊李海波王辉林王华夏艳文娟龙志高戴和平梁德生夏家辉邬玲仟
- 关键词：间期荧光原位杂交产前诊断非整倍体
- 人源载体介导的minidystrophin-EGFP融合基因在Cos-7细胞中的表达(英文)被引量：7
- 2005年
- 目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达。方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM 004006)为模板,通过PCR克隆的方法构建minidystrophin基因,融合EGFP基因后连接到人源载体pHrneo,大量提取重组质粒,转染Cos-7细胞,通过逆转录聚合酶链反应、荧光显微镜观察等方法检测该载体在细胞内的表达。结果成功构建pHrnDysG载体,转染Cos-7后,逆转录聚合酶链反应可扩增出735 bp特异条带,荧光显微镜观察可见表达蛋白分布于细胞膜上。结论pHrn载体介导的minidystrophin基因可以在真核细胞表达,并被有效地转运至细胞膜,可望用于杜氏肌营养不良基因治疗的研究。
- 梁羽梁德生薛志刚龙志高邬玲仟潘乾胡艺俏戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：融合基因COS-7细胞基因表达杜氏肌营养不良
- 人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆被引量：2
- 2000年
- 将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．
- 夏家辉张华莉唐冬生汤熙翔戴和平潘乾龙志高廖晓东
- 关键词：克隆SSCP癫痫
- 常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征6型PINK1基因的突变分析被引量：30
- 2005年
- 目的探讨常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征6型(PARK6)PINK1基因的突变及临床特征。方法应用聚合酶链反应(PCR)、DNA直接测序和限制性内切酶酶切等技术对11个常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征家系先证者进行PINK1基因的突变分析。结果在两个家系中检测出PINK1基因两个新的点突变:位于第4外显子938位的C→T,导致所编码的313位氨基酸由苏氨酸变为蛋氨酸(T313M);位于第7外显子1474位的C→T,导致第492位提前出现终止密码子,截短了后面90个氨基酸。在另一个家系中检测出一个同义突变(Y454Y)。具有PINK1基因突变的患者临床特征包括发病年龄早,病情进展慢,腱反射活跃,症状波动明显,睡眠后症状减轻,对小剂量多巴制剂反应良好,未见到由左旋多巴诱导的运动障碍。结论PINK1基因突变是常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征的常见病因;我国大陆存在PARK6家系;PARK6具有临床异质性。
- 张玉虎唐北沙郭纪锋夏昆许波蔡芳邓汉湘严新翔陈涛曹立潘乾龙志高
- 关键词：突变分析DNA直接测序终止密码子腱反射活跃症状波动
- 利用PCR,FISH对异常核型中额外染色体的证实被引量：4
- 2005年
- 目的:检测在常规G显带下,45,X[115]/46,X+m ar[45]/46,XY[29]异常核型中额外小染色体的来源。方法:利用PCR对SRY基因进行检测;对人的Y染色体进行标记,利用荧光原位杂交技术,在荧光显微镜下观察。结果:用Y染色体杂交,发现在额外小染色体上有荧光信号。结论:额外小染色体来源于Y染色体。
- 薛志刚李玉梅姚仲元龙志高戴和平邬玲仟夏昆夏家辉
- 关键词：额外小染色体PCRY染色体
- 1例7p21.2→pter部分三体综合征患者及其表型定位研究被引量：3
- 2005年
- 采用人类染色体G显带技术、高分辨显带技术、荧光原位杂交技术 (FISH) ,对一例 7p2 1 .2→pter部分三体综合征患者的染色体进行研究 ,并综合文献报道的 1 4例 7p部分三体综合征的临床资料 ,就 7p部分三体综合征患者的核型与表型的相关关系、核型与疾病基因的相关关系等问题进行探讨。通过 1例染色体 7p2 1 .2→pter部分三体患者的染色体分析、表型定位研究和相关文献复习比较 ,探索染色体区带与表型的关系。结果表明 ,7p2 1 .2→p2 2是 7p部分三体综合征的关键片段 ,生殖器畸形、髋关节脱位与 7p1 5重复有关 ,心脏畸形与 7p多个基因作用有关 ,颅缝早闭基因可能位于 7p2 1 .2→p2 1 .3。
- 梁德生邬玲仟蔡芳夏昆龙志高潘乾戴和平夏家辉
