王子良
- 作品数：7 被引量：12H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省高等学校自然科学研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 人胃癌细胞NGAL基因启动子区TPA核心反应元件
- 本发明涉及基因表达调控，公开了人胃癌细胞NGAL基因启动子区TPA核心反应元件，并将启动子序列逐渐缺失和部分调控元件被修饰的调控序列插入报告基因上游构建了一系列真核表达质粒，转染哺乳动物细胞瞬时表达，确定了人NGAL基因...
- 李恩民袁华敏许丽艳常静霞王子良
- 文献传递
- 人肺癌细胞NGAL基因启动子区转录调控元件
- 本发明涉及基因表达调控，公开了一种人肺癌细胞的NGAL基因启动子区转录调控元件。本发明首次鉴定了人肺癌细胞NGAL基因启动子区，并将5′端序列逐渐缺失和部分调控元件被修饰的启动子序列插入报告基因上游构建了一系列真核表达质...
- 李恩民常静霞许丽艳袁华敏王子良
- 文献传递
- NGAL基因5′侧翼区转录调控元件的分段定位鉴定被引量：11
- 2004年
- 目的 :对中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)基因 5′侧翼区的转录调控元件进行分段定位鉴定。方法 :以双荧光素酶报告基因检测系统检测NGAL基因 5′侧翼区 ( -14 3 1～ +84)转录调控元件与转录调控蛋白之间的相互作用。结果 :在NGAL基因 5′端 -945～ -65 8和 -65 7～ -4 172个区段发现了转录增强子元件与转录激活蛋白之间的相互作用 ,而在 -4 16～ -15 2区段则发现了转录沉默子元件与转录抑制蛋白之间的相互作用。结论 :在NGAL基因5′侧翼转录调控区可能至少存在着 2个转录增强子元件和
- 许丽艳李恩民蔡唯佳王子良牛永东沈忠英曾毅
- 关键词：食管癌细胞基因表达调控荧光素酶
- 质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响
- 2005年
- 背景与目的 :探讨影响嵌套缺失反应的重要因素 ,找出相应的解决方案。材料与方法 :以构建好的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin,NGAL)基因5’端调控区质粒pGLB_G6为研究对象,采用碱裂解法、聚二乙醇纯化法及QIAGEN试剂盒等3种不同方法制备该质粒 ,分别研究ExoⅢ对它们进行非特异性切割的敏感性 ,选出对ExoⅢ不敏感的质粒制备方法 ;在22℃和37℃分别进行缺失反应 ,琼脂糖凝胶电泳监控 ,以确定缺失反应是否已经发生 ;应用PCR技术与限制性内切酶酶切相结合的方法鉴定缺失子。 结果 :QIAGEN试剂盒制备的质粒对ExoⅢ的非特异性切割最不敏感 ,可用于进行下一步的缺失反应 ;在22℃进行缺失反应时 ,电泳鉴定发现DNA片段的长度没有明显的变短 ,而在37℃时 ,同一反应体系的DNA片段长度明显缩短 ;进一步用限制性内切酶酶切可筛除PCR中的假阳性 ,获得准确的缺失子。 结论 :质粒的质量是确保进行特异性缺失反应的关键因素 ,通过QIAGEN试剂盒制备的质粒质量较好 ;设立一个37℃缺失对照管可作为判断低温条件下是否发生缺失的标准 ;PCR技术与限制性内切酶酶切相结合的方法鉴定缺失子 ,可确保获得特异的缺失子。
- 王子良许丽艳李恩民
- 关键词：影响因素NGAL基因
- 酵母双杂交筛选NGAL相互作用蛋白
- 2005年
- 目的:中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋 白(neutrophilgelatinase assiociatedlipocalin, NGAL)功能不明,籍筛选与之相互作用蛋白, 构筑相互作用图谱,为揭示其功能提供新途径。 方法:利用蛋白质相互作用原理,应用酵母双杂 交技术,构建pGBKT7 NGAL载体,以NGAL 为诱饵,在人类骨髓cDNA文库中筛选与之相 互作用蛋白的基因。结果:通过酵母交配筛库、 一对一验证和β gal分析筛选出40个阳性克 隆;测序,利用网上数据库(http://www.ncbi. nlm.nih.gov)对序列进行比对,初步确定了31 种基因,其中11种为未知基因,20种为已知基 因。已知基因中含有编码区的有LGALS1、 MT2A、COX1、RNP24、ATP1B3、IGL、IGH VDJ、RARRES2、GYPA、NEB和NPC2。结论: 筛选得到31种可能与NGAL相互作用蛋白的 基因,这为研究NGAL功能及作用机制提供了 新途径。
- 麦瑞琴许丽艳方王楷韩溟牛永东王子良李恩民
- 关键词：癌基因蛋白相互作用
- KEGG及其在顺式作用元件预测中的应用被引量：1
- 2003年
- 随着生物信息学的飞速发展,与之相应的各种类型的数据库不断涌现,KEGG数据库便是其中之一。本文详细介绍了KEGG数据库的主要内容及其功能,并以运用该数据库Mat Inspector V2.2软件预测NGAL基因5’端转录调控区增强于元件为例说明了KEGG数据库在基因转录调控研究中的应用。
- 王子良许丽艳李恩民
- 关键词：生物信息学
- 食管癌细胞NGAL5′侧翼区存在TPA应答元件
- 2006年
- 在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中,NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)过表达,提示食管癌细胞NGAL转录调控区可能存在TPA应答元件.为了对食管癌细胞NGAL的这一TPA应答元件进行分段定位鉴定,首先将NGAL5′侧翼区不同长度片段-1 431^+84-、1 137^+84、-945^+84、-657^+84、-416^+84和-152^+84等依次插入质粒pGLP,构建NGAL/pGLP系列报告基因荧光素酶表达载体pGLP-1431、pGLP-1137、pGLP-945、pGLP-657、pGLP-416和pGLP-152;然后将上述质粒分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,最后用5 ng/ml的TPA刺激转染的EC109,检测报告基因荧光素酶活力,综合判定报告基因荧光素酶活力变化趋势,并以此对食管癌细胞NGAL5′侧翼区TPA应答元件进行分段定位.实验结果表明,食管癌细胞NGAL5′侧翼-657^-417区段内存在着较强的TPA应答元件.生物信息学分析显示,NGAL5′侧翼-657^-417区段至少存在3个潜在的TPA应答元件,表明有应答TPA刺激的结构基础.这些研究有助于从分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL基因过表达机制.
- 许丽艳李恩民王子良牛永东蔡唯佳袁华敏常静霞沈忠英曾毅
- 关键词：NGAL基因食管癌细胞基因表达调控
