王冬梅
- 作品数：23 被引量：24H指数：3
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省基础与前沿技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域的克隆表达及抗体的制备与纯化
- 目的 为了验证Marc145细胞SHP-1、SHP-2的存在,克隆出Marc 145细胞SHP-1、SHP-2结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体.材料与方法 应用RT-PCR技术从Mar...
- 杜东颖崔春晓冯亚琼王冬梅郭嘉张莹莹夏平安
- 感染PRRSV弱毒株后仔猪病毒血症和抗体产生规律
- 2019年
- 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒株在仔猪体内的增殖及其诱导抗体产生的规律。本试验将PRRSV CH-1R弱毒株肌肉注射免疫9头45日龄健康仔猪,于免疫后0,7,14,28,35和42d通过前腔静脉采取新鲜血液,利用实时荧光定量PCR方法检测PRRSV在猪体内的增殖,ELISA方法检测抗PRRSV抗体,并利用基于PAM细胞建立的中和试验检测中和抗体。结果显示:PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后7d病毒在100%仔猪体内开始复制,免疫后7~14d时100%仔猪出现病毒血症,且病毒拷贝数达到最高,28~35d时56%仔猪病毒血症消失,42d时67%仔猪病毒血症消失;ELISA检测发现免疫后7~14d仔猪均未产生抗PRRSV抗体,28d时44%仔猪开始产生抗PRRSV抗体,42d时78%仔猪抗PRRSV抗体水平达到最高,有2头猪在0~42d一直未检测到抗PRRSV抗体;利用基于PAM细胞上建立的检测中和抗体的方法检测,免疫后7~14d均未产生中和抗体,28d时仅有22%仔猪产生低水平的中和抗体,35d时78%仔猪产生中和抗体,且在42d时其中和抗体水平达到最高。结果表明,PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后病毒血症在7~14d达到高峰,免疫接种后28~42d大部分仔猪病毒血症逐渐消失,即病毒增殖随时间呈递减趋势;抗PRRSV抗体及中和抗体均在免疫接种后28d开始出现且在42d抗体水平达到顶峰,即抗体水平随时间呈递增趋势。抗PRRSV的ELISA抗体与中和抗体水平呈正相关,而抗PRRSV中和抗体水平与病毒增殖呈负相关,但是有33%仔猪体内一直存在病毒,表明PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后,可诱导较低水平的抗体免疫保护反应,同时也可引起较低水平的病毒血症。
- 王冬梅李闻孙杨杨李想通许瑞勤魏凤灵张留君冯延马思续杨国宇夏平安张改平
- 关键词：PRRSV仔猪病毒血症中和抗体
- 抗猪唾液素粘附素胞外区抗体的活性研究
- 引言由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖与呼吸综合征己成为危害全球养猪生产的重要经济性疫病之一.病毒侵染细胞的过程可分为吸附、侵入、脱壳、病毒各种组成成分的合成、病毒粒子的装配和释放等.但对于有囊膜的病毒而...
- 杜东颖王冬梅冯亚琼崔春晓郭嘉张莹莹夏平安
- 猪CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用研究
- 目的 研究CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用.材料和方法 本试验用生物学软件分析猪CD163分子的结构，采用RT-PCR的方法将猪CD163分子胞外区分为四个片段进行扩增，并分别克隆到PET-32a原核表达...
- 冯亚琼杜东颖王冬梅崔春晓秦运杰李娜娜杨青原夏平安张改平
- PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应被引量：3
- 2014年
- 目的：为研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒（ Porcine reproductive and respiratory syndrome virus ， PRRSV）的免疫抑制反应。方法：本研究将含有200个TCID50的PRRSV、脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）（100 ng/ml）和纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG（550μg/ml）分别处理猪肺泡巨噬细胞（ Pulmonary alveolar macrophages cell ，PAM），同时用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG处理PAM细胞后接种PRRSV，并设PAM细胞对照组。各组分别培养12、24、36、48、60、72 h后收集细胞及上清，用已经建立的绝对荧光定量PCR方法检测接毒组不同时间段的PRRSV复制水平，并用相对荧光定量PCR方法检测各组PAM细胞中IFN-α、TNF-α的mRNA转录水平。结果：PRRSV在感染PAM细胞后12～24 h期间可促进IFN-αmRNA转录水平，36～72 h期间抑制IFN-αmRNA转录水平，之后IFN-α的mRNA转录水平恢复正常；TNF-αmRNA转录水平在感染后12～72 h均略微上调。 LPS处理PAM细胞后，IFN-α、TNF-αmRNA转录水平均上调。用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG处理猪PAM细胞后，选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ，IFN-α、TNF-αmRNA转录水平显著下调，用PRRSV感染选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ后显著抑制抗病毒因子IFN-α、TNF-αmRNA转录水平。结论：FcγRⅢ的选择性激活抑制了宿主细胞的抗病毒因子水平及在PRRSV感染过程中的天然抗病毒免疫反应。
- 李娜娜王冬梅杜东颖秦运杰夏平安杨明凡崔保安
- 关键词：IFN-Α
- 抗体在PRRSV感染PAM中的作用
- 目的：本试验通过研究IgG对PRRSV的增殖情况的影响,来探讨抗PRRSV特异性和PRRS非特异性抗体在PRRSV-ADE中的作用。方法：本研究分别将抗PRRS特异性IgG(2.64mg/ml)和非特异性IgG(2.63...
- 杨青原秦运杰王冬梅杜东颖夏平安杨明凡
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞感染免疫复合物基因工程抗体
- 文献传递
- 抗体在PRRSV感染PAM中的作用
- (目的)本试验通过研究IgG对PRRSV的增殖情况的影响,来探讨抗PRRSV特异性和PRRS非特异性抗体在PRRSV-ADE中的作用。(方法)本研究分别将抗PRRS特异性IgG(2.64mg/ml)和非特异性IgG(2....
- 杨青原秦运杰王冬梅杜东颖夏平安杨明凡
- 关键词：PRRSV免疫复合物抗体PAM
- 文献传递
- 猪唾液素黏附素胞外区在PRRSV感染PAM细胞中的作用被引量：1
- 2015年
- 采用新的试验方法制备出纯度较高的抗猪Sn的鼠纯化IgG,并证实此种抗体可以阻碍PRRSV感染PAM,为研究猪Sn各结构域的作用提供参考,为进一步研究PRRSV侵入宿主的作用机制奠定基础。本试验分8个片段克隆猪Sn胞外区功能结构域（第2-17结构域）,并分别构建重组表达质粒,转化到BL21进行诱导表达。通过优化蛋白表达条件,制备其重组蛋白,将8种重组蛋白混匀后制成混合抗原（SnE）免疫小鼠以制备其多克隆抗体血清,用间接ELISA的方法检测高免血清的效价,分离并收集血清。采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清,得到纯度较高的鼠抗猪SnE抗体。无菌灌冲猪肺脏收集原代PAM至24孔培养板中,培养6h后,用抗Sn150（第1结构域）、SnE和Sn150＋SnE等抗原的鼠纯化IgG以及鼠阴性IgG和PBS分别处理PAM,1h后用200CID50PRRSV感染PAM,分别在感染24、48h后用已建立的PRRSV实时荧光定量PCR方法检测感染细胞的病毒拷贝数。结果显示,PRRSV感染24h和48h时后,鼠抗猪Sn150抗体组的PRRSV mRNA拷贝数与阴性IgG组相比较均差异较小（P〉0.05）;而鼠抗猪SnE抗体和Sn150＋SnE混合抗体组的PRRSV mRNA拷贝数均显著低于对应的阴性IgG组,且鼠抗猪SnE抗体组24h和48h时PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG组的0.75倍（P〈0.001）和0.74倍（P〈0.001）,Sn150＋SnE混合抗体组24h和48h时的PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG的0.83倍（P〈0.01）和0.76倍（P〈0.001）。结果表明,鼠抗猪SnE抗体和Sn150＋SnE混合抗体封闭后PRRSV感染PAM的能力降低,且效果显著,提示PRRSV的吸附和内吞作用可能与pSn整个胞外区都有密切的关系。
- 秦运杰李娜娜王冬梅崔春晓冯亚琼杜东颖张莹莹杨青原杨明凡夏平安张改平
- 关键词：多克隆抗体PRRSV
- PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应
- 为了研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)免疫抑制反应,本研究采用将含有200个TCID50的PR...
- 杨青原秦运杰王冬梅杜东颖夏平安杨明凡崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因复制
- 文献传递
- 脂多糖对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的抗病毒免疫反应的影响
- 引言猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起猪的一种高度接触性传染病,各日龄猪均可感染[1]。PRRSV主要攻击免疫细胞,如肺泡巨噬细胞、单核细胞,且在感染到其他器官之前在猪肺巨噬细胞中大量复制[2],其也可在扁...
- 王冬梅冯亚琼崔春晓李娜娜杜东颖秦运杰付朋飞夏平安
