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张勇: 作品数：32 被引量：83H指数：6; 供职机构：贵州医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金贵州省教育厅自然科学研究项目国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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家蝇幼虫分泌型抗菌肽分子鉴定被引量：4: 2010年; 目的十二烷基磺酸钠对家蝇幼虫分泌型抗菌肽进行分子鉴定。方法对纯化所得的家蝇幼虫分泌型抗菌肽使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及肽指纹图谱方法进行分子鉴定。结果 SDS-PAGE结果表明,纯化得到的2个抗菌组分,主要成分的分子量在14.157 kDa左右,另一组分的分子量为7.579 kDa,但蛋白含量明显低于上一组分;分别将这2个抗菌肽分子命名为家蝇幼虫分泌型抗菌肽Ⅰ和抗菌肽Ⅱ,抗菌肽Ⅰ经肽指纹图谱分析,精确分子量为14.264 kDa,其与溶菌酶序列有一定同源性,序列覆盖率为20%,但两者生物学特性不同,推测为不同蛋白质。结论从家蝇幼虫分泌物中分离得到的抗菌肽与溶菌酶有一定同源性,但生物学特性有差异。; 国果吴建伟付萍张勇; 关键词：家蝇幼虫抗菌肽分子鉴定肽指纹图谱

抗真菌肽MAF-1基因在家蝇中的时空表达差异研究: 研究背景家蝇(Musca domestica)属全变态昆虫,生活史包括6个生长发育阶段,即卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹、成虫,均生活在杂菌横生的环境里,是许多病原体的携带者。由于家蝇本身不受这些病原微生物的感染,...; 付萍吴建伟国果张勇; 关键词：家蝇; 文献传递

家蝇泛素结合酶基因的生物信息学分析被引量：6: 2014年; 利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇泛素结合酶基因(MD-E2)cDNA序列,采用NCBI、ExPASY中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析,MEGA软件构建了进化树。结果表明,家蝇泛素结合酶基因的cDNA序列具有完整的ORF框,全长480 bp,一共编码159个氨基酸。其编码的蛋白质理论分子量为18.117 9 kD,等电点8.64,无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有泛素结合酶家族的活性位点(FHPNVYPSGTVCLSLL),主要分布于细胞核;二级结构以无规则卷曲为主,β折叠较少。; 国果吴沁怡吴建伟赵学军付萍张勇; 关键词：家蝇泛素结合酶生物信息学

猬迭宫绦虫27ku半胱氨酸蛋白酶基因的表达模式研究: 2016年; 目的了解半胱氨酸蛋白酶(CP)基因在猬迭宫绦虫成虫及裂头蚴不同部位及裂头蚴不同感染时期的时空表达模式。方法收集安顺地区野生王锦蛇体内猬迭宫绦虫裂头蚴。将24只昆明小鼠随机分成8组,每组3只,以5条裂头蚴/只感染小鼠,于感染后30min^14d剖杀1组小鼠,收集感染小鼠体内的裂头蚴,以10条/只感染3只幼犬,于感染后1个月剖杀幼犬,收集成虫。利用实时定量PCR检测猬迭宫绦虫成虫和裂头蚴不同部位及不同感染时期裂头蚴CP基因的表达情况。结果小鼠经口感染裂头蚴30min后腹腔内查见穿过胃肠壁的裂头蚴;感染后30min^6h,裂头蚴主要见于胃肠腔、胃肠壁和腹腔内;感染24h,有少量的裂头蚴移行至小鼠皮下肌肉组织;感染7d后,多数裂头蚴移行至皮下肌肉组织寄生。实时荧光定量PCR检测CP基因在成虫及裂头蚴的不同部位均有表达,但成虫不同部位的表达量均低于幼虫时期。成虫不同部位的表达量依次为孕节>头节>成节,裂头蚴不同部位的表达量依次为体段>头段>尾段。裂头蚴感染小鼠30min时CP基因表达量下调,感染6h时达到峰值,随后下降,感染14d时降至最低。结论 CP基因在猬迭宫绦虫裂头蚴感染初期及裂头蚴体段和成虫孕节高表达,提示CP可能参与猬迭宫绦虫的生长、发育、入侵及移行等过程。; 刘艳丹陈艳张勇; 关键词：裂头蚴半胱氨酸蛋白酶基因表达实时定量PCR

家蝇几丁质酶基因MDCII重组表达质粒的构建及表达模式研究被引量：4: 2017年; 从家蝇EST测序数据库中筛选获得家蝇几丁质酶基因MDCII,对该基因进行克隆及分子特性分析,探讨其在家蝇不同组织、不同发育时期及经不同微生物诱导后的时空表达模式。利用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫c DNA质粒文库筛选出MDCII基因,运用生物信息学方法分析该基因序列及其编码蛋白的理化特性,采用邻接法构建系统进化树;PCR技术扩增目的基因,构建p EASY-E1-MDCII重组质粒,转化到Trans1-T1克隆感受态细胞中;采用实时荧光定量PCR(Real Time PCR)技术,检测MDCII基因在不同发育时期和不同组织部位的表达差异;采用注射法将不同微生物导入到家蝇3龄幼虫体内,Real Time PCR检测诱导后不同时间点MDCII基因表达水平的变化。结果显示,MDCII基因的ORF框全长1 374 bp,编码457个氨基酸,理论分子量51.6 k D,进化树分析比对与果蝇成虫盘生长因子的遗传距离较近。构建了具有正确基因序列的p EASY-E1-MDCII重组质粒。MDCII基因在家蝇不同发育阶段中均有不同程度的表达,在3龄幼虫中,以唾液腺和脂肪体中的表达水平较高;在白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导后3 h,MDCII基因均出现明显的表达上调。MDCII基因属于几丁质酶中成虫盘生长因子,参与了家蝇的生长发育,在免疫防御过程中也发挥了一定作用。; 杨尉锦国果吴沁怡李妍付萍张勇; 关键词：家蝇几丁质酶克隆

针刺和热胁迫下家蝇幼虫的血淋巴蛋白质组研究: 目的：分析家蝇幼虫免疫诱导前后血淋巴中的免疫防御相关活性蛋白分子，以期获得家蝇幼虫的功能蛋白表达谱，为探索家蝇免疫机制、昆虫抗菌肽等活性蛋白的鉴定和开发等研究提供研究线索和理论依据。　　方法：采用针刺和热诱导方法刺激家蝇...; 张勇; 关键词：家蝇幼虫血淋巴活性蛋白抗菌多肽; 文献传递

家蝇幼虫血淋巴抗肿瘤活性蛋白功能分子的筛选及分子鉴定: 目的:从家蝇幼虫血淋巴中筛选抗肿瘤活性蛋白功能分子。方法:以剪头法提取家蝇三龄幼虫血淋巴,依次收集C18固相萃取柱不同乙腈洗脱梯度洗脱组分,用MTT法测定抗肿瘤活性,并进一步用RP-HPLC纯化活性组分和测定分子特性,实...; 魏洪吴建伟徐楠国果张勇付萍罗振华刘萍胡蓉张殊; 关键词：家蝇血淋巴 HPLC; 文献传递

家蝇幼虫分泌型抗菌肽对细菌感染小鼠的影响被引量：3: 2012年; 目的:探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽对细菌感染小鼠的影响。方法:选用BALB/c小鼠,随机分为3组:抗菌肽预防性干预组(小鼠感染前3 d预防性给抗菌肽10 mg.kg-1.d-1)、治疗性干预组(感染后予抗菌肽10 mg.kg-1)和模型组(感染后予生理盐水),小鼠细菌感染方式为ip大肠杆菌液,给抗菌肽方式亦为ip给药,设正常小鼠为对照。分别检测以下指标:感染后4,12 h各组小鼠腹腔液细菌数量;感染后4,8,12,24 h小鼠外周血内毒素、一氧化氮(NO)含量及鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)等细胞因子水平。结果:预防性给抗菌肽能明显减少小鼠腹腔液的细菌数量,同时小鼠外周血TNF-α,IL-6,NO及内毒素含量均明显低于模型组;治疗性给抗菌肽组小鼠腹腔液细菌数及外周血内毒素含量亦明显低于模型组,但对其他指标的干预作用较预防性给抗菌肽组弱。结论:家蝇幼虫分泌型抗菌肽ip给药对大肠杆菌ip感染小鼠具有一定的抑制作用。; 国果吴建伟付萍张勇; 关键词：家蝇幼虫分泌物抗菌肽细菌感染

家蝇幼虫分泌物抗菌肽的分离及其部分特性被引量：19: 2007年; 目的分离家蝇(Musca domestica)幼虫分泌物抗菌肽并研究其部分理化特性。方法用超滤、固相萃取、反相高效液相色谱(RB-HPLC)分离纯化家蝇幼虫分泌物抗菌肽;测定抗菌肽对多株革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);比较其在不同pH值(pH 6．0～9．0)、不同阳离子浓度(Mg2+:(0.5×10-3～10．0×10-3)mol／L, Na+、K+:(10×10-3～100×10-3)mol／L)及不同小鼠血清浓度(12．5％～75％)环境中抗菌活性的变化。结果超滤分离获得的活性蛋白相对分子质量为Mr 3000～30000,该蛋白经20％、30％、70％及80％乙腈洗脱,其组分均有活性,其中以70％乙睛洗脱组分活性较强且稳定。进一步用RP-HPLC从70％洗脱组分中纯化出两个抗菌活性肽。抗菌肽对大肠埃希菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的MIC值分别为32．738、16．369、65．475及32．738μg/ml。在培养基pH值为6～9、不同阳离子浓度及不同小鼠血清浓度的环境中,各实验组的A570增加量均小于0．05,而对照组的A570增加量多为0.3以上,各实验组与对照组比较,其差异均具有统计学意义(P值均<0．01)。结论用固相萃取等方法从家蝇幼虫分泌物中可快速分离出具有较强活性的抗菌肽。该抗菌肽在不同条件下均具有较好的抗菌效果。; 国果吴建伟付萍覃容贵张勇宋智魁; 关键词：家蝇分泌物抗菌肽纯化

应用iTRAQ标记技术结合2DLC-MS/MS分析家蝇幼虫免疫诱导后血淋巴蛋白质组被引量：1: 2014年; 目的分析家蝇幼虫免疫诱导前后血淋巴中的免疫防御相关靶标,探索其先天性免疫机制。方法采用同位素标记及相对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)结合2D LC-MS/MS对家蝇幼虫诱导前后的血淋巴蛋白质组进行研究。结果与对照组比较研究后共获得237个不同肽段,鉴定到13个具有定量信息的差异蛋白。免疫刺激后显著上调的蛋白有9个,下调蛋白4个(P<0.05),对鉴定到的差异蛋白进行理化性质分析和GO(gene ontology)注释分析,发现这些蛋白分别具有抗菌、抗氧化、催化结合等功能,并参与了免疫、代谢、应激、转运等生物学过程,表明对家蝇幼虫经诱导后血淋巴中多种功能蛋白的表达发生了变化。结论 iTRAQ标记技术结合2D LC-MS/MS可以有效地分离鉴定昆虫血淋巴蛋白质组,为深入研究差异蛋白的功能奠定了基础。; 张勇吴建伟付萍国果; 关键词：家蝇幼虫蛋白质组血淋巴 ITRAQ

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