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李志锋

作品数：1 被引量：4H指数：1
供职机构：浙江大学医学院病原生物学系更多>>
发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇原核表达
  • 1篇趋化
  • 1篇趋化作用
  • 1篇弯曲菌
  • 1篇细菌
  • 1篇空肠
  • 1篇空肠弯曲菌
  • 1篇基因原核表达

机构

  • 1篇浙江大学
  • 1篇金华职业技术...

作者

  • 1篇毛亚飞
  • 1篇赵金方
  • 1篇林旭瑷
  • 1篇严杰
  • 1篇李志锋
  • 1篇李立伟
  • 1篇楼宏强

传媒

  • 1篇中华微生物学...

年份

  • 1篇2009
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
空肠弯曲菌mcp1／2／3基因原核表达及其产物与细菌趋化作用的相关性被引量：4
2009年
目的克隆空肠弯曲菌（Campy1obacter jejuni）接受甲基趋化蛋白（MCP）编码基因mcp1、mcp2和mcp3并构建其原核表达系统，建立空肠弯曲菌体外趋化模型并确定趋化诱导物质，了解MCPs与趋化诱导物之间的关系。方法PCR扩增mcp1、mcp2和mcp3基因片段，T-A克隆后测序。构建上述目的基因原核表达系统，SDS—PAGE和Bio-Rad凝胶成像分析系统检查目的重组蛋白rMCP1、rMCP2和rMCP3的表达情况，Ni—NTA亲和层析法提纯rMCPs。rMCPs免疫家兔获得抗血清，免疫扩散法测其效价。用饱和硫酸铵盐析法和DEAE-32离子交换法提纯IgG，经胃蛋白酶酶解和Sephadex G-100层析制备IgG F（ab′）2。建立HAP（hard—agar plus）法空肠弯曲菌体外趋化模型并检测8种物质的趋化诱导作用。采用基于IgG F（ab′）2封闭的趋化阻断试验，确定不同MCPs的功能及其差异。结果PCR扩增获得预期大小的mcp1、mcp2和mcp3基因片段，其核苷酸和氨基酸序列与文献报道完全相同。所构建的原核表达系统能有效地表达各rMCPs，其产量均约为细菌总蛋白的10％。rMCP1、rMCP2和rMCP3免疫家兔后能产生特异性抗体，其免疫扩散效价均为1：4。牛胆汁和脱氧胆酸钠（DOC）对空肠弯曲菌趋化有浓度依赖性诱导作用（P〈0．05）。MCP1和MCP2被其IgG F（ab′）2封闭后，空肠弯曲菌对DOC的趋化能力明显减弱（P〈0．05），MCP3被封闭后对空肠弯曲菌趋化能力无影响（P〉0．05）。结论本研究成功地表达了空肠弯曲菌MCPs蛋白。牛胆汁和DOC是诱导空肠弯曲菌趋化的信号物质，MCP1和MCP2可能参与该菌对DOC的趋化过程。
李志锋赵金方楼宏强毛亚飞李立伟林旭瑷严杰
关键词：空肠弯曲菌趋化
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