关庆东
- 作品数：18 被引量：37H指数：4
- 供职机构：复旦大学上海医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划上海市科委科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 异位hCGβ-CTP37基因疫苗的抗肿瘤作用被引量：4
- 2003年
- 目的 :研究异位hCGβ CTP37基因免疫诱导的肿瘤特异性免疫应答及其抗肿瘤作用 ,为肿瘤的免疫生物治疗寻求新途径。方法 :分离获取异位hCGβ CTP37的编码基因 ,并将 4拷贝基因以头尾串联形式克隆于真核表达载体TR42 1构建重组质粒TR42 1 CTP37.4,以PCR、酶切和DNA序列测定进行鉴定 ;肌内注射法对BALB/c小鼠实施 3次基因免疫 (1 0 0 μg/ 1 0 0 μl) (每只小鼠 ) ,间隔 3周 ,并以空载质粒为对照。ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗hCGβ IgG抗体 ;免疫小鼠脾细胞经特异性抗原hCGβ刺激后 ,用3H TdR掺入法和同位素释放法分别检测其特异性淋巴细胞增殖活性和CTL细胞毒活性 ;皮下接种SP2 / 0 hCGβ细胞攻击免疫小鼠 ,以成瘤率及实体瘤重量评估体内抗瘤效果。结果 :TR42 1 CTP37.4质粒免疫小鼠产生了较高水平的抗hCGβ IgG抗体 ,与空载质粒组有显著差异 ;hCGβ蛋白刺激TR42 1 CTP37.4质粒免疫小鼠脾细胞生产了高水平的特异性淋巴细胞增殖活性 ,且明显高于空载质粒免疫小鼠 ;特异抗原诱导的TR42 1 CTP37.4质粒免疫小鼠脾细胞对SP2 / 0 hCGβ细胞的CTL活性明显高于SP2 / 0 preS2 /S细胞 P <0 .0 1 ) ;空质粒免疫小鼠接种SP2 / 0 hCGβ细胞后成瘤率为 1 0 0 % ,瘤重达 3 .37g,而TR42 1 CTP37.4质粒免?
- 王立新关庆东吴瑾储以微熊思东
- 关键词：疫苗抗肿瘤作用人绒毛膜促性腺激素肿瘤生物治疗
- C3d-P28增强乙型肝炎病毒特异性基因免疫效果的研究被引量：7
- 2003年
- 目的 观察补体C3d P2 8对基因免疫的调节作用及其不同拷贝数对调节作用的影响 ,为增强基因免疫效果寻求新方法。方法 PCR法获得补体C3d P2 8编码基因并以头尾串连方式将1～ 4拷贝C3d P2 8编码基因克隆至pVAON33,构建pVAON33 P2 8.[1～ 4 ]重组质粒 ,然后将HBV preS2 S编码基因分别插入pVAON33和pVAON33 P2 8.[1～ 4 ]质粒获得pVAON33 S2 S和pVAON33 S2 S P2 8.[1～ 4 ]重组质粒。肌肉注射各重组质粒DNA(每只 10 0 μg 10 0 μl)初次免疫小鼠 ,并以pVAON33为对照 ;12周后皮下注射HBsAg蛋白加强免疫各组小鼠 ,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗 HBs IgG。结果 pVAON33 S2 S重组质粒免疫小鼠可诱导产生特异性抗 HBs IgG ,含不同拷贝C3d P2 8编码基因的重组质粒可诱导更高的特异性抗体 ,其中pVAON33 S2 S P2 8.4重组质粒诱导的抗体水平最高 (P <0 .0 1)。蛋白加强免疫后 ,含C3d P2 8编码基因重组质粒免疫组抗 HBs IgG迅速上升 ,并明显高于pVAON33 S2 S重组质粒免疫组 (P <0 .0 5 ) ,pVAON33 S2 S P2 8.4重组质粒诱导的抗体仍维持最高水平。结论 不同拷贝的C3d P2 8能不同程度地增强HBV preS2 S基因免疫诱导的特异性体液免疫及其蛋白加强后的回忆反应 ,其中 4拷贝C3d P2 8的增强作用较为显著。
- 王立新徐薇关庆东熊思东
- 关键词：乙型肝炎病毒基因免疫免疫调节
- CD40L在M2型巨噬细胞类型转换中的作用被引量：3
- 2008年
- 目的检测不同CD40L表达水平的脾细胞对巨噬细胞表型和功能的影响,探讨通过调控CD40L的表达改变巨噬细胞的类型。方法贴壁分离正常BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞。将腹腔巨噬细胞或经IL-4刺激的腹腔巨噬细胞,分别与体外培养2d后获得的CD40Llow脾细胞和Ionomycin与PMA诱导的CD40Lhigh脾细胞共孵育,24h后检测M1和M2型巨噬细胞相关基因的表达,并以硝酸还原酶法检测NO分泌水平。结果与CD40Llow脾细胞共孵育的巨噬细胞CCL22、Fizz1和Ym1表达水平较高,但只分泌较低水平的NO,而与CD40Lhigh脾细胞共孵育的巨噬细胞表达较高水平的CCL3并分泌高水平的NO,而且CD40Lhigh脾细胞可使M2型巨噬细胞表型相关基因明显下调。结论CD40Lhigh脾细胞使巨噬细胞倾向于M1型极化,并且能使M2型巨噬细胞向M1型转换。
- 郭强李康徐薇关庆东储以微熊思东
- 关键词：巨噬细胞M2型巨噬细胞CD40L一氧化氮
- C3d-P28对基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答的调节作用被引量：1
- 2004年
- 目的 :观察补体C3d P2 8对基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答的调节作用 ,为增强基因免疫效果寻求新方法。方法 :将质粒pVAON33 S2 S质粒 (仅含HBV preS2 S编码基因 )和pVAON33 S2 S P2 8 4质粒 (含HBV preS2 S和 4拷贝C3d P2 8的编码基因 )以肌肉注射法对BALB C小鼠实施基因免疫 (10 0 μg 10 0 μl 只 ) ,并以空载质粒为对照。定期采集免疫小鼠血清、ELISA法检测其中特异性抗HBs IgG及其亚型的水平 ;免疫小鼠脾细胞经特异性抗原 (HBsAg)刺激后 ,采用3H TdR掺入法、半定量RT PCR法、同位素释放法分别检测其特异性淋巴细胞增殖活性、IL 4和IFN γ基因表达的水平、CTL杀伤活性。结果 :pVAON33 S2 S P2 8 4质粒基因免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性、抗HBs IgG水平以及特异性CTL杀伤活性均明显高于pVAON33 S2 S质粒 ;C3d P2 8未改变基因免疫诱导的抗HBs IgG各亚型水平的格局 ,同时增强IgG1、IgG2a、IgG2b的水平 ;pVAON33 S2 S P2 8 4质粒诱导的IL 4和IFN γ的基因表达水平均明显高于pVAON33 S2 S质粒。结论 :C3d P2 8可在提高体液免疫应答的同时增强基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答。
- 王立新关庆东徐薇王缨熊思东
- 关键词：基因免疫免疫调节乙型肝炎病毒表面抗原
- ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生抗体的抗肿瘤作用被引量：2
- 2003年
- 目的:探讨ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生抗hCGβ抗体的抗肿瘤作用。方法:以TR421-ehCGβ质粒实施基因免疫、空载质粒为对照,ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗hCGβ-IgG抗体;以~3H-TdR掺入法检测灭活补体前后免疫血清对eh-CG^+肿瘤细胞增殖活性的抑制作用;倒置显微镜和FACS分别观察Hela细胞的形态变化及细胞凋亡情况。结果:TR421-ehCGβ质粒诱导小鼠产生高水平抗hCGβ-IgG抗体;抗hCGβ免疫血清对Hela细胞的抑制增殖作用明显强于对照血清,灭活补体后抑制率无明显变化;免疫血清的抑制作用与肿瘤细胞的hCGβ表达水平有一定的相关性;Hela细胞与免疫血清孵育后细胞死亡明显增多,但其中凋亡细胞为3.42％,与对照血清孵育细胞的凋亡(1.88％)比较无明显差异。结论:ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生的抗hCGβ抗体以不依赖补作方式抑制ehCGβ^+肿瘤细胞的增殖。
- 王立新徐薇关庆东熊思东
- 关键词：抗体肿瘤基因免疫
- C3d的免疫负调控作用及其可能的机制
- 为了证明三拷贝C3d的免疫负调控作用,该课题分别选择hCGβ、HER-2/neu、HBV-preS2/S作为模式抗原,设计相应的基因疫苗,通过基因免疫手段免疫小鼠以观察C3d对特异性免疫应答的调节作用,并探讨其可能的机制...
- 关庆东
- 关键词：C3D负调控HER-2/NEU基因免疫
- 文献传递
- 异位hCGβ基因免疫诱导的特异性抗肿瘤免疫应答被引量：5
- 2003年
- 目的 观察异位hCGβ基因免疫诱导的肿瘤特异性免疫应答及其抗肿瘤作用 ,为肿瘤的免疫生物治疗寻求新途径。方法 构建含hCGβ编码基因的质粒TR4 2 1 hCGβ ,对BALB/c小鼠实施基因免疫 ,并以空质粒为对照。采用ELISA法和3 H TdR掺入法分别检测免疫小鼠血清中特异性抗hCGβ IgG抗体及其对肿瘤细胞体外生长的抑制作用 ;特异抗原体外刺激免疫小鼠脾细胞后 ,用3 H TdR掺入法和3 H TdR释放法分别检测其特异性增殖活性和细胞毒活性 ;皮下接种SP2 /0 hCGβ细胞攻击免疫小鼠 ,以成瘤率及实体瘤重量评估体内抗瘤效果。结果 全部TR4 2 1 hCGβ质粒免疫小鼠均产生高水平的抗hCGβ IgG抗体 ,该抗体可抑制肿瘤细胞的体外生长 ,与对照血清相比 ,差异有显著差性 (P <0 .0 5 ) ;hCGβ蛋白、灭活SP2 /0 hCGβ细胞以及两者混合均能刺激TR4 2 1 hCGβ质粒免疫小鼠脾细胞的体外增殖 (SI值分别为 1.5 3、1.81和 2 .0 5 ) ,与空质粒免疫小鼠相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;特异抗原刺激的TR4 2 1 hCGβ质粒免疫小鼠脾细胞对SP2 /0 hCGβ细胞的细胞毒活性明显高于SP2 /0细胞(P <0 .0 1) ;空质粒免疫小鼠接种SP2 /0 hCGβ细胞后成瘤率为 10 0 % ,瘤重达 3.37g ,而TR4 2 1 hCGβ质粒免疫小鼠的成瘤率为 16 .6 6 % 。
- 王立新吴瑾关庆东熊思东
- 关键词：特异性免疫应答基因免疫
- 体内电转染增强基因免疫诱导的HBV特异性体液免疫应答
- 2003年
- 为观察体内电转染对HBV基因免疫诱导的特异性体液免疫应答的调节作用,将HBV-preS2/S编码基因插入pVAON33载体构建重组质粒pVAON33-preS2/S,运用肌肉注射法对BALB/c小鼠进行基因免疫(100ug质粒DNA.100ul.只)。以pVAON33-preS2/S、pVAON33-preS2/S(体内电转染)为实验组,并以pVAON33空质粒为对照。按期采集免疫小鼠血清。采用ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗HBs-IgG抗体。结果显示,pVAON33-preS2/S免疫小鼠后可诱导产生特异性抗HBs-IgG抗体,到第7周时其OD值为0.73±0.18(P/N为2.13),而pVAON33-preS2/S(体内电转染)组诱导了更高水平的特异性抗HBs-IgG抗体,第7周时OD值为1.30±0.45(P/N为3.79),两组比较有显著性差异(P<0.05)。本研究表明体内电转染可明显增强HBV基因免疫诱导的体液免疫应答。
- 关庆东苏丽萍王立新童德妍徐焕宾夏明灿陈晋熊思东
- 关键词：基因免疫HBV体液免疫
- SARS-Cov M蛋白的真核表达及其免疫原性研究被引量：1
- 2005年
- 目的 初步研究SARS-Coy病毒M蛋白基因的真核表达效率和免疫原性为进一步的疫苗研究奠定基 础。方法 以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长M基因,分别克隆至pcDNA4-his／myc和pVAON33载 体获得重组质粒pcDNA4-his／myc-M和pVAON33-M。以Western Blot方法利用融合分子羧基段的myc表位检 测pcDNA4-his／myc-M转染的293T细胞中M蛋白的真核表达。以ELISA方法检测pVAON33-M质粒基因免 疫小鼠诱导产生特异性抗血清。结果pcDNA4-his／myc-M转染后48 h可检测到SARS-Cov M蛋白表达。 pVAON33-M基因免疫能够诱导产生M特异的体液免疫应答。结论 本研究的结果表明SARS-Cov M蛋白可 以在真核细胞中有效表达并有良好免疫原性,可以作为SARS-Cov疫苗研制的候选抗原之一。
- 童德妍汪晓华郑秀娟关庆东熊思东
- 关键词：M蛋白SARS-COV真核表达免疫原性研究转染真核细胞
- ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生的效应脾细胞过继免疫抗肿瘤作用的研究被引量：1
- 2004年
- 目的:探讨ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生的效应脾细胞过继免疫在抗肿瘤中的作用。方法:通过转染建立稳定表达ehCGβ和HBV—preS2/S的细胞株Sp2/0-ehCGβ和Spz/0-preS2/S。以TR421-hCGβ质粒实施基因免疫,免疫后检测小鼠脾细胞,特异性细胞毒活性;同期将脾细胞过继免疫给正常小鼠,以过继TR421-hCGβ质粒免疫小鼠脾细胞为实验组、过继TR421质粒免疫小鼠脾细胞为对照组,检测脾细胞杀伤效应。结果:效应脾细胞对sp2/0-ehCGβ的杀伤率明显高于Sp2/0—preS2/S(P<0.05)。Sp2/0-ehCGβ在实验组小鼠仅2只形成实体瘤,TR421-hcGβ质粒基因免疫抗肿瘤任用有肿瘤特异性,两组有显著性差异(P<0.05),而在对照组小鼠均形成实体瘤。Sp2/0-preS2/S在所有的小鼠均形成了实体瘤,其瘤重无显著性差异。结论:ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生的效应细胞可特异性杀伤肿瘤,过继免疫效应细胞能使正常小鼠获得明显的特异性抗肿瘤能力。
- 关庆东王立新张进平徐薇储以微王缨熊思东
- 关键词：肿瘤基因疫苗过继免疫
