张黎颖
- 作品数：112 被引量：186H指数：7
- 供职机构：北京地坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HBV XTP12蛋白反式激活基因的上调基因
- 为筛选与克隆乙型肝炎病毒(HBV)反式激活基因XTP12的上调基因,了解其可能存在的调节功能线索,我们应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin-formatics)技术筛选并克降XTP12反式激活的新型靶...
- 宫嫚成军纪冬刘妍郭江张黎颖李筠
- 关键词：X蛋白反式激活抑制性消减杂交
- 文献传递
- 应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1的反式调节基因被引量：3
- 2005年
- 目的:应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1反式激活的新型靶基因．方法:以HBV DNAPTP1表达质粒pcDNA3．1(-)- DNAPTP1 转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建 cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析．结果:成功构建DNAPTP1反式激活基因差异表达的cDNA 消减文库．文库扩增后得到60个白色克隆,经菌落PCR分析,得到32个200-1 000 bp插入片段．对所得片段测序,并进行同源性分析,获得3个差异表达的已知蛋白基因和4个未知功能的染色体序列．结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了DNAPTP1可能存在的调控机制的线索．
- 高学松成军甄真郭江张黎颖陶明亮
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节抑制性消减杂交
- 应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HCV FTP2的反式调节基因
- 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式调节靶基因FTP2的反式激活基因的cDNA文库,克隆 FTP2反式激活基因。方法:以HCV FTP2表达质粒pcDNA3．1(-)-HCV FTP2转染HepG2细胞,以空载体p...
- 郭江成军赵龙凤纪冬高学松刘妍张黎颖戴久增
- 文献传递
- 应用抑制性消减杂交技术筛选转化生长因子β1刺激LX02细胞的反式调节基因被引量：4
- 2008年
- 目的构建转化生长因子（TGF）β1刺激大鼠肝星状细胞（LX02）反式调节基因的cDNA消减文库，筛选并克隆TGFβ1反式调节相关基因，以阐明TGF β1介导肝纤维化的分子生物学机制。方法以TGFβ1刺激LX02细胞，同时以磷酸盐缓冲液刺激的LX02细胞作为对照。提取mRNA并逆转录为cDNA，经Rsa I酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应。将产物与pGEM-Teasy载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增；随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建了TGF β1刺激LX02细胞反式调节基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到146个200～1000bp插入片段的阳性克隆；随机挑取其中35个克隆进行测序，30个列序成功，并通过生物信息学分析发现有28个与已知基因序列和2个与未知功能基因序列高度同源。结论应用抑制性消减杂交技术成功构建了TGF β1刺激LX02细胞反式调节基因的cDNA消减文库，筛选到一些与细胞生长调节、蛋白质合成、信号传导、细胞外基质代谢、抗脂质过氧化等密切相关的蛋白质编码基因，为进一步阐明TGFβ1介导肝纤维化的分子生物学机制提供了线索。
- 肖琳成军郭江张黎颖洪源伦永志蓝贤勇武会娟张丽娟张跃新张建龙李燕
- 关键词：肝纤维化肝星状细胞转化生长因子Β
- 自身免疫性肝炎临床和免疫学特点分析
- 目的:了解自身免疫性肝炎(AIH)患者的临床和免疫学特点。方法:回顾性分析142例AIH患者的一般资料、临床特点、生化检查、免疫学检查和自身抗体的结果。结果:142例AIH患者男女比例1:2．67,发病年龄为(52．6±...
- 李蕴铷张黎颖王文彬欧蔚娓谢雯魏来
- 文献传递
- 应用噬菌体展示技术初步筛选自身免疫性肝炎患者肝细胞靶抗原
- 2006年
- 自身免疫性肝炎（AIH）是以肝脏炎症反应为主的自身免性肝病．病因不明，其中Ⅰ型AIH最为常见，但尚未发现其存在于肝细胞的自身靶抗原．本研究利用Ⅰ型AIH患暂血清作为固相靶分子，用噬菌体展示的肝细胞cDNA筛选存在于肝细胞的自身靶抗原。
- 李蕴铷张黎颖成军王培之谢雯魏来
- 关键词：细菌噬菌体肝炎自身免疫性
- 应用噬菌体展示技术筛选HBsAg启动子I的DNA结合蛋白被引量：4
- 2004年
- 目的:通过筛选HBsAg基因启动子Ⅰ(SP Ⅰ,surface promoter Ⅰ)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径. 方法:应用噬菌体展示技术,以HBsAg基因启动子Ⅰ的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索. 结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的14个克隆中得到8 个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了和HBV表面抗原基因启动子Ⅰ特异结合的肝细胞蛋白,共编码7种蛋白.其中3个克隆编码未知功能蛋白;其余的克隆分别编码4-氨基丁酸氨基转移酶、触珠蛋白、复制蛋白等蛋白. 结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBsAg基因启动子Ⅰ的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因.
- 杨艳杰成军陈东风王春花黄燕萍吴煜刘敏王建军钟彦伟刘妍张黎颖
- 关键词：噬菌体展示技术HBSAGDNA结合蛋白
- 新基因XTP3反式激活基因TPA的克隆化研究被引量：1
- 2005年
- 目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库,克隆XTP3反式激活相关基因。方法:依据我室构建的HBV X蛋白反式激活基因XTP3差异表达的cDNA消减文库,利用生物信息学技术获得新基因XTP3TPA的编码序列,对其可能的氨基酸序列进行分析比较,并对其进行克隆化研究。结果:发现了HBV XTP3反式激活作用的新的靶基因,命名为XTP3TPA。结论:这一发现为阐明HBV XTP3蛋白的反式激活作用及其机制开辟了新的研究方向。
- 杨艳杰成军陈东风张黎颖王春花吴煜王建军
- 关键词：反式激活反式激活基因克隆化研究新基因CDNA消减文库TPAHBVX蛋白
- 应用噬菌体展示技术筛选细胞周期素B2启动子DNA的结合蛋白被引量：1
- 2005年
- 目的筛选细胞周期素B2(cyclinB2)启动子DNA结合蛋白,探索cyclinB2的表达调节机制。方法应用噬菌体展示技术,以cyclinB2启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附洗脱扩增”富集过程,噬斑裂解液PCR扩增后,进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索。结果噬菌体经富集后,筛选出20个阳性克隆,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索,确定了和cyclinB2启动子特异结合的肝细胞蛋白,共编码6种已知蛋白。结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到cyclinB2启动子DNA结合蛋白,分析了这些蛋白的功能,为研究cyclinB2基因的转录调节机制奠定了基础。
- 郭江成军赵龙凤高学松张黎颖伦永志
- 关键词：噬菌体展示技术
- 转化生长因子β_1刺激肝星状细胞差异表达下调基因筛选被引量：2
- 2010年
- 目的筛选并克隆转化生长因子β1(TGF-β1)刺激肝星状细胞差异表达下调基因,阐明TGF-β1导致肝纤维化的分子生物学机制。方法以TGF-β1及磷酸盐缓冲液分别刺激大鼠肝星状细胞(即实验组和对照组),提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将对照组细胞cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与实验组细胞cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性PCR扩增,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建了TGF-β1刺激肝星状细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到98个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1000bp插入片段。选取含有插入片段的35个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得了19种已知基因序列和2个未知功能基因。结论应用抑制性消减杂交技术成功构建了TGF-β1刺激的肝星状细胞差异表达基因的cDNA消减文库,为进一步阐明TGF-β1参与肝纤维化的分子生物学机制提供了理论依据。
- 肖琳成军郭江张黎颖洪源伦永志蓝贤勇武会娟张丽娟张跃新张建龙李燕
- 关键词：转化生长因子Β1抑制性消减杂交技术肝星状细胞反式激活
