李世崇
- 作品数：99 被引量：159H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>
- 一种纯化CHO细胞表达尿激酶原的方法
- 本发明公开了一种从CHO细胞表达尿激酶原的细胞培养液中纯化尿激酶原的方法。该方法包括阳离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤的有机组合，能够有效的去除尿激酶原产品中的杂蛋白，得到纯度超过95％以上的尿激酶原产品。该方法能够有效...
- 李世崇张正光胡显文胥照平陈昭烈刘红高丽华肖成祖
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- 基于HEK细胞无载体固定化培养技术的重组腺病毒载体高效生产工艺
- 重组腺病毒载体是基因治疗研究和临床应用中将治疗基因有效地介入靶细胞和／或靶组织的最常用病毒载体。重组腺病毒载体的生产通常是通过将其感染人胚肾细胞(humanembryonickidneycells,HEK细胞)、使其在H...
- 刘兴茂刘红吴本传李世崇叶玲玲王启伟倪小平陈昭烈
- 文献传递
- 重组人尿型纤溶酶原激活剂的中试生产与性质研究
- 2003年
- 表达u PA的CHO dhfr 工程细胞CL 1 1G在 30升生物反应器中高密度大规模培养 65天后 ,获得 1 2 0 0余升细胞培养上清 ;经阳离子交换层析、凝胶过滤、苯甲眯亲和层析和阴离子交换层析四步纯化工艺 ,获得u PA冻干纯品 40克。对产品进行性质研究和质量检定 ,各项指标符合理论数据和《中国生物制品规程》。
- 李世崇胥照平胡显文张正光高丽华肖成祖
- 关键词：中试生产细胞培养纯化溶栓药物
- 重组人尿激酶原纯化工艺病毒去除效果验证被引量：1
- 2011年
- 目的验证重组人尿激酶原(Prourokinase,Pro-uk)纯化工艺的病毒去除效果。方法采用模拟Pro-uk纯化工艺中阴离子和阳离子交换层析的scale-down模型,以水泡性口炎病毒(Vesivular stomatitis virus,VSV)、脑心肌炎病毒(Encephalo-myocarditis virus,EMCV)、人单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type-1,HSV-1)为指示病毒,采用细胞病变法评价离子交换层析的病毒去除效果。结果阴离子交换层析对脂包膜病毒VSV和HSV-1的去除能力强,对无脂包膜病毒EMCV的去除能力较弱;阳离子交换层析对VSV和HSV-1的去除能力较弱,对EMCV的去除能力较强。经离子交换层析纯化后,3种指示病毒的累计去除效率均>99.99%(大于4 log10)。结论 Pro-uk纯化工艺中的离子交换层析是控制病毒安全性的有效步骤,其去除效率达到了《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》规定的安全标准。
- 李世崇叶华虎赵国焓张正光王代平胥照平高丽华陈昭烈胡显文
- 关键词：重组人尿激酶原纯化工艺离子交换层析
- 一种人工转录因子及其促进外源基因在CHO细胞中的高效表达方法
- 本发明公开了一种编码人工转录因子的核苷酸序列、氨基酸序列及该人工转录因子促进外源基因在CHO细胞中的高效表达方法。涉及人工转录因子的构建、表达、具有不同数量的人工转录因子结合序列的外源基因表达载体的构建、及用表达人工转录...
- 李世崇陈昭烈黄培堂叶玲玲刘红许建王启伟刘兴茂
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- CHO细胞培养中替代动物血清的培养基添加剂及其配制方法
- 本发明公开了一种CHO细胞培养中替代动物血清的培养基添加剂及其配制方法。该培养基添加剂配方包含胰岛素、血清素、腐胺、金精三羧酸、羟丙基-β-环状糊精、海藻糖、氨基酸、维生素及微量元素等其它物质。根据培养基添加剂配方中组成...
- 刘红陈昭烈叶玲玲李世崇王启伟杨振西
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- 一种抗人B细胞淋巴瘤的单链双特异性抗体
- 本发明公开了一种抗人B细胞淋巴瘤的单链双特异性抗体。用3个链间连接肽(Gly<Sub>4</Sub>Ser)<Sub>3</Sub>将抗人B细胞淋巴瘤CD20抗体的轻链可变区(VL<Sub>CD20</Sub>)和重链可...
- 陈昭烈于蕊李世崇吴本传刘红叶玲玲刘兴茂王启伟
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- Ca^2＋对悬浮培养HEK293细胞的细胞团形成、细胞生长和代谢的影响被引量：1
- 2006年
- 利用HEK293细胞在悬浮培养中具有聚集成团的体外培养特性，在250ml的Bellco的搅拌培养体系中，以细胞团粒径、细胞粒径、细胞数、细胞活力、葡萄糖比消耗速率（qglc）、乳酸比生产速率（qlac）和乳酸对葡萄糖得率（Ylac／glc）为观察指标，考察了HEK293细胞在Ca^2＋浓度设置为0μmol／L、250μmol／L、500μmol／L、750μmol／L和1000μmol／L的搅拌培养体系中的细胞团形成、细胞生长和代谢。实验发现：培养基中的Ca^2＋浓度决定着HEK293细胞在悬浮培养中能否形成细胞团并影响着细胞团的粒径分布和细胞团内细胞相互连接的紧密程度；在250～1000μmol／L的Ca^2＋浓度范围内，眦K293细胞团的平均粒径与培养基中的Ca^2＋浓度成正比；Ca^2＋浓度对以细胞团的形式悬浮培养的HEK293细胞的生长和代谢无明显的影响。实验结果提示，Ca^2＋浓度是调节HEK293细胞团粒径分布、维持悬浮细胞团中HEK293细胞正常生长和代谢的有效控制参数。
- 刘兴茂刘红叶玲玲吴本传李世崇王启伟倪小平陈昭烈
- 关键词：钙离子HEK293细胞代谢
- 活化素A和视黄酸诱导骨髓间充质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞(英文)被引量：2
- 2006年
- 背景:胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病的最有效的方法。然而,供体组织来源的匮乏限制了其应用。近来干细胞研究的进展表明,干细胞疗法可能解决这一问题。目的:采用活化素A和视黄酸诱导骨髓间充质干细胞分化,探讨骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的可能性。设计:随机对照实验。单位:解放军军事医学科学院生物工程研究所。材料:实验于2004-11/2005-06在解放军军事医学科学院生物工程研究所完成。Sprague-Dawley大鼠6只,雄性,体质量150～160g,由解放军军事医学科学院实验动物中心提供。方法:无菌抽取大鼠股骨骨髓,采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞。传代细胞随机分为4组,高糖组、活化素A和视黄酸组、β-巯基乙醇组和阴性对照组。分别采用含有高糖、活化素A和视黄酸、β-巯基乙醇等刺激因素的条件培养基进行诱导。应用免疫细胞化学和反转录聚合酶链反应等方法对分化细胞表型进行检测。主要观察指标:检测胰岛素和胰高血糖素,以及胰岛素1mRNA的表达。结果:骨髓间充质干细胞经过诱导后,①在高糖诱导组中,有散在的胰岛素和胰高血糖素阳性反应细胞出现。②活化素A和视黄酸组及β-巯基乙醇组有较多的胰岛素和胰高血糖素阳性反应细胞出现,而且这些细胞形成类似胰岛样的结构。③高糖组,活化素A和视黄酸组,β-巯基乙醇组均可见胰岛素1mRNA的表达。④阴性对照组未见有胰岛素和胰高血糖素阳性反应细胞出现以及胰岛素1mRNA的表达。结论:实验建立的一种基于活化素A和视黄酸及其他成熟因子的一种诱导方案,成功将骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素阳性反应细胞,并且形成类似胰岛样结构,但其诱导效率有待进一步提高。
- 王启伟于瑾刘兴茂李世崇叶玲玲刘红吴本传陈昭烈
- 关键词：干细胞胰岛素细胞分化
- 基于流式细胞术分选的高效表达外源基因细胞的筛选被引量：2
- 2009年
- 目的:以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用流式细胞术筛选高表达EGFP的细胞,从而获得外源基因高效表达细胞株。方法:构建在EGFPC端编码区融合新霉素(neomycin)抗性基因的融合基因EGFP-Neomycin,将其插入pcDNA3.1(+)载体,构建EGFP-Neomycin融合基因表达载体pcDNAEN,转染CHO-K1细胞,G418加压筛选和倒置荧光显微镜观察证实所表达的EGFP-Neomycin融合蛋白具有新霉素抗性和激发EGFP荧光双功能;将编码组织型纤溶酶原激活剂(tPA)的cDNA插入pcDNAEN中CMV启动子下游,构建表达tPA的表达载体pcDNAEN/tPA。结果:流式细胞术分析和tPA纤维蛋白溶解活性测定表明,pcDNAEN/tPA转染CHO-K1细胞的EGFP相对荧光强度(RFT)的自然对数值与tPA表达水平呈明显的直线相关关系,相关系数为0.983;比较部分未经流式细胞仪分选的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆和RFT分布在100～1000的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆的tPA表达水平,经流式细胞术分选获得的细胞克隆的tPA平均表达水平和最高表达水平分别是未经分选获得的细胞克隆的3.9倍和4.1倍。结论:构建的EGFP-Neomycin融合基因具有双功能,建立了利用流式细胞术筛选外源基因高效表达物细胞株的方法。
- 李世崇叶玲玲刘红刘兴茂王启伟吴本传黄培堂陈昭烈
- 关键词：外源基因细胞
