杨东靖
- 作品数：57 被引量：171H指数：8
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- 发文基金：国家科技重大专项天津市科技支撑计划天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
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- 耐草甘膦基因G6原核表达蛋白条件的优化及其免疫反应性分析被引量：3
- 2012年
- 目的在大肠杆菌中表达耐草甘膦基因G6,并对其进行免疫反应性分析。方法将已构建好的携带G6基因的重组质粒pET28a-G6转化到大肠杆菌BL21中诱导表达,分别从诱导温度、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导时间进行了表达条件的探索。获得的重组蛋白在非变性条件下镍亲和层析纯化后,经质谱鉴定,对其免疫反应活性进行测定,分析该原核表达蛋白与转G6基因水稻中蛋白的等同性。结果利用原核表达系统成功实现了G6重组蛋白的高效表达,其最适条件为:0.5 mmol/L IPTG、30℃和160 r/min摇床转速诱导7 h。质谱鉴定为5-烯醇式丙酮酸-莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)。Western blot鉴定后,表达的重组蛋白与转G6基因水稻中的G6蛋白有相同的免疫反应性。结论利用原核表达系统表达的G6重组蛋白可以替代植物外源蛋白进行转G6基因产品的食用安全性评价,也可用于转G6基因产品ELISA检测的抗体制备。
- 吕莉琨苏旭王静李力杨东靖刘洪亮
- 2012-2016年天津市猩红热患儿A组链球菌病原学特征分析被引量：9
- 2018年
- 目的分析天津市2012—2016年猩红热患儿A组链球菌（GAS）病原学特征。方法以2012—2016年天津市猩红热监测点医院被临床诊断为猩红热患儿为研究对象，排除标准为无法配合采样的猩红热患儿，共采集575例患儿的咽拭子。采用生化方法，对咽拭子进行细菌的分离和鉴定；采用PCR方法，对分离株进行emm基因分型和超抗原基因speA、speC检测；使用K-B纸片法测定菌株对10种抗生素的耐药性。比较不同emm基因分型GAS超抗原基因携带情况，以及所有GAS对不同抗生素耐药情况。
结果共分离得到198株GAS，检出5个emm型别，即emm1/11/12/22/89，优势型别为emm12型（52.9%，100株）和emm1型（44.4%，84株）。speA和speC基因的携带率分别为21.7%（41株）和76.7%（145株），emm1型GAS的speA基因携带率为33.3%（28株），高于emm12型[12.0%（12株）]（χ2=12.21，P〈0.001），emm1型GAS speA和speC基因同时携带率为27.4%（23株），高于emm12型[12.0%（12株）]（χ2=7.01，P=0.008）。对阿奇霉素、红霉素、克拉霉素、克林霉素、四环素、左氧氟沙星和氯霉素的耐药率分别为96.8%（183株）、96.3%（182株）、92.1%（174株）、92.1%（174株）、73.0%（138株）、2.1%（4株）和1.6%（3株），未发现对青霉素、头孢唑啉和万古霉素耐药，差异有统计学意义（χ2=953.28，P〈0.001）。结论emm12和emm1型GAS是导致天津市儿童发生猩红热的2个优势型别，其携带speA和speC基因情况不同；GAS对青霉素、头孢唑林和万古霉素敏感，对克林霉素、克拉霉素、红霉素和阿奇霉素高度耐药。
- 阴杰莹张维杨东靖李琳董晓春
- 关键词：猩红热链球菌属病原学特征
- 天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 S基因片段克隆和序列分析被引量：5
- 2005年
- 目的了解天津地区汉坦病毒分离株TJJ16S基因的分子特征。方法采用细胞培养法从鼠肺标本中分离汉坦病毒,命名为TJJ16,提取TJJ16感染VeroE6细胞的总RNA,经逆转录扩增病毒cDNA,继而进行PCR扩增S基因片段,纯化后克隆于pMD18T载体,测定核苷酸序列并进行分析。结果天津地区首次从社鼠中分离出汉坦病毒TJJ16,其S基因片段全序列长为1701nt。只有1个编码N蛋白的开放读码框架(ORF),起始密码子为第37nt,终止于1326nt,推导其编码的蛋白长为429个氨基酸。经核苷酸系统发生树分析,TJJ16株应归属为汉坦病毒的汉滩型(HTN型)毒株,与HTN型新亚型A16株同属一个亚型。结论TJJ16病毒株的分离与S基因片段序列分析,证实在天津市鼠间存在HTN型汉坦病毒感染,对临床和流行病学的研究具有重要意义。
- 李力杨东靖陈锦英丁建清苏旭田永琴魏骏飞
- 关键词：汉坦病毒病毒分离株汉坦病毒感染VERO-E6细胞克隆开放读码框架
- 尿道致病性大肠埃希菌新基因R049的敲除
- 2012年
- 目的探讨尿道致病性大肠埃希菌(uropathogenic E.coli,UPEC)132株新基因R049的敲除,构建R049缺失突变株。方法对基因敲除所需的质粒pKD46和pCP20分别进行抗生素抗性改造,在其bla基因(Amp)r中插入带有启动子的Zeocin抗性基因(zeo),使其均具有Zeocin抗性(Zeo)r。然后进行Red同源重组,利用pKD46(Zeo)r携带的λ噬菌体重组酶将氯霉素抗性基因替换UPEC132基因组的R049基因,再利用pCP20(Zeo)r携带的FLP重组酶消除氯霉素抗性标记,在染色体上只保留1个FRT位点。结果质粒pKD46和pCP20抗生素抗性改造完成,并利用Red同源重组完成了对UPEC132的R049基因的敲除。结论构建了尿道致病性大肠埃希菌R049缺失突变株UPEC132ΔR049,为进一步对R049基因的功能研究奠定基础。
- 杨东靖张维苏旭李力吕莉琨陈锦英
- 关键词：尿道致病性大肠埃希菌RED同源重组基因敲除
- 2010年天津市手足口病病原学与分子流行病学分析被引量：11
- 2011年
- 目的对天津市2010年的手足口病(HFMD)病例进行病原学分析,并对引起该市HFMD流行的肠道EV71型和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)进行分子生物学特征分析。方法利用Real-time PCR检测HFMD病例标本,用人横纹肌肉瘤(RD)细胞对Real-time PCR检测阳性的部分病例标本进行病毒分离,用RT-PCR法扩增VP1全基因,使用生物学软件进行序列和系统发生分析。结果共检测HFMD病例1766例,肠道病毒总检测阳性率为71.52%(1263/1766),其中EV71占43.94%,Cox A16占41.65%,其他EV占14.41%。15株EV71分离株与C4亚型的C4a分支代表株具有最高的核苷酸序列同源性,均归属于C4a分支;9株Cox A16分离株与B1亚型的代表株具有最高的核苷酸序列同源性,其中8株属于B1b分支,1株属于B1a分支。结论导致天津市2010年HFMD流行的EV71流行株为C4亚型中的C4a病毒株,Cox A16流行株为B1亚型的B1b病毒株。
- 李力杨东靖吕莉琨苏旭李佳萌董晓春
- 关键词：手足口病肠道病毒71型柯萨奇病毒A组16型基因型
- 人偏肺病毒多表位抗原及其应用
- 本发明涉及人偏肺病毒多表位抗原及其应用，所述人偏肺病毒多表位抗原由B细胞表位、Th细胞表位、CTL细胞表位序列组合而成，通过串联方式，并用连接子将上述各类型表位序列连接在一起。本发明还提供所述人偏肺病毒B细胞表位、CTL...
- 李晓燕孔梅郭丽茹苏旭杨东靖邹明
- 文献传递
- 脉冲场电泳在霍乱弧菌分型中的应用被引量：9
- 2005年
- 目的:了解天津市霍乱弧菌的基因型。方法:选择保留的20株埃尔托霍乱弧菌进行血清分型及生化实验确认,采用琼脂糖包埋胶块法制备染色体DNA,以sfiⅠ内切酶进行切割,选定脉冲电泳参数进行片段分离。结果:20株霍乱保留株用脉冲场电泳分离可得到5种不同的基因型。结论:20株霍乱弧菌经血清学及生化检定确认未发生表型特征变异,脉冲场电泳分析表明,不同年代分离株基因型别重叠出现。
- 丁建清董杰王书梅田永琴李力王志锐杨东靖
- 关键词：霍乱弧菌脉冲场电泳
- 军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应检测技术的建立及应用被引量：4
- 2008年
- 为建立军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应([PCR)检测方法,根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌毒力基因KatB的特异引物,采用PCR方法对2005—2007年天津市中央空调冷却塔分离的嗜肺军团菌、杜氏军团菌、博氏军团菌、长滩军团菌等菌株进行了军团菌毒力基因KatB的检测。结果显示,本室分离的16株致病军团菌中有9株嗜肺军团菌和1株杜氏军团菌扩增出了2.7 kb的KatB基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段。本研究成功建立了军团菌毒力基因KatB的PCR检测方法,为军团菌的毒力研究奠定了基础。
- 于凌琪朱兵清杨东靖高源邹明吕莉琨王书梅
- 关键词：军团菌聚合酶链反应
- 2014-2016年天津市致病毒性脑炎人类肠道病毒基因特征分析被引量：6
- 2018年
- 目的了解天津市引起病毒性脑炎的人类肠道病毒(HEV)构成及其基因特征。方法收集2014-2016年天津市病毒性脑炎患者脑脊液和血清标本,通过细胞培养法分离病毒,采用RT-PCR分段扩增HEV VP1区全长序列并测序,进行同源性分析和基于VP1完整编码区的系统进化分析。结果从82份HEV阳性标本中分离到13株HEVB病毒,分离率15.85%,其中8株CV-B5型,2株E-6型,CV-B3型、E-18型、E-30型各1株。系统进化分析,天津市8株CV-B5与国内流行株C基因型亲缘关系较近,且分为两个不同的分支;HEV-B其它血清型均与国内流行株亲缘关系较近。结论天津市致病毒性脑炎HEV病原谱呈多样性特点,其中CV-B5为优势病原体,属于C基因型,且可能存在两条不同的传播链。
- 谭昭麟吕莉琨李力杨东靖郑宝璐骆晓燕苏旭
- 关键词：病毒分离VP1基因系统进化分析
- 一起诺如病毒所致急性胃肠炎的病原学调查被引量：4
- 2014年
- 目的确定天津市一起水源性急性胃肠炎暴发的致病原。方法采集病例粪便标本,饮用深井水标本,采用荧光定量(Real-time PCR)检测病毒核酸,包括轮状病毒、杯状病毒、星状病毒和肠道腺病毒,阳性标本进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增及测序分析。对粪便标本进行常见肠道致病菌的检测。结果采集粪便标本33份,检出诺如病毒GⅠ型阳性5份(15.2%),诺如病毒GⅡ型阳性12份(36.4%),诺如病毒GⅠ型、GⅡ型均阳性3份(9.1%)。经测序分析1株GⅠ型为GⅠ/14基因型;4株GⅡ型中,2株为GⅡ/8型,1株为GⅡ/6型,1株为GⅡ/2基因型。轮状病毒(A,B,C组)、札如病毒、星状病毒、肠道腺病毒和肠道致病菌检测均为阴性。3份饮水标本中轮状病毒(A,B,C组)、诺如病毒(GⅠ型,GⅡ型)、札如病毒、星状病毒、肠道腺病毒检测均为阴性,常见肠道致病菌检测结果均为阴性。结论本次水源性急性胃肠炎暴发系由诺如病毒GⅠ型/Ⅱ型混合感染引起。
- 田宏雷玥刘杨杨东靖赵卓
- 关键词：诺如病毒急性胃肠炎
