李南
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 发作性与慢性偏头痛脑深部灰质核团铁沉积的研究
- 目的: 利用磁共振（mgnetic resonance imaging， MRI）测量对比发作性偏头痛与慢性偏头痛脑深部灰质核团铁沉积，并评价其与病程、头痛频率以及头痛程度之间的关系，以期为脑深部灰质核团铁沉积用于鉴别...
- 李南
- 关键词：慢性偏头痛铁沉积影像学诊断
- 肺炎链球菌转化模型的建立被引量：6
- 2008年
- 目的:建立一种更加稳定、高效的肺炎链球菌实验室转化模型,以便于对该菌的各种目的基因进行重组改造.方法:分别用改进方法和既往方法制备肺炎链球菌感受态细胞,转化外源DNA,获取发生了转化的菌株,通过抗生素培养基培养和PCR鉴定是否发生转化;并计数抗生素筛选平板上的转化菌落,比较两者的转化率,以确定更佳的转化模型.结果:肺炎链球菌334菌株、31203菌株用改进方法的转化率分别为(0.89±0.20)%,(0.71±0.10)%,高于既往方法的转化率[分别为(6.2±1.4)×10-3%,(5.7±1.1)×10-3%],构建了肺炎链球菌感受态缺陷菌株,建立了改进的肺炎链球菌实验室转化模型.结论:改进的转化模型实现了稳定的肺炎链球菌实验室转化,能方便研究者对该菌进行各种遗传操作,为深入研究其致病的分子机制提供了一个技术平台.
- 赵清李南张雪梅胥文春朱兴华张群尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌细菌感受态
- 人Ⅰ型谷丙氨酸氨基转移酶的原核表达及抗血清的制备
- 2009年
- 目的:构建人谷丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫家兔,制备ALT1抗血清.方法:从HepG2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增alt1基因,并将其克隆入pMD19-T载体中测序,将测序正确的目的基因克隆至PET-32a(+)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western Blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA,Western Blot进行检测.结果:测序证实克隆的基因序列与GenBank中的ALT1序列相符;SDS-PAGE,Western blot结果证实获得Mr为75×103的ALT1融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1∶100000,Western Blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合.结论:获得了ALT1重组蛋白及特异性多克隆抗体.
- 李有强张雪梅王虹李南张群胥文春
- 关键词：丙氨酸转氨酶免疫血清
- 组氨酸激酶(YycG)在筛选肺炎链球菌抑制剂中的应用被引量：4
- 2009年
- 为了获得具有体外活性的肺炎链球菌组氨酸激酶YycG并利用其筛选寻找新的抑制剂。原核表达组氨酸激酶YycG的激酶功能域,经SDS-PAGE,Western blot鉴定及镍层析柱纯化后,采用激酶试剂盒检测其激酶活性;利用对其激酶活性的抑制作用从105种候选化合物中筛选有效的抑制剂,并通过实验验证抑制剂的抗菌作用。原核表达得到约35kDa的目的蛋白激酶域片段YycG′,其纯度达95%,并具有体外水解ATP的激酶活性;利用其活性筛选得到数种不同抑制效果的小分子化合物,且体外验证具有较好的抑菌效果。通过肺炎链球菌组氨酸激酶YycG活性筛选找到的小分子抑制剂可为进一步研发与该菌相关的药物或消毒剂提供基础。
- 李南王非牛司强王虹李有强尹楠林张雪梅朱维良尹一兵胥文春
- 关键词：组氨酸激酶蛋白纯化酶活性体外筛选
- 肺炎链球菌组氨酸激酶（VicK）的同源模建及其先导抑制剂的筛选和鉴定
- 双组份系统/(two-component system, TCS/)是存在于细菌内的一种信号转导系统,细菌通过感受外界环境变化、调控生存、毒力因子表达来维持自身生存,是细菌适应选择压力的一种机制。在不同细菌中,该系统的结...
- 李南
- 关键词：肺炎链球菌组氨酸激酶同源模建酶活性检测
- 文献传递
- 鼻腔滴注法建立小鼠肺炎链球菌性脑膜炎模型被引量：2
- 2008年
- 目的鼻腔滴注法建立小鼠肺炎链球菌性脑膜炎模型，为研究肺炎链球菌致脑膜炎的分子机制奠定基础。方法将冻存的TIGR4在新鲜TSA血平板上培养16h～18h后，刮取细菌并稀释成3种不同密度的菌液，每种密度分成2份，其中1份加入一定量的透明质酸酶，另1份不加。对小鼠行浅麻醉，用卡介苗注射器将上述菌悬液缓缓滴入小鼠鼻腔，待其自动吸入，每只小鼠50μl。每天观察小鼠情况，分别于感染后24、48和72h处死小鼠，取心脏血和一半脑组织匀浆，做细菌计数，另一半脑组织用于组织病理学检查。结果加透明质酸酶的TIGR4 3个剂量组小鼠脑膜炎发生率分别为20．00％、65．00％和46．67％，对照组分别为13．33％、53．33％和66．67％，差异无统计学意义（P=1．0000）；其中3×10^7 CFU组和3×10^4 CFU组差异无统计学意义（P=0．4621），两组合并后与3×10^6 CFU组差异有统计学意义（P=0．0196）。结论1）透明质酸酶不能促进鼻腔滴注TIGR4致小鼠脑膜炎的发生；2）小鼠脑膜炎的发生率与鼻腔感染TIGR4剂量有关，适宜剂量为3×10^7 CFU，低于该剂量脑膜炎的发生率显著降低。
- 胥文春单幼兰李南赵清张雪梅刘明芳尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌脑膜炎
- 以gfp为报告基因的肺炎链球菌启动子诱捕文库的构建与分析被引量：2
- 2008年
- 首先构建一个以gfp(green fluorescence protein)为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP,将肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段(200bp^800bp)克隆到该质粒gfp基因上游的多克隆位点,得到约58000个含有肺炎链球菌基因组DNA随机酶切片段的重组子,提取质粒即为质粒库,该库大约覆盖肺炎链球菌基因组全长的5倍,插入率达到90%以上,且有较强的随机性,质量较高。将该质粒库转化入肺炎链球菌TIGR4菌株,带有随机片段的报告质粒通过同源重组的方式将gfp基因融合于细菌染色体上该随机片段之后,利用质粒的抗生素抗性基因筛选出重组菌株,从而构建出相应的菌株库,共获得包含约500000个肺炎链球菌转化子的菌株库,经体内、外实验表明,其包含插入了S.pn体内、外表达基因片段的细菌,可以报告特定条件下的基因表达,并可通过流式细胞仪识别、分选。该文库的构建为进一步利用差异荧光诱导技术筛选肺炎链球菌体内诱导基因奠定了基础。
- 胥文春赵清孟江萍单幼兰李南舒朝忠朱新华尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌绿色荧光蛋白
- 肺炎链球菌双组份系统中的组氨酸激酶(YycG)的同源模建与分析被引量：4
- 2009年
- 对肺炎链球菌双组份系统中的组氨酸激酶YycG进行同源模建,并分析其与底物ADP的相互作用,为寻找特异性的激酶抑制剂提供了理论依据。采用同源模建的方法构建YycG蛋白的三维结构,并用ProCheck、Profile_3D软件对此结构模型的合理性进行验证;用Autodock4.0软件将结构模型与ADP进行自动对接,分析二者之间的相互作用。序列比对结果显示肺炎链球菌YycG蛋白与Thermotoga maritima X-ray晶体结构序列的同一性达33%;YycG模建后的结构与模板能很好的叠合;在活性口袋处的保守的氨基酸残基Asn145、Asn149、Lys152以及口袋内部的疏水残基在结合、水解底物ADP的过程中发挥重要作用。组氨酸激酶YycG的模建合理,该结构模型可作为设计抗菌药的研究起点。
- 李南王非胥文春王虹罗小民朱维良尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌组氨酸激酶同源模建分子对接
