卢炎 作品数:21 被引量:181 H指数:6 供职机构: 首都医科大学附属北京友谊医院 更多>> 发文基金: 北京市科技新星计划 北京市自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 化学工程 生物学 更多>>
浸润性乳腺癌中c-myc,Bcl-2蛋白表达及DNA倍性的检测及意义 被引量:5 2003年 目的探讨浸润性乳腺癌中c myc ,Bcl 2蛋白表达及DNA倍性与乳腺癌患者预后的关系。方法应用免疫组化S P法测定 14 6例原发浸润性乳腺癌标本的c myc,Bcl 2蛋白表达 ,应用流式细胞术检测 72例标本的DNA倍性。结果c myc蛋白在胞核或胞浆中均有表达 ,核染色阳性者 14例 (9 6 % ) ,与DNA倍性及乳腺癌患者预后明显相关 ;细胞浆着色者 134例 (91 8% ) ,免疫组化表达中、强阳性病例与乳腺癌ER状况呈正相关性。Bcl 2蛋白总表达率为 78 8% ,与雌激素受体呈正相关 ,与患者淋巴结转移呈负相关。异倍体标本占 5 1 4 % ,与c myc蛋白核表达及预后有明显相关性。结论c myc蛋白核表达及DNA倍性可作为判定乳腺癌预后的重要指标。 张栋 高东宸 张长淮 王宇 卢小梅 陈书媛 卢炎关键词:浸润性乳腺癌 C-MYC蛋白 DNA倍性 预后 病毒性肺炎淋巴细胞亚群、T淋巴细胞亚群状况研究 被引量:14 2004年 目的探讨病毒性肺炎急性期、恢复期外周血淋巴细胞亚群及辅助性T淋巴细胞亚群Th1、Th2百分率,血清免疫球蛋白改变,了解病毒性肺炎的免疫病理状况 方法 采集急性期(43例)、恢复期(18例)及正常对照组外周抗凝血,采用流式细胞仪检测T细胞、T辅助/诱导细胞亚群(CD4+)、T抑制/毒性细胞亚群(CD8+)、B细胞、自然杀伤(NK)细胞的百分数及CD4/CD8+值;同时检测CD4+细胞中Th1、Th2细胞百分比结果 患儿急性期、恢复期B细胞百分率及急性期Th1细胞百分率与对照组比较有显著差异(P<0.05)肺炎组Th1/Th2值较对照组显著增高(P<0.05),血清免疫球蛋白正常或稍高 结论 病毒性肺炎时外周血B细胞增加,体液免疫被激活;急性期Th1细胞百分率增加,Th1型细胞免疫反应性增强。 杭敏 侯安存 卢炎 王新佳关键词:淋巴细胞亚群 辅助性T淋巴细胞 流式细胞仪 荧光定量聚合酶链反应检测基质金属蛋白酶组织抑制因子-1方法的建立 被引量:11 2005年 目的构建含有金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的重组质粒并以其为模板建立荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TIMP-1的标准曲线,为荧光定量PCR准确检测TIMP-1奠定基础.方法提取大鼠星状细胞系HSC-T6的mRNA,经RT-PCR扩增TIMP-1基因后与pGMT-Vector 连接,转化到大肠杆菌DH5α,以筛选得到的阳性克隆质粒作为标准品进行梯度稀释,分别用Taqman荧光探针技术和SYBR Green I荧光染料技术进行荧光定量PCR检测,建立标准曲线,并对两者结果进行了对比.同时进行普通PCR检测,与荧光定量PCR方法检测结果进行比较.结果重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明pGMT-TIMP-1基因已成功克隆.以不同稀释水平的标准品质粒进行荧光定量PCR扩增, 应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线的线性检测范围为7×104~7×108拷贝,检测灵敏度为7×104拷贝;应用SYBR Green I荧光染料技术的线性检测范围为7×106~7×108拷贝,检测灵敏度为7×106拷贝,且熔解曲线显示出现非特异性扩增;两种技术相对于普通PCR技术均具有定量功能.结论所构建的pGMT-TIMP-1基因荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好, 灵敏度和特异性高,准确可靠,此方法可作为荧光定量PCR检测TIMP-1基因的标准方法. 丛敏 阎钟钰 王萍 张岩 徐雍 卢炎 王宝恩 贾继东 尤红关键词:基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 荧光定量聚合酶链反应检测 荧光定量PCR方法 RT-PCR扩增 HSC-T6 SYBR 建立荧光定量聚合酶链反应检测金属蛋白酶组织抑制因子-1方法的研究 目的构建含有金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的重组质粒并以其为模板建立荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TIMP-1的标准曲线,为荧光定量PCR准确检测TIMP-1奠定基础。方法提取大鼠呈状细胞系HSC-T... 丛敏 阎钟钰 王萍 张岩 徐雍 卢炎 王宝恩 贾继东 尤红文献传递 喘息与非喘息型病毒性肺炎患儿淋巴细胞亚群的研究 被引量:6 2006年 目的了解喘息与非喘息型病毒性肺炎患儿淋巴细胞亚群的改变。方法对2002—2004在北京友谊医院就诊的急性期喘息型病毒性肺炎患儿37例及非喘息型病毒性肺炎患儿32例,采用流式细胞仪对其外周血淋巴细胞亚群进行检测。并以30例健康儿童作为对照组。结果喘息组与非喘息组病毒性肺炎患儿急性期外周血T辅助淋巴细胞亚群Th1细胞百分率分别为(12·61±7·19)%及(17·32±9·92)%,与对照组[(9·16±9·90)%]比较差异均有显著的统计学意义(P<0·001);喘息组与非喘息组患儿Th1/Th2比值均高于对照组(P<0·05,P<0·01)。此外与非喘息组比较,喘息组CD4+/CD8+较高(P<0·05),但其他各项指标差异均无统计学意义。结论病毒性肺炎时不论是否发生喘息,均呈现Th1应答优势。喘息型病毒性肺炎患儿除CD4+/CD8+较非喘息型病毒性肺炎高外,其他各项淋巴细胞亚群差异无明显统计学意义。 马兰 侯安存 吕芳 卢炎关键词:淋巴细胞亚群 流式细胞仪 带有HBV基因的腺相关病毒为载体的重组病毒感染树突状细胞的研究 被引量:1 2007年 目的探讨腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)为载体的含有HBV—S、C或X基因的重组病毒(rAAV—HBV—S,C,X)感染正常人树突状细胞的效率。方法分别构建含有HBV-S、C和x基因的从v质粒,在293细胞中包装成重组病毒,测定病毒滴度。从正常人外周血中分离出单核细胞进行体外培养,在培养的第1天分别用rAAV—HBV—S、C、X和作为对照的293细胞裂解液感染刺激单核细胞,感染后的单核细胞在GM-CSF、IL-4和TNF-α作用下继续培养7d获得成熟的树突状细胞。用RT-PCR及流式细胞仪细胞内染色检测HBV基因的RNA和蛋白的表达。结果重组rAAV—HBV—S、C、X的病毒滴度可以达到10^7拷贝/ml,用重组病毒分别感染树突状细胞。与对照组相比,感染的树突状细胞可表达相应的HBV基因RNA,流式细胞仪检测显示约90%的树突状细胞有相应HBV蛋白的表达。结论rAAV-HBV可有效感染树突状细胞,提示可以通过该途径刺激树突状细胞提呈抗原。 尤红 丛敏 王萍 阎钟钰 徐雍 卢炎 王宝恩 贾继东关键词:依赖病毒 树突细胞 带HBV基因的重组腺相关病毒刺激树突状细胞引起特异性CTL杀伤作用的研究 目的研究腺相关病毒(AAV)为载体的含有HBV-S、C或X基因的重组病毒(rAAV-HBV-S、 C、X)通过刺激树突状细胞(DC),产生对HBV感染的靶细胞特异性的缅胞毒杀作用。方法分别构建含有HBV-S、C和X基因的... 尤红 丛敏 王萍 刘天会 唐淑珍 徐雍 卢炎 刘晓明 王宝恩 贾继东文献传递 呼吸道合胞病毒及其他病毒性肺炎患儿血淋巴细胞亚群的变化 被引量:8 2006年 目的了解不同病原所致病毒性肺炎时血淋巴细胞亚群的改变。方法对2002~2004年确诊为病毒性肺炎的住院患儿,采用流式细胞仪对其急性期血淋巴细胞亚群进行检测。其中呼吸道合胞病毒(RSV)性肺炎组34例,非RSV肺炎组23例。同时与30例健康对照组比较。结果非RSV组Th1细胞百分率为[(15.89±7.88)%],RSV肺炎组为[(11.76±7.31)%],均较对照组显著增高(P=0.011,0);两者亦有显著差异(P=0.026);Th1/Th2在非RSV肺炎组较RSV肺炎组及对照组均明显增高,有非常显著差异(P=0.006,0)。结论病毒性肺炎时呈现Th1应答优势,并以非RSV感染最为明显。与非RSV肺炎相比,RSV威诳且右潜在的相对Th,后商俪向. 马兰 侯安存 杭敏 卢炎 刘霞关键词:淋巴细胞亚群 流式细胞术 非呼吸道合胞病毒性肺炎患儿淋巴细胞亚群变化 被引量:2 2006年 李黎 侯安存 杭敏 郝艳艳 马兰 卢炎关键词:病毒性肺炎 淋巴细胞亚群 流式细胞仪 以腺相关病毒为载体的小干扰RNA对肝星状细胞中金属蛋白酶组织抑制因子的抑制作用 被引量:1 2006年 目的观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1的表达抑制作用。方法针对大鼠TIMP-1 mRNA基因序列挑选一段22bp片段,在体外构建为短发夹siRNA (shon hairpin siRNA,shRNA)表达载体后,将其包装为重组AAV并感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后,于感染后30d及90d应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1 mRNA及蛋白质表达情况,同时通过PCR技术以感染后细胞的基因组DNA为模板扩增外源基因验证其长效表达。结果经PCR、酶切及序列测定证实含有siRNA-TIMP-1基因的重组AAV载体质粒已成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,感染后30d及90d细胞TIMP-1 mRNA水平明显降低(P<0.01),感染后30d TIMP-1蛋白表达水平较对照组细胞相比下降约60%,而感染后90d,TIMP-1蛋白表达几乎下降90%。PCR结果显示在重组病毒感染后90d细胞基因组DNA中仍可扩增出外源基因,证实外源基因可长期表达。结论重组病毒rAAV/siPtNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因的表达。 丛敏 王萍 刘天会 徐雍 卢炎 唐淑珍 刘晓明 王宝恩 贾继东 尤红关键词:金属蛋白酶组织抑制因子 小干扰RNA 腺相关病毒 肝星状细胞